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相似文献
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1.
植物细胞凋亡的ELISA检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文利用TUNEL方法在单个细胞水平上对苯胺灵诱导的玉米根尖细胞死亡进行了检测。结果表明,一定浓度的苯胺灵能诱导玉米根尖细胞发生主动性的细胞凋亡,具有细胞凋亡典型的形态和生化特征即细胞核浓缩并形成核碎片、染色质边缘化及DNA特异片段化等(Fig.1)。首次利用ELISA方法在群体水平上对这种细胞凋亡进行了进一步检测。结果表明:动物细胞研究常用的ELISA方法同样也适合用于植物细胞凋亡的检测。在凋亡前期,随着凋亡过程的进行,细胞质中的OD值逐渐上升(Fig.2)。剂量实验表明,0.2mg/mL苯胺灵最适合于诱导细胞凋亡(Fig.3)。  相似文献   

2.
细胞凋亡过程中细胞表面膜的电位很可能会发生改变。本文首次报导:应用细胞电泳技术(cell electrophoresis)对细胞毒素类药物放线菌酮(cycloheximide)、放线菌素 D(actinomycin D)和秋水仙碱(colchicine)等诱导的植物凋亡细胞与正常细胞之间电泳迁移率(EPM)的差异进行了比较,对引起的膜电位变化进行了定量分析。实验以玉米根尖分生组织为材料,制备原生质体,经过适当剂量的药物处理(Fig.1-B),在尽量减少细胞膜被破坏的情况下(Fig.2),观察到:三种细胞毒素类药物的作用有所不同,被诱导的植物凋亡细胞的膜表面Zeta电位绝对值比正常细胞的高(Fig.1-A)。本研究提示细胞电泳可对凋亡细胞表面膜电位的变化进行定量分析,为细胞凋亡的检测在方法上提供了新思路。  相似文献   

3.
火炬松(PinustaedaL.)是我国亚热带和部分热带地区最重要的绿化和造林树种。它的生长周期长,杂合程度高,难以用常规的杂交方法进行品种改良。建立火炬松的原生质体胚胎发生体系,有可能、进而以遗传转化为基础进行火炬松等针叶树的品种改良。本研究以湖南省绍阳市的火炬松成熟种子为材料,建立胚性细胞悬浮系。将其培养至对数生长期,用1%RS、2.5%R10和0.2%Y23的酶混和液分离原生质体,活力达90%以上(Fig.1)。纯化原生质体,在再生培养基上培养2天后,细胞壁再生(Fig.2);;6天后,65%的原生质体第1次分裂(Fig.3);培养3周后,形成小细胞团(Fig.4);6周后,形成大细胞团(Fig.5);8周后,形成胚性胚柄细胞团(ESM)(Fig.6);10周后,形成早期体细胞胚(ESE)(Fig.7);12周后,形成后期体细胞胚(LSE)(Fig.8)火炬松原生质体胚形成过程中的关键结构是ESM,ESE和LSE。它们形成的最佳基本培养基是1.25LP培养基。再生培养基中高浓度的BA和低浓度的肌醇有利于ESM的形成,但不利于ESE和LSE的形成。反之,低浓度的BA和高浓度的肌醇不利于ESM的形成,  相似文献   

4.
正常机体内,红细胞生成素(EPO)诱导红系细胞分化,并阻止其凋亡,使其维持机体所需足够的数量。本文采用诱发贫血病毒(FVA)诱导BALB/c小鼠脾细胞所形成的红细胞为实验系统,研究了外界因子??地塞米松(Dex)对EPO作用的影响。取68周雌性BALB/c小鼠,尾部静脉注射含FVA的小鼠血清。15天后,断颈处死。取脾于IMDM中漂洗、剪碎、过滤、离心、制成单细胞悬液,在EPO存在下,于平皿中培养至不同的时期后,进行不同浓度、不同时间的Dex处理。取细胞进行:(1)台盼蓝染色计数死细胞数;(2)观察DNA电泳图谱;(3)电镜检察细胞学变化。Fig.1表明:随着Dex处理浓度和时间的增加,细胞死亡率也增加。Fig.2表明:10-4浓度Dex处理,即可使早(12h)、中(24h)幼期红细胞凋亡,DNA断裂成多聚核小体,产生明显DNA梯形带。Fig.3表明:高浓度Dex可以使早幼期红细胞凋亡。电镜观察表明:与对照(Fig.4)比较,Dex处理后,细胞核固缩,染色质沿核膜内面周边凝聚,核周间隙扩张,胞质内出现空泡(Fig.5);随后细胞破碎,出现大量凋亡小体(Fig.6)。Dex拮抗EPO,诱导红系细胞凋亡的现象此  相似文献   

