Glucoamylases of a fungus isolated from a rotting cassava tuber

Summary Aspergillus niger H-9 is a fungal strain isolated from a rotting cassava tuber in Thailand. In the present study, the production of the enzymes was carried out as solid state ricebran-soybean fermentation. Two types of glucoamylases were isolated and purified. The purified glucoamylases were found to be homogenous on 7.5% polyacrylamide gel disc electrophoresis. The molecular weights of glucoamylase I and II were 59,400–72,600 and 43,000–52,600 respectively. The Km values of glucoamylase I and glucoamylase II were 12.5 and 6.25 mg glucose/ml when soluble starch was used as substrate. The optimal pH of both enzymes was 4.0–5.0. The optimum temperatures for the activities of glucoamylase I and glucoamylase II were 60 and 70°C respectively. Both enzymes were stable in the pH range 3.0–6.0 and temperature stable below 50°C. Both glucoamylases were active on various kinds of starch and dextrin including raw starch. Glucoamylase II was, however, found to hydrolyse raw starch better than glucoamylase I.

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Resumen Aspergillus niger H-9 es una cepa aislada en Tailandia a partir de tuberculos de cassava afectados de podredumbre. En este trabajo la producción de enzimas tuvo lugar mediante fermentación en un medio sólido compuesto por fibra de arroz y soja. Se aislaron y purificaron dos tipos de glucoamilasas. Al realizar una electroforesis en disco de polyacrilamida al 7.5% se observó que las glucoamilasa purificadas eran homogeneas. Los pesos de las glucoamilasas I y II eran respectivamente 59,400–72,600 y 43,000–52,600. Las Km respectivas fueron 12.5 y 6.25 mg ml^–1 cuando se utilizó almidón soluble como substrato. El pH optimo para ambos enzimas fue 4.0–5.0. Las temperaturas óptimas para la glucoamilasa I y la glucoamilasa II fueron respectivamente de 60 y 70°C respectivamente. Ambos enzimas eran estables en el intérvalo de pH 3.0–6.0 y a temperaturas por debajo de 50°C. Los dos enzimas eran activos fiente a distintos tipos de almidón y dextrina incluyendo almidón bruto. La glucoamilasa II hidrolizó mejor el almidón bruto que la glucoamilasa I.

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Résumé Aspergillus niger H-9 est une souche de moisissure isolée en Thailande à partir de tubercules pourris de manioc. Dans cette étude, la production d'enzymes a été obtenue par fermentation en milieu solide sur son de riz et soja. Deux types de gluco-amylases ont été isolés et purifiés. Les enzymes purifiés sont homogènes en disque-éléctrophorèse sur gel de polyacrylamide. Les poids moléculaires des gluco-amylases I et II sont respectivement de 59,400–72,600 et 43,000–52,000 et leurs Km pour l'amidon soluble de 12.5 et 6.25 mg de glucose/ml. Le pH optimum des deux enzymes est compris entre 4.0 et 5.0. Leurs températures optimales sont respectivement de 60 et 70°C. Les deux enzymes sont stables de pH 3.0–6.0 et aux températures inférieures à 50°C. Les deux gluco-amylases sont actives sur différents types d'amidon et de dextrines, y compris l'amidon cru. Toutefois, la gluco-amylase II hydrolyse l'amidon cru plus activement que la gluco-amylase I.

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Paper presented at the VII International Conference on the Global Impacts of Applied Microbiology, Helsinki, 12–16 August 1986.     

Cassava starch fermentation pattern ofRhizopus oligosporus

Summary Rhizopus oligosporus UQM 145F was grown on cassava starch medium without a preliminary treatment of starch. The fermentation pattern ofR. oligosporus is shown to be influenced significantly by the medium composition, pH of the growth culture and the size of the spore inoculum. By varying the carbon, nitrogen and mineral salt concentrations, it was found that either glucose accumulated due to excess hydrolysis of starch or single cell protein production became dominant. In the case of the carbon source, increases in the concentration of starch led to higher biomass values, but lower rates of protein production. These observations led to a new formulated medium, resulting in an 82.9% cassava starch utilization and a true protein yield of 5.32 g/100 g initial substrate. The response ofR. oligosporus to inorganic compounds such as (NH₄)₂SO₄, urea, NaCl and MgSO₄ indicates an interesting fermentation control system.

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Resumen Rhizopus oligosporus UQM 145F se hizo crecer en un medio a base de almidón de casava sin que hubiera pasado por un tratamiento previo con almidón. Se demostró que el patrón de fermentación seguido porRh.oligosporus estaba significativamente influenciado por: la composición del medio, su pH y el tamaño del inóculo. Al variar las concentraciones de carbono, nitrógeno y sales minerales se observó que predominaba la acumulación de glucosa o bien la producción de proteínas unicelulares. Un incremento en la fuente de carbono aumentó la biomasa pero disminuyó el ritmo de producción de proteínas. Estas observaciones permitieron elaborar un nuevo medio de cultivo que resultó en la utilización del 82.9% del almidón de casava con un rendimiento en proteínas de 5.32 g/100 g de sustrato inicial. La respuesta deRh. oligosporus a compuestos inorgánicos como sulfato amónico, urea, cloruro sódico y sulfato magnésico indican la existencia de un sistema de control de la fermentación muy interesante.

