神经节苷脂纯化方法的改进

神经节苷脂(ganglioside,Gls)的分离与纯化是研究组织细胞Gls组成、含量及代谢的基本手段。由于Gls在神经以外组织中含量甚微,而且因组织、细胞的不同,影响Gls纯化的因素也不同.在实验过程中常常由于方法选择不当致使实验失敗.本文介绍一种改进的方法,它操作简单,适用于大鼠多种组织,因     

人体子宫内膜中性鞘糖脂和神经节苷脂的含量和组成在月经周期中和妊娠时的变化

从月经周期各期、早妊(6—8周)及足月妊娠子宫内膜中提取、纯化了神经节苷脂(Gls)和中性鞘糖脂(N-GSL),分别测定了其含量。对两类鞘糖脂的组成进行了HPTLC图谱分析。初步观察了不同时期子宫内膜中CMP—NeuAc:LacCer唾液酰转移酶(ST_1)和CMP-NeuAc:CM_3唾液酰转移酶(ST_2)的活性。结果表明:分泌期的GLs总含量低于增生期(P<0.02);分泌期GD_3含量较生长期增多(P<0.01);妊娠后,GM_3含量增加,而GD_3减少;相应地,ST_1活性增高,ST_2活性降低。分泌期CMH含量为增生期的4.7倍。结果提示子宫内膜鞘糖脂含量和组成的变化可能与子宫的功能有关,而且受女性激素水平的影响。     

离心液相色谱法快速分离纯化神经节苷脂

神经节苷脂在脊椎动物的神经组织细胞膜上含量丰富,除有受体的功能外,还有许多其它功能。采用离心液相色谱法,以国产硅胶Ｇ－６０为填料,分离纯化神经节苷脂,取得了满意的效果。经分离后产物的脂结合唾液酸（ＬＢＳＡ）含量,由１４．３％提高到２４．１％。以蛋白质含量为代表的含氮化合物由２２．０％降至９．６％。回收率为９０．２５％．特点是操作简便、周期短、成体低、效果好。优于ｌａｔｒｏｂｅａｄｓ柱层析法。     

猪脑组织总神经节苷脂提取纯化工艺的研究

本文较详细地研究论述了神经节苷脂（Ｇｌｓ）的提取纯化工艺。从猪脑组织中用萃取法获得Ｇｌｓ后,用多孔型弱碱性离子交换树脂３３５和强碱性离子交换树脂７１７对其进行分离纯化,并对工艺过程及产品品质进行了分析和比较研究,实验证明：３３５离子交换层析分离Ｇｌｓ,得率６５．９ｍｇ／１００ｇ湿组织,纯度８０．３％;７１７离子交换层析分离Ｇｌｓ,得率７７．４ｍｇ／１００ｇ湿组织,纯度７６．９％;从工艺过程及产品品质而言,采用多孔型弱碱性离子交换树脂分离提取Ｇｌｓ,具有一定的经济价值。     

微型离心柱法快速分离纯化神经节苷脂

神经节苷脂的分离与纯化是研究组织细胞Gls组成、含量及代谢的基本手段.但是以往的方法周期长、溶剂用量大,为此建立了一种新的微型离心柱快速分离Gls纯化法,标准Gls的回收率为97.64％,ｎ＝7,ＣＶ＜３％,HPTLC图谱显示无丢带现象.纯化样品只需十几个小时,操作简单,溶剂用量小,重复性好,为微量样品组分的研究提供了一个有效的手段.     

总神经节苷脂的简便纯化方法

许多研究者先后提出了多种分离纯化神经节苷脂(Gls)的方法,其中Yu等建立的相继用离子交换剂、吸附剂分别层析的方法在国内较为常用,但其周期较长、步骤较繁。本文将离子交换剂与吸附剂装入同一柱内一次完成Gls的层析纯化,并用含盐氯仿(C)-甲醇(M)混合液(C/M=2/7,V/V,含0.1mol/L NaAc)代替Yu法B液进行洗脱,用国产硅胶代替价格昂贵的Iatrobeads,取得了良好的效果。本法的优点是能节省时间及有机溶媒。     

离心液相色谱法快速分离纯化神经节苷脂

神经节苷脂在脊椎动物的神经组织细胞膜上含量丰富,除有受体的功能外,还有许多其它功能。采用离心液相色谱法,以国产硅胶Ｇ－６０为填料,分离纯化神经节苷脂,取得了满意的效果。经分离后产物的脂结合唾液酸（ＬＢＳＡ）含量,由１４．３％提高到２４．１％。以蛋白质含量为代表的含氮化合物由２２．０％降至９．６％。回收率为９０．２５％。特点是操作简便、周期短、成本低、效果好。优于ｌａｔｒｏｂｅａｄｓ柱层析法。     