5.
高粱细胞质雄性不育系3197A(3A)在常温条件下是不育的(Figs.11&2),经热激(45℃)诱导不同程度地恢复了育性(Figs.13&4),为研究其不育机理提供了线索。热激2h后,3A中即可产生一类线粒体热激蛋白(HSPs)。其中,分子量为70kD的HSP70含量最高,也最为稳定。不过,3A中HSPs的稳定性弱于保持系3197B(3B)(Fig.2,Panels1~4)。放线菌素D抑制HSPs的合成,而氯霉素无此作用(Fig.2,Panels5&6),表明:HSPs是由核基因编码、在细胞质中合成、再跨膜转运到线粒体中的。3A幼穗经热激后,线粒体的总蛋白量猛增了2.7倍(Fig.3),达到3B的水平,育性亦变为可育的。Fig.4表明:HSP70反义链cDNA(R1)能进入到3B花药细胞中,并与靶RNA(HSC70mRNA)结合,而对照、正义链cDNA(D)链无此反应。由此、再增加一个通用保守序列的反义链cDNA(R2)、共两个探针(R1、R2),可以检测到:3A在常温下没有能力合成HSC70mRNA(Fig.5),而在热激条件下,转变为有能力(Fig.6)。启示:3A在热激条件下由不育转变为可育  相似文献   

6.
本实验利用卵母细胞的体外培养模型,将小鼠卵丘-卵母细胞复合体(CEO)和去卵丘卵母细胞(DO)在体外培养,系统研究了促性腺激素(FSH、hCG)诱导小鼠卵母细胞减数分裂的机制。结果显示,FSH能剂量依赖性地诱导CEO恢复减数分裂(Fig.1),但对DO无影响;hCG对 CEO、 DO皆无效果(Fig.2);用 FSH预处理CEO时间达到1小时后,就能显著诱导卵母细胞成熟,2小时后作用达到最大;不再增强(Fig.3);用 FSH处理CEO 2小时及24小时的培养液,能诱导DO恢复减数分裂,但预处理卵丘细胞24小时的培养液,并不能诱导DO恢复减数分裂(Fig.4A);这种培养液在70℃下30分钟后,仍能刺激DO成熟(Fig.4B);甾醇类物质合成抑制剂酮康唑,可剂量依赖性地抑制FSH的促减数分裂恢复作用(Fig.5)。这些结果说明, FSH可能诱导卵丘-卵母细胞复合体中的卵丘细胞分泌一种促减数分裂恢复物质;该物质作用于卵母细胞,诱导其恢复减数分裂而成熟;这种物质可能是一种甾醇类物质。  相似文献   

7.
体外培养对于植物的快速繁殖是非常有效的。和其它一些松果类硬木植物一样,火炬松的体外培养成功率却一直很低。本工作研究了不同的基本培养基和低温条件对于火炬松J-56, S-1003, and E-440等三个品系的成熟合子胚形成愈伤组织、分化出芽、成苗的影响。在不同的基本培养基条件下芽分化的程度差异很大。合子胚经过9-12周培养,开始分化,形成具有器官发生的愈伤组织(Fig.2a)。分化后3周,开始诱导出芽(Fig.2b),芽的生长快慢不同(Fig.2c,d)。同一个愈伤组织上会生出几个芽来(Fig.2e)。在添加有IBA和BA的TE培养基上芽生长最快(Fig.1)。低温条件持续 15天,能增加芽的数量和分化的程度(Table1)。上述培养基中增加GA3时表明,GA3对于根的诱导有决定性的作用。将98株再生苗转移到特殊的混合土壤上;成活了75株苗(Fig.2f)。以这三种火炬松的再生苗尖为材料制备DNA。用20个引物进行RAPD分析,结果表明:这三种火炬松苗的扩增产物是相同的(Fig.2g,h&i)。这说明:用愈伤组织克隆植株的过程中没有引起植物遗传变异。  相似文献   

