麻疹病毒血凝素基因助融合活性区的定位

在利用ＰＣＲ方法克隆麻疹病毒Ｌ４株血凝素（ＨＡ）基因的过程中,获得了一个助融合活性丢失的Ｂ号克隆。其氨基酸序列与具有助融合活性的Ａ号克隆相比,有４个位点不同,分别位于９６、１１７、１４８及５４３位。通过基因间部分序列的交换及定点回复突变,获得了相应位点的突变体。对这些突变体的助融合活性研究发现,１１７、１４８及５４２位氨基酸的改变不影响助融合活性,而当９６位脯氨酸定点回复突变为亮氨酸后,Ｂ克隆血凝     

麻疹病毒融合蛋白(F)和血凝素(HA)在痘苗病毒中的表达

将麻疹病毒F和HA基因插入到痘苗病毒中,分别处于痘苗启动子P7.5与P11控制下,获得重组病毒vLmF和vCmH。用抗F多肽抗体和HA单抗进行ELISA检测,结果表明,两株重组病毒均能表达相应的麻疹蛋白。蛋白印迹显示重组病毒表达产物在分子大小,蛋白切割和糖化方面与麻疹病毒糖蛋白一致。两株重组病毒分别免疫家兔都能产生较高滴度的麻疹抗体,这些抗体具有中和作用和血溶抑制作用。此外,vCmH产生的抗体还具有血凝抑制作用。     

河南省麻疹病毒血凝素蛋白基因特征分析

为了解河南省流行的麻疹野病毒的血凝素基因特征,为制定消除麻疹策略提供依据,本文对2008~2012年河南省麻疹病毒分离株进行了血凝素基因核苷酸氨基酸特征研究。该研究采用病毒分离、RT-PCR方法获取病毒血凝素基因扩增产物,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。结果显示,河南省2008~2012年共分离麻疹病毒12株,测序结果显示均为H1a基因型,核苷酸同源性98.0%~100%,氨基酸序列同源性97.2%~99.8%,通过与Edmonston-wt.USA/54/A毒株进行比较,在氨基酸240位点发生丝氨酸(S)突变成天门酰胺(N)的突变。上述检测结果显示,河南省2008~2012年麻疹野病毒流行优势株为H1a基因型,同源性较高,而且氨基酸改变导致糖基化位点的缺失,是麻疹病毒变化的共同特征。     

麻疹病毒L4株血凝素基因的克隆与表达及免疫原性

从部分减毒的麻疹病毒Ｌ４株感染的Ｖｅｒｏ细胞中提取ｍＲＮＡ,进行逆转录及ＰＣＲ扩增,克隆到了长１．９ｋｂ的４个血凝素基因克隆,ＤＮＡ序列分析发现,Ｌ４株的血凝素甘因有４个碱基与Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ株不一致。造成了３个氨基酸差异,这４个克隆在重组痘苗中的表达后,３个克隆的表达产物均表现出良好的血凝活性,助融合活性（Ｆｕｓｉｏｎｈｅｌｐｅｒ）和较强的免疫原性,表达血凝素分子量分别为未糖化的６８ｋＤ以及糖     

麻疹病毒血凝素基因工程抗原及其抗原性检测(英文)

将麻疹病毒 (Nepal株 )的血凝素 (hemagglutinin)基因插入真核表达载体pIRES EGFP ,并在HeLa细胞中表达 .因其较低的表达量 ,所以将其截短 ,去除跨膜区 .使这个截短的HA基因与绿色荧光蛋白基因融合 ,并克隆至原核表达载体pET 2 8b中 .将重组质粒转入大肠杆菌中表达 ,产生了分子量约为 90kD的融合蛋白 .通过ELISA和Western印迹来检测这个基因工程蛋白的抗原性 .在检测一系列的血凝素阳性或阴性的人血清中 ,这个融合蛋白的阳性检出率为 90 % ,阴性检出率为 10 0 % (与市售麻疹病毒诊断试剂盒相比较 ) .由于此HA蛋白是原核表达产物 ,回避了真核表达系统复杂的操作过程和昂贵的费用 ,所以 ,这个麻疹病毒血凝素基因工程抗原有望成为一种新型、便捷的麻疹病毒诊断试剂     

同时表达麻疹病毒L4株HA和F蛋白及人白细胞介素2（IL2）的重组痘苗病…

构建了同时表达麻疹病毒Ｌ４株ＨＡ和Ｆ基因及人白细胞介素２（ＩＬ２）的重组痘苗病毒疫苗株ＲＶＪＭＬＨＡＦＫＩＬ２。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示,ＨＡ、Ｆ和人ＩＬ２基因均在痘苗病毒中稳定有效表达,且产物与天然蛋白相近,ＨＡ分子有糖化的７９ｋＤ和非糖化的６８ｋＤ两种形式．Ｆ分子以６０ｋＤ的前体Ｆ０,４３ｋＤ的Ｆ１和１８ｋＤ的Ｆ２三种式存在,表达产物的血凝效价为１：８,血溶活性ＯＤ５４０的测定结果是０．     