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Résumé On a fait croîtreRhizopus oligosporus UQM 145 F sur un milieu à base d'amidon de manioc sans traitement préalable de l'amidon. Le profil de fermentation parR. oligosporus apparaît être influencé de manière significative par la composition du milieu, le pH de la culture en croissance et la taille de l'inoculum de spores. En variant les concentrations en carbone, en azote et en sels minéraux, on remarque la prédominance tantôt de la protéine unicellulaire, tantôt de l'accumulation de glucose. Un accroissement en concentration conduit à des valeurs plus élevées de la biomasse mais en une moindre production de protéines. Ces observations ont abouti à une nouvelle formulation du milieu avec pour résultat une utilisation à 82.9% de l'amidon de manioc et un rendement vrai en protéines de 5.32 g/100 g de substrat initial. La réponse deR. oligosporus aux composés inorganiques comme le sulfate d'ammonium, l'uréi, le chlorure de sodium et le sulfate de magnésium sont indicateurs d'un système très intéressant de contrôle de la fermentation.

     

Isolation and characterization of an amylolytic yeast:Candida edax

Summary A new amylolytic yeastCandida edax CBM20 was isolated from soil. The strain was able to grow at 37°C and pH 4.5 on a soluble starch (mineral salts) medium with a maximum specific growth rate of 0.59 h^–1 and a cell yield of 0.58 g per gram utilized starch. The strain synthesized high activities of intra- and extra-cellular -amylase and glycoamylase.Candida edax CBM20 is considered to be a good candidate for single-cell protein production from starch.

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Resumen Se ha aislado una nueva levadura amilolítica,Candida edax CBM 20 a partir del suelo. La cepa puede crecer a 37°C y a pH 4.5 en un medio mineral con almidón soluble, obteniendose una tasa de crecimiento máxima de 0.59 h^–1 y un rendimiento celular de 0.58 g por gramo de almidón utilizado. La cepa sintetiza elevades actividades de -amilasa y de glucoamilasa tanto intra como extracelulares. Se considera aCandida edax como un buen candidato para la producción de proteínas celulares a partir de almidón.

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Résumé Une nouvelle levure amylolytique,Candida edax CBM20, a été isolée à partir du sol. La souche peut pousser à 37°C et pH 4,5 sur un milieu minéral contenant de l'amidon soluble avec un taux de croissance maximum de 0.59 h^–1 et un rendement cellulaire de 0,58 g par g d'amidon utilisé. La souche synthétise de fortes activités -amylase et glucoamylase, toutes les deux intra-et extra-cellulaires.Candida edax CBM20 est considérée comme un bon candidat pour la production de protéines d'organismes unicellulaires à partir d'amidon.

     

Solid state fermentation of apple pomace for citric acid production

Summary A solid state fermentation process is described for the production of citric acid from apple pomace byAspergillus niger NRRL 567. The yields of citric acid varied with the pomace varieties, and were dependent on (1) the amount of methanol present in the pomace, and (2) the fermentation time and temperature. The process yielded as much as 90 g citric acid/kg apple pomace fermented in the presence of 3–4% methanol at 30°C in five days.

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Resumen Se describe un proceso de fermentación en estado sólido para la producción de ácido cítrico a partir de residuos de manzana, utilizandoAspergillus niger NRRL 567. La producción de ácido cítrico varió con el tipo de residuo utilizado y dependió de (1) la cantidad de metanol presente en los residuos y (2) del tiempo y la temperatura del proceso. La fermentación puede producir hasta 90 g de ácido cítrico/kg de residuo de manzana, fermentado en presencia de 3–4% de metanol a 30°C de temperatura durante 5 días.

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Résumé Le procédé de fermentation en milieu solide qui est décrit est déstiné à la production d'acide citrique à partir du marc de pommes parAspergillus niger NRRL 567. Les rendements en acide citrique varient suivant les variétés de pommes et dépendent: (1) de la quantité de méthanol présente dans le marc, et (2) du temps de fermentation et de la température. On peut obtenir jusqu'à 90 g d'acide citrique par kg de marc de pommes fermenté, en présence de 3 à 4% de méthanol, à 30°C et en 5 jours.

     

A single-step purification of an extracellular fungal laccase

Summary A single-step purification procedure forNeurospora crassa laccase is reported. It used Celite chromatography which permits the concentration of the extracellular enzyme from large culture volumes. This method is useful to isolate any fungal or plant laccase as well as other coppercontaining proteins. This work also takes advantage of the 100-fold induction of the enzyme by low concentrations of cycloheximide.

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Resumen Aquí se reporta un procedimiento de purificación en un solo paso para le enzima lacasa deNeurospora crassa. Consiste en el empleo de la cromatografía en Celite que permite la concentración de la enzima exocelular de grandes volúmenes de cultivo. Este método es útil para aislar cualquier lacasa de hongos o plantas así como otras proteínas que contienen sobre. En este trabajo, hemos aprovechado también la inducción de la enzima en más de 100 veces por bajas concentraciones de cicloheximida.

