不同倍性鱼的血细胞和精子DNA含量比较

我们以前的研究表明, 以红鲫 (2n=100) 为母本及湘江野鲤 (2n=100) 为父本的杂交后代的F1-F2 为二倍体 (2n= 100)。在二倍体 F2 个体中, 存在能分别产生二倍体卵子和二倍体精子的雌、雄个体, 二倍体卵子和二倍体精子结合, 形成了两性可育的四倍体鱼 (F3)。目前四倍体鲫鲤已连续繁殖了 12 代 (F3-F14), 形成了一个遗传性状稳定的四倍体鱼群体 (4n= 200) (Liu et al.,2001; 孙远东等, 2003)。雌性四倍体鲫鲤产生的二倍体卵子经紫外线照射的散鳞镜鲤精子激活后,无须染色体加倍处理, 可发育为全雌性二倍体雌核发育后代 (G1) (2n=10…     

基于流式细胞术的乌饭树核DNA含量(2C-值)测定

核DNA含量(2C-值)是描述植物生物多样性的一个重要特征参数。该研究利用流式细胞仪检测越橘属植物乌饭树核DNA含量,建立了适合乌饭树的流式细胞术测定方法:以野生乌饭树的嫩叶为材料,以已知核DNA含量的水稻品种‘日本晴’为内标,采用GPB解离液,细胞核悬液加入50μL獉mL-1碘化丙啶染色5 min即可上机检测。结果表明:(1) 9个乌饭树单株的核DNA含量平均值为(1.22±0.03) pg,最小值为1.18 pg,最大值为1.27 pg。(2)检测结果与已知的越橘属二倍体植株的2C-值含量相似,且不同地理来源的单株DNA含量没有显著差异(P>0.05),推测这9个单株为二倍体植株。(3)测定的乌饭树核DNA含量(2C-值)可丰富越橘属植物的C-值库;基于流式细胞术建立的乌饭树核DNA含量测定方法可为该属其他植物的相关研究提供借鉴。     

精子介导外源DNA转基因技术

转基因技术在现代生命科学研究、药物开发、临床治疗、遗传育种等方面发挥重要作用.精子介导转基因技术(sperm-mediated gene transfer,SMGT)是以精子细胞为载体,携带外源基因进入卵细胞受精,从而获得转基因动物.该文回顾了SMGT的历史发展,简述了SMGT的分子机制,包括外源DNA与精子的相互作用...     

精子DNA损伤检测技术的研究进展

精子DNA完整性与男性生育力之间的关系是近些年来生殖医学研究领域的热点之一,精子DNA损伤已成为反映男性生育力的一个新指标。精子DNA的损伤原因有很多,有时可能是多种因素共同作用的结果。生殖系统疾病、环境污染、吸烟、微量元素及各种理化因素等原因都可能导致精子DNA完整性受损。常见的精子DNA完整性检测技术有原位末端标记法、精子染色体扩散实验、精子染色质结构分析试验、单细胞凝胶电泳、荧光原位杂交技术和8-羟基脱氧鸟苷测定法等。随着检验技术的不断发展,关于精子DNA损伤的检测技术也在不断更新改进。本文主要就近十年来精子DNA损伤机制、检测技术的相关研究进展作一综述,提示现有的精子DNA完整性检测技术尚不能满足临床和科研需要,急需找到一种理想的检测方法为男性不育的诊断和治疗提供重要依据。     

线粒体呼吸功能与精子活力、核DNA损伤的相关性分析

为探讨线粒体呼吸功能与精子活力、核DNA损伤程度之间的相关性,按WHO标准收集34例不同活力的精液标本,采用蔗糖差速离心法或密度梯度离心法提取精子线粒体,通过铂氧电极-溶氧仪测定线粒体呼吸耗氧率并计算状态III呼吸、状态IV呼吸、呼吸控制率（RCR）、磷氧比（P／0）及氧化磷酸化效率（0PR）;应用精子染色质扩散（sperm chromatin dispersion,SCD）实验检测精子DNA损伤情况。结果表明：不同活力精子线粒体状态Ⅲ呼吸耗氧量之间具有显著差异俨〈0．01）;弱精子症组RcR和OPR与正常对照组比较,分别降低了17．03％（P〈0．05）和40．74％（P〈0。01）;精子DNA损伤程度与精子活力、状态III呼吸及OPR均呈极显著负相关（r值分别是-0．812、-0．788和-0．696）。以上结果提示：精子线粒体呼吸耗氧和氧化磷酸化功能与精子活力之间存在着密切的联系;精子DNA（包括mtDNA）损伤可能影响精子的正常功能。     

定量细胞化学分析大蒜油抗癌的作用

本文应用细胞化学和显微分光光度计对癌细胞的 DNA,ACP,ANAE、SDH 和G6PDH 进行定量测定,又用流式细胞计分析癌细胞 RNA 含量的变化.实验证明大蒜油能明显抑制癌细胞 DNA 与 RNA 合成,并减低五种酶的活性。表明大蒜油能影响癌细胞的核酸代谢、能量代谢及功能活动、抑制癌细胞的分裂增殖,从而起到抗癌效应.     