8.
磷酸酶(ACP、AKP)在生物的机能分化中起重要作用,热休克蛋白(HSPs)是近几年发现的一类在胚胎发育、细胞生存中起重要作用的分子,无论是胚胎发育还是细胞结构和功能构建都和细胞增殖密切相关,增殖细胞核抗原(PCNA)是检测细胞增殖的良好指标。 本实验用组织化学、免疫组织化学、Western印迹、酶的原位复性电泳、体视学分析等方法定性和定量分析了酸性磷酸酶(ACP)(Fig.1&2)、碱性磷酸酶(AKP)(Fig.4&5)、构成性热休克蛋白 70/诱导性热休克蛋白 68(HSC70/HSP68)(Fig.6)和PCNA(Fig.7&8, Table1)在大鼠肝生长发育(从14天胚胎到成体)过程中的动态变化。结果表明:(1)在大鼠肝生长发育过程中,ACP有两个活性高峰期,其时段处于大鼠吃奶和吃饲料起始期(Fig.1&2);(2)在ACP的第一个活性高峰期时,AKP活性降低;而在ACP的第二个活性高峰期时,正值AKP的活性高峰期(Fig.3);(3)ACP活性高峰期也是PCNA含量高峰期;(4)HSC70/HSP68在刚断奶的幼鼠肝和成体肝中表达量较多,其他时段表达极少。根据上述结果推测:ACP和PCNA通过调节细  相似文献   

9.
家蚕胚胎发育中过氧化氢的代谢(英文)   总被引:2,自引:0,他引:2  
过氧化氢(H_2O_2)是生物体内主要的活性氧来源之一。在超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等的催化作用下,H_2O_2。被降解,释放出活性氧。所以,生物个体发育过程中体内H_2O_2、SOD和CAT含量的变化反映着H_2O_2的代谢水平。另外,家蚕是蚕卵滞育昆虫,实验设计考虑到了滞育前后可能会有的差别。取产后10分钟内的卵为供试材料。采用即时浸酸法解除卵滞育。采用比色法和氧电极法测定并比较家蚕胚胎滞育形成与解除过程中过氧化氢的代谢。结果表明:(1)受精初期(0~4h),H_2O_2含量在2.5h时达到峰值(Fig.1),相应地SOD活性处于较高水平,而CAT活性处于最低水平(Fig.2);(2)胚胎发育过程中(即时浸酸解除滞育),H_2O_2含量除168~216h处于低水平外均显著高于滞育卵(Fig.3),SOD活性分别在72h、168h,形成小大两峰,后期显著高于滞育卵(Fig.4),而CAT活性72-192h保持平稳,随后急剧上升,前期显著低于滞育卵,后期相反(Fig.5);(3)滞育形成过程中H_2O_2水平变化平缓(Fig.6),SOD活性前期剧烈变动,但后期保持平稳(Fig.7),CAT活性逐步升  相似文献   

10.
转基因动物在研究基因的功能、医药、畜牧业等方面有重要的应用。利用胚胎干细胞(ES)制作转基因动物,比传统的显微注射法有无可比拟的优点。但是,目前、只在小鼠中建立起了ES细胞系,在其它哺乳动物(包括家畜)中尚未建成。近来,人们开始探索:改变胚胎细胞的遗传物质(如:把外源基因导入胚胎细胞)是否有利于获得ES细胞系.在各种外源基因中,癌基因是值得尝试的基因。因为:(1)ES细胞的建系是使胚胎的ICM细胞永生化的过程;(2)在体外利用癌基因转染可使许多原代培养细胞永生化;(3)ES细胞高表达一些原癌基因。我们用癌基因EJ-ras转染小鼠ES细胞,观察其对ES-5细胞一些特性(增殖、嵌合能力)的影响,以便选择合适的癌基因用于家畜ES细胞的建系。ES-5细胞通常培养在丝裂霉素处理的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)上(Fig.A)。转染用ES-5细胞培养在无饲养层细胞的、含有大鼠肝细胞(BRL)的条件培养液DMEM中。EJ-ras基因克隆在真核表达载体PSV2neo的BamHI位点上、使用磷酸钙法转染ES-5细胞,G-418法筛选阳性克隆,得到的抗性克隆仍以集落形式生长(Fig.B),选取5个较好的克隆(ES-ras1,2,  相似文献   