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Résumé Nous rapportons ici une procédure de purification en une étape de la laccase deNeurospora crassa. Elle consiste à employer la chromatographie sur Celite qui permet la concentration de l'enzyme exo-cellulaire à partir de grands volumes de milieu de culture. Cette méthode permet d'isoler n'importe quelle laccase fungique ou de plante ainsi que d'autres protéines à cuivre. Dans le présent travail, nous avons aussi tiré parti de l'induction au centuple de l'enzyme par de faibles concentrations en cycloheximide.

     

Methane fermentation of water hyacinth: effect of retention time and temperature

Summary The influence of retention times of 10, 20, 30 and 40 days on the semi-continuous anaerobic digestion of water hyacinth was tested at the laboratory level. Biogas was successfully produced using 50 and 30 g total solids/l slurries at retention times of 30 and 40 days. The retention time of 40 days proved to be much better than shorter retention times in terms of total gas produced, methane percentage and degree of decomposition of organic matter. The effect of incubation temperatures of 25, 37, 45°C and the variable temperature range of 32 to 42°C on the semicontinuous digestion of water hyacinth was also tested in the laboratory. Biogas could be successfully produced at all temperatures tested except at 45°C. At 37°C and at the variable temperature range of 32 to 42°C gas production was very rapid. Digestion at 25°C was more efficient and gas release was slower. Digestion at 45°C was very erratic.

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Resumen Se estudió, a escala de laboratorio, la influencia de tiempos de retención de 10, 20, 30, y 40 días en la digestión anaerobia semi-continua del jacinto acuático (Eichornia crassipes). A partir de pasta de jacinto acuático con 50 y 30 g de sólidos totales/l de pasta y con tiempos de retención de 30 y 40 días la obtención de gas fue eficaz. La retención de 40 días fue mucho mejor que retenciones mucho más cortas en relación con la producción total de biogás, el porcentaje de metano obtenido y la descomposición de sólidos volátiles. También se estudió el efecto de temperaturas de incubación de 25, 37 y 45°C y de un gradiente de temperaturas de 32–42°C en la fermentación. La producción de biogas fue eficaz a todas las temperaturas ensayadas excepto a 45°C. A 37°C y utilizando el gradiente de temperaturas la obtención de gas fue muy rápida. La digestión a 25°C fue más eficaz pero la liberación de gas más lenta; la fermentación a 45°C dió resultados erráticos.

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Résumé On a testé à l'échelle du laboratoire, l'influence des temps moyens de séjour de 10, 20, 30 et 40 jours sur la biométhanisation semi-continue de la jacinthe d'eau. La production de biogaz était satisfaisante aux concentrations de 50 et 30 g de solides totaux par litre et pour des temps moyens de séjour de 30 et 40 jours. Le temps moyen de séjour de 40 jours s'est révélé bien meilleur que les temps moyens de séjour plus courts en matière de gaz total produit, pourcentage de méthane et conversion de la matière organique. On a également testé au laboratoire l'effet des températures d'incubation de 25, 37 et 45°C et celui d'une température fluctuant entre 32 et 42°C sur la biométhanisation semicontinue de la jacinthe d'eau. La production de biogaz était satisfaisante à toutes les températures sauf celle de 45°C. La production de gaz était très rapide à 37°C et dans la région variable de 32 à 42°C. La biométhanisation à 25°C était plus efficiente mais la vitesse de production du gaz était plus lente. La biométhanisation à 45°C était très erratique.

     

Production of fuel ethanol from cassava

Summary Ethanol production from fresh cassava roots using a low-temperature process was evaluated on a pilot-plant scale. The application of low-temperature cooking to cassava starch followed by a dual enzyme action resulted in an ethanol yield comparable to that of a traditional high-temperature cooking process. Pressurized distillation gave a satisfactory recovery efficiency of ethanol but was slightly lower than that obtained from atmospheric pressure distillation. Over 40% of the normal steam consumption was saved by adopting the low-temperature cooking and pressurized distillation systems in the cassava-to-ethanol process. The yield of anhydrous ethanol varied with the starch content in fresh cassava roots and was in the range of 185 to 200 liters per tonne.

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Resumen La producción de etanol a partir de raices frescas de cassava como materia prima, empleando un procedimiento a baja temperatura, ha sido evaluada a la escala de planta piloto. El empleo de baja temperatura en el tratamiento del almidón de cassava, sequido de una doble acción enzimática ha resultado en un rendimiento de etanol comparable al obtenido con el procedimiento tradicional de elevada temperatura. La destilación bajo presión ha presentado un rendimiento de etanol satisfactorio, aunque ligeramente inferior al obtenido en la destilación a la presión atmosférica. Se ahorro más de un 40% de consumo de energía en forma de vapor de agua al adoptar el tratamiento del almidón a baja temperatura y el proceso de destilación bajo presión en la producción de etanol a partir de cassava. El rendimiento de etanol anhidro varió según el contenido de almidón de la materia prima, oscilando entre 185 a 200 litros pot tonelada de cassava.

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Résumé La production d'éthanol à partir de racines fraîches de cassava comme matière première, à basse température, a été évaluée à l'échelle de plante d'essai. L'utilisation de température basse pour le traitement de l'amidon de cassava, suivi d'une double action enzymatique, a résulté en un rendement d'éthanol comparable a celui obtenu par le procédé traditionel a température élevée.: La destilation sous pression s'est présentée satisfaisante en ce qui concerne le rendement en éthanol. Cependant, celui-ci s'est montré légèrement inférieur à celui obtenu par destilation à la pression atmosphérique. Une économie d'énergie en forme de vapeur d'eau de plus de 40% a été le résultat de l'emploi de basse temperature pour le traitement de l'amidon de cassava et du procédé de destilation sous pression dans la production d'éthanol à partir de racines de cassava. Le rendement en éthanol anhydre a varié selon le contenue en amidon de la matière première, en oscillant entre 185 et 200 litres par tonne de racines de cassava.