类核沉降法分析247例癌症病人和正常人的DNA修复能力

应用新建立的类核沉降法,分析了108例食管癌、肺癌和卵巢癌患者以及139例正常人DNA修复能力。外周血淋巴细胞受2.5μJ/mm~2紫外线照射后,大多数正常人11小时完成DNA修复,而大多数癌患者17小时尚未能完成修复。     

对几种百合科植物基因组大小的评价

利用孚尔根显微分光光度法测定了洋葱（ＡｌｌｉｕｍｃｅｐａＬ．）、头（Ａ．ｃｈｉｎｅｓｅＧ．Ｄｏｎ,）、分葱（Ａ．ａｓｃａｌｏｎｉｕｍＬ．）和黄花（ＨｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓｃｉｔｒｉｎａＢａｒｏｎｉ）４种百合科植物根尖的细胞核ＤＮＡ含量,并根据各自的核型得出了每个物种的基因组大小。它们分别为：洋葱１８．１６×１０９ｂｐ、头１２．８４×１０９ｂｐ、分葱１０．４４×ｌ０９ｂｐ和黄花７．４８×１０９ｂｐ。由此认为,基因组是生物体维持其生存所需的全套基因。它反映了生物物种全部的、特定的遗传信息。与胞核ＤＮＡ含量相比较,基因组大小更适合作为生物研究的特征参数。这不仅对细胞学、分类学和遗传学,而且对分子生物学亦有一定的意义。     

精子DNA甲基化异常与男性不育

DNA甲基化／去甲基化是表观遗传学最重要的内容并可以控制基因的表达和印迹,越来越多的研究显示DNA甲基化异常与不育男性精子发生异常、特定肿瘤的发生、神经系统疾病、Rett综合征等有关。文章通过总结近来的相关研究资料来阐述精子发生过程中的DNA甲基化状态的改变,探讨精子DNA的甲基化异常与男性不育之间的联系,旨在为男性不育的治疗提供新的临床思路。     

牵牛属生殖细胞和精细胞中细胞器DNA的研究

用ＤＡＰＩ荧光技术观察了大花牵牛（ Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ ｌｉｍ ｂａｔａ Ｌｉｎｄｌ．）和圆叶牵牛（Ｐ． ｐｕｒｐｕｒｅａ（Ｌ．） Ｖｏｉｇｈｔ）生殖细胞的细胞质ＤＮＡ及其在精细胞形成过程中的动态。牵牛属这两个种的生殖细胞均为细长形,具有大量细胞器ＤＮＡ。刚形成的一对精细胞大多数一端钝,另一端呈尾状。较后期的精细胞多呈凸透镜状。生殖细胞分裂形成的一对精细胞多是同型的,也有的表现为异型。精细胞的核多偏于细胞的一端。在细胞质中有大量细胞器ＤＮＡ分布。精细胞中的细胞器ＤＮＡ 荧光点在大小及荧光强度上有所不同,可能代表线粒体和质体这两种不同的细胞器ＤＮＡ。大花牵牛与圆叶牵牛之间,无论是生殖细胞或精细胞在细胞形状和细胞质ＤＮＡ 分布状况上基本相似。一个明显的差异是,后者的细胞质ＤＮＡ 荧光点体积较小和荧光弱。研究表明,精细胞存在具有ＤＮＡ 的细胞器,为牵牛花细胞质具有双亲遗传或父系遗传的潜能提供了细胞学证据。本文还对研究的两个种的精细胞存在同型和异型的现象,以及精细胞在核质比率上的特点与质体双亲遗传的关系进行了讨论     