重组蛋白质纯化技术

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。     

具不同淋巴道转移潜能小鼠肝癌瘤株细胞膜鞘糖脂比较研究

采用高效薄层层析（ＨＰＴＬＣ）对两株具有不同淋巴道转移潜能的小鼠腹水型肝癌瘤株细胞膜鞘糖脂组分进行了比较分析．低转移的ＣＬ－Ａ_２瘤株神经节苷脂以ＧＭ_３为主,高转移的ＣＬ－１６Ａ_３瘤株则以ＧＭ_２为主．两细胞株中性鞘糖脂各组分相对百分含量无较显著差异．脂结合唾液酸含量测定表明,ＣＬ－１６Ａ_３瘤株脂结合唾液酸含量约为ＣＬ－Ａ_２瘤株的三倍．提示,具有不同淋巴道转移潜能的瘤细胞,其质膜鞘糖脂的组成也不同．     

双歧双歧杆菌细胞壁完整肽聚糖的分离纯化

本试验采用国内分离的双歧双歧杆菌菌株Ｂｉｆ１１０１,用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理ＢＬ肉汤培养物,高速离心分离不可溶沉渣,经蛋白酶Ｅ、胃蛋白酶、α－糜蛋白酶、胰酶、核酸酶消化,甲醇与氯仿除脂,０．０１ＮＨ２ＳＯ４处理等步骤提纯而得到精制完整肽聚糖（ｗｈｏｌｅｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ,ＷＰＧ）。化学组分分析结果显示ＷＰＧ主要由多肽与糖组成,其氨基酸组成与菌体基本相同。扫描电镜观察发现提取的ＷＰＧ保留其原菌体细胞完整结构。     

疏水作用层析纯化脂肪酶

报道了以对β-硫酸酯己砜基苯胺（SESA）为活化剂制备疏水作用层析剂方法及其柱层析纯化脂肪酶的工艺条件。实验结果表明：活化剂对-β-硫酸酯己砜基苯胺（SESA）最适用量为1．0g／g湿纸纤维素。笨胺：丙酮比为1：4．以0．2mol／L磷酸缓冲液（pH8.0）=1mol／LNaCl为淋洗剂,以0．2mol／L磷酸缓冲液（pH8．0）＋8％吐温80为洗脱刘纯化脂肪酶具有较好的分辨率,酶活回收率64．0％,比活提高6．70倍。     

重组抗血红素ScFv包涵体蛋白的复性及纯化研究

抗血红素多二硫键ScFv在大肠杆菌中绝大多数表达产物为包涵体,为了获得可溶性的具有生物活性的ScFv,摸索了不同的复性条件,包括透析法、稀释和层析相结合的方法。研究发现,先对溶解的变性ScFv溶液稀释,进行初步的蛋白质复性,再利用Sephadex G-25凝胶层析进一步复性、降低变性剂浓度和纯化,至少可以得到95％纯度,产率为150mg／L的目标蛋白,通过一次凝胶过滤层析,达到了去除变性剂、复性及纯化ScFv蛋白三种目的,为多二硫键ScFv在大肠杆菌中的表达和纯化提供了一种经济可行的方法。     

小鼠腹水型肝癌H22a细胞浆胞内磷蛋白磷酸酶的纯化和性质

 磷蛋白磷酸酶是磷酸化/脱磷酸化作用中重要的调节酶。本文建立了小鼠腹水型肝癌细胞胞浆内磷蛋白磷酸酶(PrP)的纯化方法。用~(32)P-酪蛋白为底物测定活力。经纯化的酶纯度提高1380倍,聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳检查,只有一条泳带。用凝胶过滤法和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测得该酶分子量为200,000。该酶催化~(32)P-酪蛋白脱磷酸化反应的最适pH7.2,对热不稳定。     

Optimization of Lipase Purification by Rotating Annular Size-exclusion Chromatography

Crude porcine lipase was purified by continuous rotating annular size-exclusion chromatography. Sephadex G-75 was used as the size-exclusion packing material. Initial studies by this group on a similar unit have been reported [Genest et al. (1998) Continuous purification of porcine lipase by rotating annular size-exclusion chromatography, Appl. Biochem. Biotechnol. 73, 215-230]. This article presents the results of optimization studies carried out on a modified unit. These modifications resulted in a better performance of the column and a higher throughput. Purification fold values of around 11 were achieved in most runs. The activity recovered was around 99% and the productivity was around 3 mg lipase/mg gel h.     

重组人肿瘤坏死因子纯化方法的探索

TNF是一种具有多种生物学作用的细胞因子,高纯度TNF的获得是进一步研究其作用机理和探讨防治方法的基础．对克隆后工程菌表达的纯化进行研究,经盐析。透析、离子交换等步骤,成功地制备了高纯度的rhTNF．经SDS－PAGE测定,分子量17kD,纯度＞95％,比活性为3．44×107U／mg,与国外同类产品相似．     

低聚木糖分离纯化的研究进展

综述了低聚木糖分离纯化的研究进展。低聚木糖是一种非消化性寡糖 ,能选择性增殖肠道内双歧杆菌 ,可广泛应用于食品工业和饲料工业。低聚木糖的分离纯化技术主要包括层析分离技术 (包括凝胶过滤层析、离子交换层析和吸附层析 )和膜分离技术 (包括超滤、纳滤和反渗透 )。低聚木糖的提纯主要采用膜分离技术和层析分离技术 ,低聚木糖单一组分的分离主要采用凝胶过滤层析和吸附层析