     

Fixation d'azote par les cyanobacteries dans les rizières du Mali

Résumé La fixation de l'azote par les cyanobactéries a été étudiée pendant un cycle végétatif dans trois rizières pluviales soudano-sahéliennes ne recevant pas d'engrais azoté. Lorsque l'illumination solaire est forte, et en l'absence de couvert végétal, l'activité réductrice de l'acétylène (ARA) présente deux maximums, en fin de matinée et au milieu de l'après-midi. Dans le cas d'une intensité lumineuse moyenne ou faible et d'une couverture dense, on constate un maximum unique en fin de matinée ou début d'après-midi. Au cours du cycle cultural, l'ARA présente deux maximums, l'un au moment du tallage, l'autre à maturation du riz. En ce qui concerne les cyanobactéries fixatrices, le premier maximum correspond à la prédominance d'espècesd'Anabaena, et le second à la prédominance d'espèces deCylindrospermum. Dans une des rizières étudiées, aucune forme fixatrice de l'azote n'a été observée. Plusieurs espèces hétérocystées non-fixatrices ont été identifiées. Des expériences en vases de végétation ont confirmé l'inhibition de TARA des cyanobactéries par les fortes intensités lumineuses. LesOscillatoria se protègent contre la lumière par phototactisme négatif (enfouissement dans le sol) et par un processus de photocinèse agrégative.

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Nitrogen fixation by cyanobacteria in paddy fields of Mali

Summary Nitrogen fixation by cyanobacteria was studied during a cropping cycle in three rain paddy fields of Mali that had not received exogenous nitrogen. Under intense sunlight and in the absence of a crop canopy, the acetylene reducing activity (ARA) showed two maxima, at the end of morning and in mid-afternoon. With medium or low intensity of light and dense plant cover, a single maximum was observed at the end of the morning. In the course of the cropping cycle, ARA showed two maxima, at the tillering period and at crop ripening. In regard to the nitrogen-fixing cyanobacteria, the first ARA peak corresponded to the predominance ofAnabaena species and the second one to the predominance ofCylindrospermum species. No nitrogen-fixing forms were observed in one of the paddy fields studied. A number of heterocystic non-fixing species have been identified. Pot experiments confirmed the inhibition of ARA in cyanobacteria by high light intensity.Oscillatoria spp. are self-protected against light by negative phototactism and by a process of photokinetic agregation.

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Fijación de nitrógeno por cianobacterias en arrozales de Malí

Resumen Le fijación de nitrógeno por cianobacterias se estudió, durante un ciclo vegetativo completo, en tres arrozales de tipo pluvial, en Malí, a los que no se aportó ningún abono nitrogenado. Cuando la intensidad de la luz solar es fuerte y en ausencia de cubierta vegetal la actividad reductora de acetileno (ARA) presenta dos máximos: el primero al final de la mañana y el segundo a media tarde. Con una intensidad luminosa media o baja y una cubierta vegetal densa se observó un único máximo al final de la mañana o principio de la tarde. Durante el ciclo del cultivo la ARA presenta dos máximos: el primero relacionado con el momento de formación de la espiga y el segundo con la maduración del arroz. En cuanto concierne a las cianobacterias fijadoras, el primer máximo corresponde a una predominancia de especies deAnabaena y el segundo a una de especies deCylindrosporum. En uno de los arrozales estudiados no se ha observado ninguna forma fijadora de nitrógeno. Se han identificado especies no fijadoras de nitrógeno aunque formadoras de heterocistes. La inhibición de ARA por fuertes intensidades luminosas se ha confirmado mediante experiencias en maceta. LasOscillatoria spp. se autoprotegen de la luz mediante fototactismo negativo (se entierran en el suelo) y gracias a un proceso de fotocinesis agregativa.

     

Purification and some properties of a thermostable protease ofThermoactinomyces thalpophilus

Summary A thermostable protease fromThermoactinomyces thalpophilus was purified to give a single protein band on disc PAGE with a molecular size of 55000 Da. Optimal proteolytic activity of the purified protease was at pH 6.0 and 70°C. The enzyme was maximally stable between pH 5.0 and 8.0 and retained 62% of its original activity at 70°C after 30 min. Temperature stability was not improved in the presence of Ca²⁺ (1mm). Enzyme activity was inhibited by AG⁺, Hg²⁺, Ba²⁺ and Co²⁺, partially inhibited byo-phenanthroline but not by diisopropylfluorophosphate (5mm).