膀胱肿瘤DNA含量、核形态学特点与AgNORs计数的研究

应用图像分析技术对４３例膀胱肿瘤细胞ＤＮＡ含量和核形态参数进行了定量测定,同时进行核仁组成区（ＡｇＮＯＲｓ）计数研究,结果表明：肿瘤细胞的ＤＮＡ含量及干系水平与组织学分级基本一致,ＤＮＡ含量及干系水平越高,则恶性程度越高,ＤＮＡ含量与核面积及核最短直径的变化里正相关性,与ＡｇＮＯＲｓ的计数无明显相关性。这三项检测方法对肿瘤生物学行为判断均有重要的参考价值。     

三个鲫品系DNA含量的比较研究

采用流式细胞术 (FCM)对红鲫、彭泽鲫、异育银鲫进行红血球DNA含量的检测分析比较 ,以鉴定它们的倍性。结果显示 ,红鲫红血球的DNA含量是 3 0pg ,彭泽鲫是 4 7pg ,异育银鲫是 4 8pg。显而易见 ,彭泽鲫的DNA含量是二倍体红鲫的 1 57倍 ,异育银鲫的DNA含量是红鲫的 1 6倍。采用肾细胞直接制作染色体的方法进行红鲫、彭泽鲫、异育银鲫的染色体倍性鉴定 ,结果红鲫的染色体数目是 10 0 ,为二倍体 (2n =10 0 ) ,彭泽鲫的染色体数目是 162 ,为三倍体 (3n =162 ) ,异育银鲫的染色体数目是 156— 162 ,为三倍体 (3n =156— 162 )。研究证明 :不同品系鲫的DNA含量高低与染色体的倍性有显著的正相关性     

生精细胞及精子赖氨酸含量的研究

本实验取１０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠的睾丸和附睾,睾丸石蜡切片,附睾精子涂片后用苯胺蓝染色显示赖氨酸含量。结果是睾丸生精小管中精原细胞和精母细胞染色较深即赖氨酸含量较高,精子细胞和精子染色渐淡即赖氨酸含量降低,而附睾精子显示,在附睾头部的精子染色较深,附睾尾部的精子几乎不着色,应用显微分光光度计测定附睾精子,计算出头部的精子赖氨酸含量在１左右,尾部的精子赖氨酸含量接近于零。本实验还检测了１０例正常人及１０例不育者精子的赖氨酸,结果为正常人精子的赖氨酸含量较低,不育者精子赖氨酸含量高且畸形率也高。提示精子赖氨酸含量高是核蛋白转型异常的征象,可能是男性不育的一个重要原因。     

长牡蛎精子超低温冷冻后超微结构损伤研究

采用程序降温仪分步降温冷冻保存长牡蛎（Crassostrea gigas）精液,并用扫描电镜、透射电镜研究了精子的超微结构损伤。超低温冷冻保存后长牡蛎精子的运动率、受精率及孵化率与鲜精无显著差异。鲜精中84.5%的精子形态结构正常,冻精中73%的精子形态结构正常。形态结构正常的精子表现为顶体、质膜、线粒体与鞭毛结构完整、染色质形状规则,顶体、线粒体及中心粒结构正常,鞭毛形态完整、微管结构清晰;形态结构异常的精子表现为顶体脱落、解体,精子头部质膜膨胀、破裂、染色质肿胀、破裂、解体,线粒体移位、脱落、膨胀,嵴退化或消失,鞭毛弯折、断裂,微管解聚。结果显示,以10% DMSO为抗冻保护剂,HBSS溶液为稀释液,1:4的稀释比例,添加海藻糖,采用分步降温法冷冻保存,对长牡蛎精子具有较好的抗冻保护作用,合适的冻存方法可以有效的保护太平洋牡蛎精子冷冻过程中结构损伤。研究有助于长牡蛎种质资源的收集保存及应用。     

褶纹冠蚌精子球的形态和超微结构观察

利用光镜和电镜技术研究了褶纹冠蚌精子球的形态和超微结构.结果表明:精子球呈球形,直径约65-70μm,容纳2300多个精子.从外向内,精子球由非细胞层、表面层和内部区组成.非细胞层薄,厚约0.6μm,易碎.表面层厚约7.5μm,被分隔成许多辐射状排列的小室,单个精子头部位于小室内,指向精子球的中央,而精子的单个鞭毛由精子球的表面伸出.精子质膜在鞭毛领处与表面层相连,相邻精子间无细胞质桥相连.内部区呈球状,内含絮状物质.精子球从雄蚌出水管排出后,位于精子球外周的鞭毛沿固定方向不停地摆动,精子球翻滚着向前运动,且单个精子依次从精子球上脱落下来,最后精子球成为一中空的球,历时120h.       

