产几丁质酶菌株SWCH-6的筛选、鉴定及其产酶条件的优化研究

从汕头海湾养殖区域的海底沉积物中分离到1株几丁质酶活性较高的菌株, 命名为SWCH-6, 根据菌株的形态特征、生理生化特征和16S rDNA 序列, 确定该菌株为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophlilla)。采用单因素优化方法结合正交实验, 得到菌株SWCH-6产几丁质酶的最佳发酵条件：胶体几丁质25.0 g/L, 胰蛋白胨10.0 g/L, 陈海水1.0 L, pH 8.5, 32℃, 150 r/min培养72 h; 在该条件下酶活力达0.39 U/mL。此外, 菌株所产几丁质酶的最适催化pH 5.0; 最适催化温度为40℃; Cu2+、Fe3+及表面活性剂Tween-80能增强该酶的催化活性; Zn2+、Mn2+及表面活性剂SDS、洗衣粉对该酶的催化活性有抑制作用, 与其它几丁质酶存在着一些不同。     

粘质沙雷氏菌XJ-01几丁质酶合成条件的优化

目的:对粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)XJ-01几丁质酶合成条件优化.方法:研究了碳源、氮源、温度、pH等单个因素对该菌几丁质酶合成的影响,并通过正交实验确定了该菌的最适酶合成条件.结果:该茵几丁质酶最优合成条件为:胶体几丁质5g/L、硫酸铵5 g/L、培养温度32℃、最适pH 8.结论:优化了S.marcescens XJ-01几丁质酶的合成条件.     

黄瓜几丁质酶的诱导,提取纯化及其基本性质（简报）

3周龄黄瓜幼苗经乙烯利处理后,诱导了几丁质酶活力。叶片提取液经20％和60％饱和度的两步硫酸铵沉淀,通过再生几丁质亲和层析后,纯化制备的SDS－PAGE显示单一谱带。酶学特性呈现pH2.7和pH7．1两个最适反应pH和50℃的最适反应温度。纯化的酶对几种病原菌的生长有一定的抑制作用。     

产几丁质酶菌株SWCH-6的筛选、鉴定及其产酶条件的优化研究

从汕头海湾养殖区域的海底沉积物中分离到1株几丁质酶活性较高的菌株,命名为SWCH-6,根据菌株的形态特征、生理生化特征和16S Rdna序列,确定该菌株为嗜水气单胞茵(Aeromonas hydrophlilla).采用单因素优化方法结合正交实验,得到菌株SWCH-6产几丁质酶的最佳发酵条件:胶体几丁质25.0g/L,胰蛋白胨10.0g/L,陈海水1.0L, Ph 8.5,32℃,150 r/min培养72h;在该条件下酶活力达0.39U/Ml.此外,菌株所产几丁质酶的最适催化Ph 5.0;最适催化温度为40℃;Cu2、Fe3及表面活性剂Tween-80能增强该酶的催化活性;Zn2 、Mn2 及表面活性剂SDS、洗衣粉对该酶的催化活性有抑制作用,与其它几丁质酶存在着一些不同.     

昆虫来源的几丁质酶的分离纯化及酶学性质

几丁质酶在真菌和昆虫的生理和发育过程中起着关键作用,该酶本身及其酶抑制剂是获取生物农药的重要途径。本研究从蚕蛹体内提取几丁质粗酶,经硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-150分离得到几丁质酶。用SDS-PAGE测得该酶的分子量为88kDa。水解胶体几丁质的Km值为22.3μmol/L。酶反应的最适温度为45℃,最适pH值为6.0,金属离子和有机试剂对几丁质酶活性都有影响,其中高浓度的Mn2+对酶有较强的激活作用,而Cu2+、SDS则有较强的抑制作用。研究结果为基于几丁质酶的生物农药筛选研究奠定了基础。     

链孢粘帚霉几丁质酶的诱导及其抗真菌活性研究

链孢粘帚霉HL-1-1菌株在不同培养条件下产几丁质酶活性不同,核盘菌菌核对其几丁质酶的诱导作用高于几丁质;首次用菌核配制培养基成功诱导了几丁质酶的产生,其产酶的最适初始pH值为4.5,最适培养时间为6d。几丁质酶对10种病原菌都有不同的抑制作用,对小麦雪腐病、葡萄白腐病、玉米黄斑病及斑点落叶病等病原菌的孢子萌发具有明显的抑制作用;该几丁质酶还能明显抑制核盘菌和立枯丝核菌的菌核萌发。     