影响麻疹病毒血凝素滴度的某些因素的探讨

自从Peries等报告麻疹病毒具有凝集猴血球的特性之后,近来有不少作者证实了这一研究。但麻疹病毒的血凝滴度较低,作血凝抑制试验时,一般均采用理化方法将血凝素加以浓缩。我们曾对麻疹病毒的血凝性质进行研究,可以不经浓缩而获得滴度较高的血凝素。关于应用麻疹病毒血凝抑制试验检查麻疹抗体的研究,已有报告。现将影响麻疹病毒血凝素滴度的某些因素报告如下:     

一种以我国痘苗病毒天坛株血凝素基因为选择标记的新型系列表达载体的构建

本文作者从痘苗病毒天坛株Sal I基因文库中确定并分离了痘苗病毒血凝素(HA)基因并组建了以HA为选择标记的系列表达载体,可用于不同结构和不同要求的外源基因在真核细胞中的表达。本系列载体的优点是,在病毒重组过程中可避开传代细胞系,一次性选择出可供疫苗使用的重组病毒。而HA阴性的重组病毒的毒力在家兔皮内试验中,未见明显下降。     

同时表达麻疹病毒L4株HA和F蛋白及人白细胞介素2(IL2)的重组痘苗病毒疫苗株的构建

构建了同时表达麻疹病毒ＬＡ株ＨＡ和Ｆ基因及人白细胞介素２（ＩＬ２）的重组痘苗病毒疫苗株ＲＶＪＭＬＨＡＦＫＩＬ２。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ结果显示,ＨＡ、Ｆ和人ＩＬ２基因均在痘苗病毒中稳定有效表达,且产物与天然蛋白相近。ＨＡ分子有糖化的７９ｋＤ和非糖化的田ｋＤ两种形式;Ｆ分子以６０ｋＤ的前体Ｆ０、４３ｋＤ的Ｆ１和１８ｋＤ的Ｆ２三种形式存在。表达产物的血凝效价为１：８,血溶活性ＯＤ５４０的测定结果是Ｏ３７。该重组病毒免疫新西兰白兔及Ｃ５７小鼠,可以产生抗麻诊病毒ＨＡ和Ｆ蛋白的特异性ＥＬＩＳＡ（１：６４４～１６００）、血凝抑制（１：２５６～５１２）、血溶抑制（１：８０～１６０）和ＮＴ（１：６４０）抗体。接种兔及裸鼠后的毒力反应,明显低于只表达ＩＬ２的重组痘苗病毒疫苗株ＲＶＪ１２３,表现为兔皮肤红肿范围小,持续时间短,皮肤无坏死;裸鼠毒力的结果,表现出ＲＶＪＭＬＨＡＦＫＩＬ２病毒只存留于接种局部,而且滴度大大降低,未发现该病毒向其它脏器播散和增殖。麻疹重组痘苗病毒疫苗株的构建为该疫苗株的人体免疫观察奠定了基础。     

新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因序列分析

本研究报道了新城疫病毒（ＮＤＶ）中国标准强毒株Ｆ４８Ｅ８融合蛋白（Ｆ）基因的序列。该基因核苷酸序列长度为１７００ｂｐ,编码由５５３个氨基酸组成的Ｆ０多肽。Ｆ０酶切激活部位序列为ＲＲＱＲＲ↓Ｆ,具有ＮＤＶ强毒的特征。Ｆ０中有３个主要由疏水性氨基酸组成的区域和６个可糖基化位点。经比较,ＮＤＶＦ４８Ｅ８株和Ｍｉｙａｄｅｒａ株、ＴｅｘａｓＧＢ株的氨基酸同源性分别为９３．６４％和９２．４１％。     

粉纹夜蛾核型多角体病毒（TnNPV）p35基因功能的研究

细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）或细胞程序性死亡（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ,ＰＣＤ）,最早被定义为一种有秩序、受控制并按某种预定程序发展的生理性自然死亡过程〔１〕。诱导细胞发生凋亡的因素很多,而病毒感染是常见的导致细胞凋亡的重要因素之一。由...     