11.
Dad1是一个高度保守的细胞程序性死亡抑制基因。以拟南芥Dad1 (AtDad1) cDNA为模板,利用体外RT-PCR对其进行地高辛标记。以产物反义RNA作探针 (顺义RNA为对照),对Dad1在玉米种子发育过程中的时空表达图谱进行了研究。结果表明Dad1在一些衰老组织如子房壁、珠被(Fig.1, B&C)、成熟的胚乳 (Fig.1, E) 以及脱落的根冠细胞 (Fig.2 A)中表达量均较高,同时在新陈代谢活跃的组织如根尖分生组织细胞 (Fig.2, A&B)、发育的子叶(Fig.2, C&D)、雌性生殖细胞 (Fig.1 C)以及发育的胚乳细胞(Fig.1 C)中表达量也较高。结论:同其它植物中的Dad1同源基因一样,玉米中的Dad1基因在胚胎发育及胚乳PCD等多种发育过程中也可能起重要作用。  相似文献   

12.
一氧化氮参与调节盐胁迫诱导的玉米幼苗脱落酸积累   总被引:12,自引:1,他引:11  
以三叶一心期的玉米幼苗为实验材料,研究了盐胁迫下玉米幼苗根尖和叶片中一氧化氮(NO)和脱落酸(ABA)积累之间的关系。结果表明,盐胁迫下玉米幼苗NO和ABA的含量均增加,用NO供体硝普钠(Sodium nitroprusside,SNP)处理时,ABA含量亦增加,且累积的时间较盐胁迫下早。用NO合成的抑制剂L-NAME (Nω-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride)和NaN,处理时,可减弱盐胁迫诱导的ABA含量的增加,用NO清除剂cPTIO处理时,这种盐胁迫诱导的ABA增加减少。推测盐胁迫下产生的NO参与调节ABA的积累及逆境下植物的防御反应。  相似文献   

13.
除草剂普杀特(Imazethapyr)对玉米根尖蛋白质和DNA合成的影响刘支前(北京农业大学农业应用化学系,北京100094)关键词:普杀特,玉米,蛋白质,DNA80年代美国氰胺公司开发的咪唑淋酮类除草剂,由于其高效低毒、杀草谱广,又因对某些农作物具...  相似文献   

14.
运用免疫金标记电镜技术研究了禾本科C3植物大麦(Hordeum vulgare L.)和C4植物玉米(Zea mays L.)叶片中Rubisoo及其活化酶(RCA)的细胞定位,结果表明:两种植物叶片解剖结构及叶绿体超微结构差别明显.在大麦叶细胞中,只有一种叶肉细胞叶绿体,Rubisoo和RCA主要分布于叶绿体的间质中.在玉米叶细胞中,存在着维管束鞘细胞和叶肉细胞两种类型叶绿体,Rubisco主要分布于鞘细胞叶绿体的基质中,但在叶肉细胞叶绿体中亦有少量特异性标记;RCA在鞘细胞叶绿体和叶肉细胞叶绿体的基质中都有分布.两种植物叶绿体结构及光合作用关键酶定位的不同,体现了C3植物和C4植物在光合器结构与功能上的差异.  相似文献   