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Resumen Se purificó una proteína termoestable deThermoactinomyces thalpophilus que dió una sola banda proteica al someterla a una electroforesis en columna de poliacrilamida (PAGE) y un tamaño molecular de 55.000 Da. La actividad proteolítica de la proteína purificada era óptima a pH 6.0 y 70°C. El enzima tenía máxima estabilidad entre pH 5.0 y 8.0 y retuvo un 62% de su actividad original despues de 30 min at 70°C. La estabilidad térmica no mejoró en presencia de Ca²⁺ (1mm). La actividad enzimática fue Inhibida por Ag⁺

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Résumé Une protéase thermostable deThermoactinomyces thalpophilus a été purifiée jusqu'à donner une bande protéique unique sur un disque PAGE avec un poids moléculaire de 55000 daltons. L'activé protéolytique optimum de la protéase purifiée se situe à pH 6.0 at à 70°C. L'enzyme présente son maximum de stabilité entre pH 5.0 et 8.0 et conserve 62% de son activité originelle après 30 min à 70°C. La stabilité à la température n'est pas améliorée en présence de Ca²⁺ 1mm. L'activité enzymatique est inhibée par Ag⁺, Hg²⁺, Ba²⁺ et Co²⁺. Elle est partiellement inhibée par l'o-phénanthroline mais elle n'est pas inhibée par le di-iso-propylfluorophosphate 5mm.

     

Temperature-dependent production of two macrolide-like antibiotics produced by an actinomycete (isolate 69B200)

Summary Two macrolide-like antibiotics were detected in the fermentation broth of an actinomycete (isolate 69B²⁰⁰) when grown either at 25 or 35°C. This strain showed high resistance to erythromycin, but was sensitive to non-macrolide antibiotics. The purified antibiotic from cultures grown at 25°C (compound I) showed activity againstEscherichia coli: compound II, produced at 35°C, was active againstStaphylococcus aureus. The molecular weights, determined by mass spectrometry, of compounds I and II are 293 and 307, respectively. Both compounds showed peaks in the u.v. spectra at 225 and 275 nm. Infra-red analysis indicated the presence of hydroxyl and carbonyl groups in both compounds: a lactone group was detected in compound II. The H-NMR spectrum demonstrated the presence of methyl groups in both compounds. Amino sugar is present in both compounds. The physico-chemical properties of the compounds do not correspond to those of any of the known macrolide antibiotics.

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Resumen Dos antibióticos de tipo macrólido fueron detectados en el caldo de fermentación de un actinomicete (aislado 69B²⁰⁰) cuando éste crecía tanto a 25°C como a 35°C. Esta cepa era muy resistente a la eritromicina siendo, sin embargo, sensible a antibióticos no macrólidos. El antibiótico purificado, a partir de cultivos que crecían a 25°C (compuesto I), mostró actividad contraE. coli. El compuesto II, producido a 35°C, era activo contraS. aureus. Los pesos moleculares, determinados mediante espectrometría de masas, de los compuestos I y II fueron, respectivamente, 293 y 307. Ambos compuestos mostraron picos en el espectro u.v. a 225 y 275 m. Los análisis mediante i.r. mostraron la presencia de grupos hidroxilo y carbonilo en ambos compuestos y de un grupo lactona en el compuesto II. El espectro RMN-H indicó la existencia de grupos metilo en ambos compuestos. En los dos compuestos hay un azúcar aminado. Las propeidades físico-químicas de ambos compuestos no se corresponden con las de ningún otro antibiótico macrólido conocido hasta el momento.

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Résumé Deux antibiotiques de type macrolide ont été décelés dans le bouillon de culture d'un actinomycète (souche 69B²⁰⁰). Cette souche présente une forte résistance à l'érythromycine, mais est sensible aux antibiotiques n'appartenant pas au groupe des macrolides. L'antibiotique purifié à partir des cultures développées à 25°C (composé I) est actif à l'égard deEscherichia coli; le composé II, produit à 35°C, agit surStaphylococcus aureus. Les poids moléculaires des composées I et II, déterminés par spectrographie de masse, sont respectivement de 293 et 307 daltons. Les spectres u.v. des deux composés présentent des pics à 225 et 275 nm. L'analyse dans l'i.r. révèle la présence de groupements hydroxyle et carbonyle dans les deux substances et un groupement lactone a été détecté dans le composé II. Le spectre RMH-H montre la présence de groupements méthyle dans les deux substances. D'autre part, chacune d'elles contient un sucre aminé. Les propriétés physico-chimiques de ces composés ne correspondent à celles d'aucun antibiotique macrolide antérieurement connu.

     

Cryopreservation of Azotobacteraceae in liquid nitrogen

Summary Agar-grown cultures of 144 strains of Azotobacteraceae were suspended in 0.5 ml of 10% (v/v) glycerol in glass ampoules and rapidly frozen and stored in liquid nitrogen. On revival, ampoules were rapidly warmed by agitation in a waterbath at 33°C until thawing occurred. All cultures remained viable for up to 7.5 years, grew with short lag phases on revival and suffered no apparent phenotypic changes. Quantitative assessments of representative strains of all species suffered losses in viability after 2.5 or 5 years in liquid nitrogen that were generally less than one decimal reduction from unfrozen suspensions of 10⁷–10⁹ cells/ml. The method is considerably better than freeze-drying or simple desiccation for the more-difficult species likeAzomonas insignis, A. agilis, Azotobacter beijerinckii, Azomonotrichon macrocytogenes andDerxia gummosa, and indications are that strains of all species could be preserved in this way for decades.