球孢白僵菌胞内几丁质酶的分离纯化及性质

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)突变株CH-1316细胞裂解液经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-纤维素层析及凝胶过滤,分离出一种几丁质酶,该酶的分子量为32000;最适pH为5.0;最适温度为40℃;最适离子强度为0.2mol/L NaCl;Hg²⁺、Fe²⁺是该酶的强抑制剂;该几丁质酶完全不水解纯的片状几丁质,脱矿几丁质也不是该酶的良好底物;该几丁质酶水解几丁寡糖,但不水解几丁二糖;对几丁五糖以上的寡糖水解速度较快,而对几丁三糖和四糖水解速度则慢得多。     

短芽孢杆菌（Bacillus brevis No.G1）几丁质酶的提纯和分离鉴定

从芽孢杆菌属短芽孢杆菌种分泌的胞外几丁质酶经过硫酸铵盐析、苯基琼脂糖疏水相互作用层析和DEAE阴离子交换层析第一次被提纯。和其他来源的几丁质酶相比 ,该纯酶的独特之处在于它是一个由两个完全相同的亚基以疏水相互作用聚合而成的二聚体。常温下经过巯基乙醇处理后 ,该酶在 1 0 %SDS聚丙烯酰胺电泳显示的分子量为 85kD。沸水处理 3min或用 50℃的 8mol/L尿素溶液处理 1 0min后 ,该酶在 1 0 %SDS聚丙烯酰胺电泳显示的分子量为 4 8kD。该酶的亚基解聚后 ,活性丧失。该酶的等电点为 5.5,水解几丁质的最适 pH为 8.0 ,最适温度为 6 0℃。该酶的酸碱稳定范围是 pH 6 .0到1 0 .0。Ag 和巯基乙醇能抑制酶活性。该纯酶的N端 1 0个氨基酸残基依次是AVSNSKIIGY ,表明该酶是一个尚未发现的新几丁质酶。该纯酶水解几丁质的特征研究表明该酶属一种内切几丁质酶 ,不具备外切几丁质酶的活力。和其他几丁质酶相比 ,该酶具有高度的热稳定性和蛋白水解酶抗性 ,因此可用于生物控制领域。     

黄杆菌(Flavobacterium sp.)几丁质酶的纯化和性质

黄杆菌(Flavobacteium sp.)在几丁质的诱导下产生几丁质酶.通过(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE纤维素柱层析、Sephacryl 300柱层析及Sephadex G-75柱层析,从Flavobacterium sp.培养上清液中分离纯化了几丁质酶.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)纯度分析表明,纯化后的几丁质酶达到了均一的程度.用SDS-PAGE测得该酶的分子量约45D00道尔顿.该酶水解几丁质的最适pH为 7.0,最适温度为50℃,-20C贮存两年以上仍有活性.水解几丁质的Km值为5.0mg/ml.金属离子对几丁质酶活性影响较大,Ca^(2+) 、Co^(2+)’和Cu^(2+)对酶有激活作用.而NH_4^-、Ba^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)对酶有抑制作用.几丁质酶水解几丁质的产物是几丁质二糖.     

黏质沙雷氏菌L15-2几丁质酶的分离纯化与性质研究

几丁质酶高产菌株黏质沙雷氏菌L15-2在含有1%胶体几丁质、0.3%K2HPO4、0.3%KH2PO4、0.05%MgSO4、0.05?Cl2、0.001?SO4的产酶培养基中37℃培养4 d后,粗酶液经过DEAE Sepharose Fast Flow和Seph-adex G-100,电泳检测得到电泳纯的几丁质酶。该酶的性质特征测定结果表明,该几丁质酶的分子量为41.314 kD;最适作用温度为50℃,最适作用pH为6.6;在60℃之前热稳定性较好,在pH 4~10范围内较稳定;各种金属离子对酶活力影响不同,Fe2 、Zn2 抑制作用明显,而Ba2 、Mn2 、Ca2 对酶活性有一定的促进作用。几丁质酶对致病真菌的抑制作用也很明显。