Epstein-Barr病毒基因工程活疫苗人体免疫的初步研究

Epstein-Barr(EB)病毒的原发感染发生在儿童时期,在我国3～5岁儿童的感染率为70％～90％。感染后终生带毒,并经唾液不断排出病毒。我国南方是鼻咽癌高发区,其发病率和死亡率均占恶性肿瘤的第一位。早期诊断方法的改进和早期治疗,使鼻咽癌治疗后的5年生存率明显增加,但不能降低发病率。EB病毒疫苗有可能成为控制该病的有效手段之一。 Epstein等人从淋巴母细胞株(B95-8细胞)细胞表面提取EB病毒膜抗原(MA),用于免疫棉顶猴能产生中和抗体。免疫动物能抵抗EB病毒攻击后所诱发的恶性淋巴瘤。该中和抗体在体外能中和EB病毒的转化活性。EB病毒的主要膜抗原(MA)是由分子量220kD和     

柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达

将编码柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）衣壳蛋白ＶＰ１和ＶＰ２的基因,分别克隆到具有７．５ｋ启动子的痘苗病毒表达载体ｐＧＪＰ５上;将ＣＶＢ３衣壳蛋白全基因克隆到具有Ｔ７启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１上,并筛先到相应的重组痘苗病毒ＶＶＰ１、ＶＶＰ２和ＶＶＰ／４／２／３／１。ＶＶＰ１和ＶＶＰ２稳定表达产物为ＣＶＢ３衣壳蛋白ＶＰ１和ＶＰ２,而ＶＶＰ４／２／３／１为一无分泌性的多聚蛋白,且这三种表达产物均属无分泌性     

表达乙型肝炎病毒表面抗原和Epstein-Barr病毒膜抗原的双价痘苗病毒的组建

从痘苗病毒天坛株分离了晚期11k蛋白编码基因的启动子,以痘苗病毒天坛株为载体,构建了双价的重组痘苗病毒。分别在7.5k和11k蛋白基因启动子的控制下,表达乙型肝炎病毒表面抗原和EB病毒的膜抗原。用重组痘苗病毒免疫的家兔,同时产生对这两种抗原的抗体。免疫电镜下观察到乙型肝炎病毒表面抗原颗粒。     

汉滩病毒A9株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定

为发展国产化肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒基因工程疫苗,选择了汉滩病毒Ａ９株Ｍ基因片段为目的基因,构建转染质粒ｐＪＳＢＡ９Ｍ。以携带Ｌａｃ基因的重组病毒为亲本,使表达载体ｐＪＳＢ－Ａ９Ｍ上的Ｍ片段与痘苗病毒内的Ｌａｃ基因重组,将Ｌａｃ置换成Ａ９Ｍ片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒,经ＰＣＲ扩增证实Ａ９Ｍ片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的Ｖｅｒｏ Ｅ６细胞,用抗糖蛋白单克隆抗体（ＨＣＯ２、     

Membrane Fusion Triggering: THREE MODULES WITH DIFFERENT STRUCTURE AND FUNCTION IN THE UPPER HALF OF THE MEASLES VIRUS ATTACHMENT PROTEIN STALK*

The measles virus (MV) fusion apparatus consists of a fusion protein and an attachment protein named hemagglutinin (H). After receptor-binding through its cuboidal head, the H-protein transmits the fusion-triggering signal through its stalk to the fusion protein. However, the structural basis of signal transmission is unclear because only structures of H-heads without their stalk have been solved. On the other hand, the entire ectodomain structure of the hemagglutinin-neuraminidase protein of another Paramyxovirus revealed a four-helix bundle stalk. To probe the structure of the 95-residue MV H-stalk we individually substituted head-proximal residues (positions 103–153) with cysteine, and biochemically and functionally characterized the resultant proteins. Our results indicate that most residues in the central segment (positions 103–117) can be cross-linked by engineered disulfide bonds, and thus may be engaged in a tetrameric structure. While covalent tetramerization disrupts fusion triggering function, disulfide bond reduction restores it in most positions except Asp-113. The next stalk segment (residues 123–138) also has high propensity to form covalent tetramers, but since these cross-links have little or no effect on function, it can conduct the fusion-triggering signal while remaining in a stabilized tetrameric configuration. This segment may act as a spacer, maintaining H-heads at an optimal height. Finally, the head-proximal segment (residues 139–154) has very limited propensity to trap tetramers, suggesting bifurcation into two flexible linkers clamped by inter-subunit covalent links formed by natural Cys-139 and Cys-154. We discuss the modular structure of the MV H-stalk in the context of membrane fusion triggering and cell entry by Paramyxoviruses.     

表达甲型肝炎病毒抗原的重组痘苗病毒(VMS11 HAV25)的免疫原性

甲型肝炎(甲肝)病毒基因全部开放读码框架cDNA重组于痘苗病毒天坛株DNA的HindⅢM片段,获得了重组痘苗病毒VMS11HAV25。用10~7PFU或10~8PFU病毒量皮内免疫家兔,能诱生甲肝病毒抗体,其滴度与免疫剂量、免疫次数及间隔有关。组织培养中和试验表明,该抗体具有中和甲肝病毒的能力。VMS11HAV25的免疫效果似优于本实验室已报道的另一株甲肝病毒基因重组于TK区的重组痘苗病毒Re41。