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Resumen Se suspendieron 144 cepas de azotobacteriaceas, cultivadas en agar, en 0.5 ml de glicerol al 10% (v/v) en viales de cristal que se congelaron rapidamente y se almacenaron en nitrógeno líquido. Para recuperar las cepas se calentaron los viales mediante agitación en un baño de agua a 33°C hasta que se deshelaron los cultivos. Todas las cepas permanecieron viables hasta 7.5 años, al recuperarlas crecieron con fases lag cortas y no sufrieron cambios fenotipicos apreciables. Las cepas representativas de todas las especies sufrieron perdidas de viabilidad inferiores a un decimal comparadas con suspensiones no congeladas de 10⁷–10⁹ células/ml; después de permanecer en nitrógeno líquido 2.5 ó 5 años. Este método es sensiblemente mejor que la liofilizatión o la simple desecación para las especies más dificiles como:Azomonas insignis, A. agilis, Azotobacter beijerinckii, Azomonotrichon macrocytogenes, y,Derxia gummosa. Existen indicios que permiten suponer que cepas de todas estas especies podrían conservarse mediante este método durante décadas.

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Résumé Les cultures sur agar de 144 souches d'Azotobacteraceae ont été suspendues, chacune, dans 0.5 ml de glycerol à 10% (vol. vol.^–1) dans des ampoules en verre, congelées rapidement et conservées dans l'azote liquide. Pour les revivifier, les ampoules ont été très rapidement réchauffées par agitation dans un bain d'eau à 33°C jusqu'au dégel. Toutes les cultures sont restées viables pour des périodes allant jusqu'à 7.5 ans, se sont développées avec des phases de latence courtes lors de la revivification et ne présentaient aucun changement phénotypique. Les souches représentatives de chaque espèce n'ont souffert en général que de pertes de viabilité inférieures à une réduction décimale, par rapport à la culture de départ qui contenait entre 10⁷ et 10⁹ cellules par ml. Cette méthode de conservation est considérablement meilleure que la lyophilisation ou la simple dessication pour les espèces plus délicates commeAzomonas insignis, A. agilis, Azotobacter beijerinckii, Azomonotrichon macrocytogenes etAzomonas gummosa. Des indices suggèrent que les souches de toutes les espèces pourraient bien être consevables pendant des décades.

     

Incidence and enterotoxigenicity of enterotoxigenic (Escherichia coli) from uncooked meat sausages

Summary The incidence of enteropathogenicEscherichia coli was higher (33 to 50%) in uncooked chicken sausages than in pork sausages (10 to 43%). The toxigenic isolates in general were of O5 and O89 sero types ofE. coli. The amount of toxin produced varied in raw and boiled sausages as tested by ileal loop and rabbit skin permeability tests. The toxin production was invariably higher at 28°C or 37°C in raw and boiled sausages than at 45°C.

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Resumen La incidencia de cepas enteropatógenas deEscherichia coli fue mayor (33 a 50%) en salsichas de pollo crudas que salsichas de cerdo. Los aislados toxinogénicos pertenecían en su mayoría a los serotipos O5 y O89 deE. coli. La variación en la cantidad de toxina producida entre salsichas crudas y hervidas se midió mediante pruebas de permeabilidad en asa ileal y piel de conejo. La producción de toxinas, tanto en salsichas crudas como hervidas, era mayor a 28°C o a 37°C que a 45°C.

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Résumé L'incidence de souches entéropathogènes d'Escherichia coli était plus élevée (33 à 50%) dans les saucisses de poulet cru que dans les saucisses de porc cru (10 à 43%). Les souches toxigènes d'E. coli isolées étaient en général de type sérologique O5 ou O89. Les tests du loop iléal et de la perméabilité de la peau de lapin ont démontré que la quantité de toxine produite variait dans les saucisses crues et bouillies. La production de toxine était invariablement plus élevée à 28 ou à 37°C qu'à 45°C tant dans les saucisses crues que dans les saucisses bouillies.

     

Effect ofRhizobium inoculation and the application of phosphate on the growth,yield and nitrogen fixation of soybeans

Summary Application of phosphate at 60, 90 and 120 kg P ha^–1 to the Bragg variety of soybeans inoculated with a mixture of three strains ofRhizobium japonicum (TAL 102 + TAL 377 + TAL 379) and grown in silty loam soil in a pot experiments, significantly improved the number of nodules per plant and increased production of shoots and roots by 65, 36 and 17%, the yield of pods by 38, 12 and 3% and N₂-fixing capacity by 57, 29 and 20%, respectively. Rhizobium inoculation alone with the test strains caused a positive but poor nodulation of the crop and increased its dry-matter production of shoots and roots by 22%, pods yield by 7% and N₂-fixing capacity by 6%. Soybean plants from uninoculated treatments were without nodules indicating that indigenous rhizobia associated with this crop are absent in the test soil. Phosphate concentration in the total dry matter of mature crop exhibited an increasing tendency as a result of all the applied levels of phosphorus.