15.
We examined whether ischemic preconditioning (IPC) attenuates ischemia-reperfusion injury, in part, by decreasing apoptosis and whether the delta-opioid receptor (DOR) plays a pivotal role in the regulation of apoptosis. Rabbits were subjected to 30-min coronary artery occlusion (CAO) and 180 min of reperfusion. IPC was elicited with four cycles of 5-min ischemia and 10-min reperfusion before CAO. Morphine (0.3 mg/kg iv) was given 15 min before CAO. Naloxone (Nal; 10 mg/kg iv) and naltrindole (Nti; 10 mg/kg iv), the respective nonselective and selective DOR antagonists were given 10 min before either morphine or IPC. Infarct size (%risk area) was reduced from 46 +/- 3.8 in control to 11.6 +/- 1.0 in IPC and 19.5 +/- 3.8 in the morphine group (means +/- SE; P < 0.001 vs. control). Nal blocked the protective effects of IPC and morphine, as shown by the increase in infarct size to 38.6 +/- 7.2 and 44.5 +/- 1.8, respectively. Similarly, Nti blocked IPC and morphine-induced protection. The percentage of apoptotic cells (revealed by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling assay) decreased in IPC (3.6 +/- 1.9) and morphine groups (5.2 +/- 1.2) compared with control group (12.4 +/- 1.6; P < 0.001). Nti pretreatment increased apoptotic cells 11.2 +/- 2.2% in IPC and 12.1 +/- 0.8% in morphine groups. Nal failed to block inhibition of apoptosis in the IPC group (% of cells: 5.7 +/- 1.3 vs. 3.6 +/- 1.9 in IPC alone; P > 0.05). These results were also confirmed by nucleosomal DNA laddering pattern. We conclude that IPC reduces lethal injury, in part, by decreasing apoptosis after ischemia-reperfusion and activation of the DOR may play a crucial role in IPC or morphine-induced myocardial protection.  相似文献   

16.
氮磷亏缺对玉米根系水流导度的影响   总被引:12,自引:0,他引:12  
在人工气候室水培条件下,从单根和整株根系两个层次研究了N、P营养与玉米(Zea mays L.)根系水流导度(root hydraulic conductivity,Lpr)间的关系。结果表明:表型抗旱的杂交种F1代户单4号和母本天四的单根水导和整株根系水导均高于不抗旱的父本478,其中天四的单根水导最高,而户单4号的整株根系水导最高。N、P亏缺均使玉米单根水导和整株根系水导降低,但与N亏块相比,P亏缺的植株具有较高的整株根系水导和较低的单根水导。整株根系的水导更能反映植物根系的输水性能。  相似文献   

17.
18.
Ischemic preconditioning (IPC) represents an important adaptation of CNS to sub-lethal ischemia, which results in increased tolerance of CNS to the lethal ischemia. Ischemia-induced mitochondrial apoptosis is considered to be an important event leading to neuronal cell death after cerebral blood flow arrest. In presented study, we have determined the effect of IPC on ischemia/reperfusion-induced mitochondrial apoptosis. Global brain ischemia was induced by permanent occlusion of vertebral arteries and temporal occlusion of carotid arteries for 15 min. Rats were preconditioned by 5 min of sub-lethal ischemia and 2 days later 15 min of lethal ischemia was induced. With respect to mitochondrial apoptosis initiation, translocation of p53 to mitochondria was observed in hippocampus but not in cerebral cortex. However, level of both apoptotic bax and anti-apoptotic bcl-xl in both hippocampal and cortical mitochondria was unchanged after global brain ischemia. Detection of genomic DNA fragmentation as well as Fluoro-Jade C staining showed that ischemia induces apoptosis in vulnerable CA1 layer of rat hippocampus. IPC abolished completely ischemia-induced translocation of p53 to mitochondria and had significant protective effect on ischemia-induced DNA fragmentation. In addition, significant decrease of Fluoro-Jade C positive cells was observed as well. Our results indicate that IPC abolished almost completely both initiation and execution of mitochondrial apoptosis induced by global brain ischemia.  相似文献   

19.
脱落酸与植物水分胁迫的关系已进行了大量的研究,现已明确脱落酸可以抑制气孔的开放(Jones和 Mansfield 1970,Weyers和 Hillman 1979,Henson等 1989),但它的作用机制仍然很不清楚。已有报告指出,当土壤水分亏缺时,ABA可以作为根与地上部间的通讯信号,由很运到地上部并抑制气孔的开放(Blackman和 Davies1985,Gollan等 1986,Zhang和 Davies  相似文献   

20.
蚕豆根装载的3H-ABA可经5.6cm/min以上的速率向冠部运输。短时间内(5min)根运来的ABA主要分布在有大量气孔密布的下表皮,但长时间内(3h)则主要分布在对内组织中。抑制蒸腾可降低ABA向叶片中的运输积累。光镜放射自显影术显示,根运来的ABA可有效地在表皮细胞及保卫细胞的质外体积累。3H-ABA由根向地上部快速运输及其在作用部位的有效积累,说明水分胁迫下蚕豆根部可以通过ABA信号的传递控制气孔的行为。  相似文献   

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