Sex-sorted bovine spermatozoa and DNA damage: I. Static features

This study examined the static response of Spermatozoa DNA Fragmentation (SDF) after sex selection in bulls using a MoFlo^® SX (Beckman Coulter, Miami FL) spermatozoa sorter to produce three different subpopulations: 1) Spermatozoa bearing X- chromosomes with a purity of 95%, 2) Spermatozoa bearing Y-chromosomes with a purity of 95%, and 3) non-viable spermatozoa. The static response of SDF refers to the baseline values observed for DNA damage when analyzed pre- and post sex-sorting. Results showed that while the baseline level SDF in pre-sorted bull spermatozoa samples ranged from 5.3% to 11% with an average of 7.9% ± 2.1%, the level of SDF obtained in X- and Y-chromosome sorted samples was much lower (3.1% ± 1.9%) and statistical differences were obtained after comparing both groups (P < 0.01). Spermatozoa containing a fragmented DNA molecule tend to be accumulated in the non-viable subpopulation. The baseline SDF level in X- and Y-chromosome sorted subpopulations is reduced, by 63% on average when compared to the values obtained in the neat semen sample. Different bulls exhibit unique SDF reduction efficiencies via the X- and Y-chromosome sex selection process.     

角结膜缘上皮良、恶性病变细胞核DNA原位图像定量分析

应用真彩色医学图像分析技术,对５１例角结膜缘上皮良、恶性病变（其中上皮增生１９例,不典型增生６例,原位癌１４例,鳞状细胞癌１２例）进行了ＤＮＡ原位定量分析研究．结果显示：原位癌和鳞状细胞癌ＤＮＡ含量明显增加,多为高倍异倍体细胞,ＤＮＡ直方圆明显右移,峰值主要位于＞５Ｃ处,≥５Ｃ细胞分别占７８．８９％和７８．３１％;上度增生病变ＤＮＡ含量较低,多为低倍整倍体细胞,ＤＮＡ直方图峰值位于２Ｃ～４Ｃ处,２Ｃ～４Ｃ细胞占８８．５９％;上皮不典型增生病变ＤＮＡ含量介于良性病变和癌之间,ＤＮＡ直方图逐渐右移,２Ｃ～４Ｃ细胞占５８．６２％,≥５Ｃ细胞占４１．３８％。以上数据经统计学处理各组间有显著性差异。表明ＤＮＡ倍性程度与肿瘤的增殖程度呈正相关,高倍异倍体细胞随肿瘤恶性程度的增高而增多。作者认为ＤＮＡ原位图像定量分析可为角结膜缘上皮良、恶性病变的诊断、分级及早期发现癌变趋势提供一个可靠的参考指标。     

甘薯细胞质传递的研究：精细胞的质体和线粒体及其DNA存在的状况

甘薯（ＩｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓＬａｍ．）成熟花粉为二细胞型,在授粉后萌发之前生殖细胞分裂形成精细胞。仍在花粉粒中的两个精细胞大小和形状基本相似,细胞质中含丰富的质体和线粒体。细胞质ＤＮＡ特异荧光显示精细胞及产生它们的前细胞———生殖细胞中均含有丰富的类核。一对精细胞中类核的数量无明显的差异。精细胞中存在两种形态类核,大而荧光强的类核可能为质体类核,而小的荧光弱的类核为线粒体类核。双亲或父系质体遗传在被子植物中是少数,本研究结果为旋花科的除牵牛属和打碗花属外又提供了新的一属具这种遗传方式的细胞学证据。     

流式细胞光度术DNA分析在非何杰金氏淋巴瘤预后中的意义

用流式细胞光度术对一组非何杰金氏淋巴瘤(NHL)存档石蜡标本进行DNA分析。DNA异倍体肿瘤占总例数的47.4％,高、中度恶性组异倍体肿瘤的比例(76.8％和51.9％)分别高于低度恶性组(17.6％)(P<0.05)。S期细胞比例(synthetic phase fraction,SPF)随组织学恶性程度升高而增大,低、中和高度恶性淋巴瘤平均SPF值分别是6.5(0.6—18.8)％,13.5(3.2—37.3)％和23.4(4.4—41.4)％。二倍体和异倍体肿瘤患者的生存率无差别。全部病例中高SPF值肿瘤患者具有生存短的趋向(P=0.1)。低度恶性组内也存在此种趋向(P=0.08)。上述结果表明流式细胞光度术DNA分析对估价非何杰金氏淋巴瘤生物学行为是一种不依赖形态学的有用方法。