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Resumen La adición de fosfato (60, 90, y 120Kg P ha^–1) a plantas de soja de la variedad Bragg inoculadas con una mezcla de tres cepas deRhizobium japonicum (TAL 102 + TAL 377 + TAL 379) cultivada en contenedores en un suelo arcillo-limoso, mejoró significativamente el número de nódulos por planta, aumentó la producción de tallos y raíces en un 65, 36 y 17%, el rendimiento de la cosecha en un 38, 12 y 3%, y la capacidad fijadora de N₂ en un 57, 29 y 20% respectivamente. La sola inoculación con las cepas deRhizobium ya mencionadas produjo una nodulación positiva aunque pobre del cultivo, incremetando la producción de tallos y raíces en un 22%, el rendimiento de la cosecha en un 7% y la capacidad fijadora de nitrógeno en un 6%. Las plantas de soja de los tratamientos no inoculados no tenían nódulos lo que indica que no habían rizobios específicos para esta planta en el suelo ensayado. La concentración de fosfato en la materia seca de las plantas maduras mostraba una tendencia a incrementarse como resultado de la aplicación de los distintos niveles de fosfato.

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Résumé L'application du phosphate à raison de 60, 90 et 120 kg en phosphore par hectare à la variété Bragg de soja inoculée avec un mélange de 3 souches deRhizobium japonicum (TAL 102, TAL 377 et TAL 379) et cultivée sur un sol gras limoneux dans des expériences en jarre de croissance, a augmenté de manière significative le nombre de nodules par plant et a augmenté la production des pousses et racines respectivement de 65, 36 et 17%, le rendement des cosses respectivement de 38, 12 et 3% ainsi que la capacité de fixer l'azote, respectivement de 57, 29 et 20%. L'inoculation seule avec les souches testées de Rhizobium a causé une nodulation positive mais faible de la plante, et a augmenté la production en matière sèche des racines et pousses de 22%, le rendement en cosses de 7% et la capacité de fixer l'azote de 6%. Les plants de soja dans les expériences sans inoculation ne présentaient pas de nodules, indiquant par là que les rhizobia endogènes associés avec cette plante étaient absents dans le sol expérimental. La concentation en phosphate dans la matière sèche totale de la plante mûre a marqué une tendance à l'augmentation comme suite aux applications du phosphore à tous les niveaux.

     

World culture collections ofRhizobium

Summary Reliable and efficientRhizobium germplasm banks are essential for the development of research and for practical application. The second edition of the World Catalogue ofRhizobium Collections lists 64 institutions in 38 countries holding some 3000 effective, tested strains. MIRCENs Culture Collections are playing an important role in this way and in the dissemination of valuable strains for legume inoculation. Constraints for development are: adequate facilities and equipment, trained personnel, co-ordination of effort. Recommendations are: preparation of an inventory on technical aspects, new directives for training and for next edition of the Catalogue, establishment of specialized germplasm banks.

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Resumen Los bancos de germoplasma deRhizobium son esenciales tanto para el desarrollo de la investigación como para el de las aplicaciones prácticas. La segunda edición del catálogo mundial de las colecciones deRhizobium cuenta con 64 instituciones repartidas en 38 países con un total de más de 3000 cepas de probada eficacia. Las colecciones de cultivos de los MIRCEN tienen un papel importante tanto en su valor intrínseco como en la distribución de cepas eficaces para la inoculación de leguminosas. Los principales problemas con los que se enfrenta su desarrollo son: facilidades adecuadas y equipamientos; personal cualificado y coordinación de esfuerzos. Las recomendaciones son: preparación de inventarios sobre aspectos técnicos; nuevas directrices para la formación de personal y para la edición de catálogos; establecimiento de bancos de germoplasma especializados.

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Résumé Des collections deRhizobium fiables et efficaces sont essentielles à la fois pour la recherche et pour les applications agricoles. La deuxième édition du catalogue mondial des collections deRhizobium comporte 64 institutions, situées dans 38 pays, et environ 3.000 souches testées. Les collections de cultures des MIRCEn jouent un rôle important sur le plan scientifique et en ce qui concerne la distribution de souches utilisées pour l'inoculation des légumineuses. Leur développement est soumis à des difficultés concernant les installations et l'équipement, le personnel qualifié, et la coordination des efforts. Il est recommandé de faire l'inventaire des aspects techniques et de formuler de nouvelles directives pour la formation technique, pour la prépartion d'une nouvelle édition du catalogue, et pour l'établissement d'une banque de gènes spécialisée.

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Invited paper presented at the VII International Conference on the Global Impacts of Applied Microbiology, Helsinki, 12–16.8.1985. Session 2     

An 11-space code for bacterial names

Citation of names of bacteria in records intended for storage and retrieval of information in computer files presents serious problems because of the variable lengths of the generic name and specific epithets. In this paper an eleven space alpha-numeric code is proposed for each valid species and subspecies, based on internationally approved documents, for use in computer filing.

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Un código de once espacios para nombres de bacterias

Resumen Las citas de nombres de bacterias en informaciones que han de ser almacenadas y utilizadas a través de un ordenador presentan serios problemas debido a la variación en longitud de su nombre genérico y al uso de espítetos específicos. Este trabajo propone la utilización de un código alfa-numérico de once espacios para cada especie y subespecie válida basado en regalamentaciones y documentos approbados internacionalmente que facilitaría la utilización de sistemas electrónicos de ficheros.

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Un code à onze espacements pour les noms de bactéries

Résumé La dénomination des bactéries pour conservation et récupération de l'information dans un ordinateur pose, à cause de la longueur variable du nom générique et des épithètes spécifiques, de sérieux problèmes. Dans cet article, il est proposé pour chaque espèce et sous-espèce valide un code alpha-numérique de onze espacements, basé sur des documents internationalement approuvés.

     

Ecology of microalgae in a high rate pond for piggery effluent purification in Singapore

Summary An integrated system for the collection, treatment and utilisation of piggery wastewater has been developed in Singapore which uses the cultivation of microalgae in high rate ponds to achieve reduction of BOD₅ and COD₅ of the effluent as well as producing single cell protein. A wide range of algal flora occurs in the ponds;Oocystis, Micratinium, Scenedesmus, Ankistrodesmus, Chlorella andOscillatoria spp were identified. Total algal counts, recorded from 1979 to 1981, ranged up to 10⁷ per ml of pond water. There were considerable variations in the algal population and in the predominating species. No discernible pattern was evident. Consequently pond operations were frequently disturbed by these fluctuations in population which in turn was attributed to the heterogeneous composition of the piggery waste, to variable weather conditions and to predation by larger organisms particularlyMoina. After passing through the ponds, the total suspended solids were removed by a novel dissolved air flotation method which gave a clear effluent showing an 87% reduction in BOD₅ value.

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Resumen En Singapur se ha desrrollado un sistema integrado para le recogida, tratamiento y utilización de aguas residuales de pocilgas. Este sistema usa el cultivo de microalgas en estanques, de caudal rápido afin de reducir las DBO₅ y DCO₅ del efluencte produciendo asimismo proteínas celulares. La flora de algas producida en estos estanques es amplia y variada, habiendose identificado:Oocystis, Micratinium, Scenesdemus, Ankistrodesmus, Chlorella y Oscillatoria. Los recuentos totales de algas tomados desde 1979 a 1981 llegaron a alcanzar 10;⁷ por ml de agua del estanque. Se observaron variaciones considerables tanto en la población total de algas como en las especies predominantes sin que se pudiese, determinar un patrón de variación característico. Estas fluctuaciones en la población, causantes de frecuentes alteraciones en el funcionamiento del estanque, se atribuyeron a la composición heterogenea de los resuduos, a las variaciones climáticas y la predación por otros organismos particularmenteMoina Después de su paso por los estanque los solidos suspendidos totales se eliminaron mediante un nuevo método de flotación con aire disuelto, obteniendose un efluente limpio con una reducción de la DBO₅ del 87%.

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Résumé Un système intégré pour la collecte, le traitement et l'utilisation d'eaux résiduaires de porcherie a été développé à Singapoure. Il utilise la culture de micro-algues tant pour la réduction accélérée en lagune de la DBO₅ et de la DCO de l'effluent que pour la production de protéines uni-cellulaires. On trouve une large gamme de flore algale dans les lagunes; des espèces d'-Oocystis, deMicratinium, deScenedesmus, Ankistrodesmus, deChlorella etd'Oscillatoria out été identifiées. Les comptages totaux d'algues, enregistrées de 1979 à 1981, ont donné jusqu' à 10⁷ cellules par ml d'eau de la lagune. On a observé des variations considérables de population algale tant quantitatives que qualitatives. On ne discernait pas de spectres évidents. En conséquence, les opérations lagunaires ont été fréquemment perturbées par ces fermentations en population, qui, à leur tour, ont été attribuées à la composition hétérogène de l'effluent de porcherie, aux conditions atmosphériques et climatiques variables et à la prédation par des organismes plus conséquents, plus particulièrement desMoina. Après passage par les lagunes, les solides totaux en suspension ont été enlevés par une méthode nouvelle de flottation à l'air dissous, qui a donné un effluent limpide, présentant une réduction de DBO₅ de 87%.

     

Survival of Azotobacteraceae desiccated over silica gel

Summary The suitability of desiccation over silica gel for preserving 213 strains of 14 species of Azotobacteraceae was examined.Azomonas insignis did not survive desiccation and rehydration.Azomonas agilis andAzotobacter beijerinckii survived desiccation but remained viable for only short storage times. In general, otherAzotobacter spp.,Azorhizophilus paspali, Azomonotrichon macrocytogenes, Beijerinckia spp., andDerxia gummosa are amenable to preservation by this technique. The results are discussed in relation to cellular features that enhance resistance to desiccation and the ecology of these organisms.

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Resumen Se estudió la conveniencia de la desecación en silicagel para preservar 213 cepas pertenecientes a 14 especies de Azotobacteriaceas.Azomonas insignis no sobrevivió al proceso de desecación y rehidratación.Azomonas agilis yAzotobacter beijerinckii sobrevivieron a la desecación pero solo fueron viables durante un corto periodo de tiempo. En general esta técnica puede emplearse para mantener otras especies deAzotobacter spp., Azorhizophilus paspali, Azomonotrichon macrocytogenes, Beijerinckia spp. yDerxia gummosa. Los resultados obtenidos se discuten teniendo en cuenta las características celulares que favorecen la resistencia a la desecación y la ecología de estos microorganismos.

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Résumé La convenance de la dessiccation sur silica-gel pour la conservation de 213 souches appartenant à 14 espèces d'Azotobacteraceae a été éxaminée.Azomonas insignis ne survit pas à la dessiccation et rehydratation.Azomonas agilis etAzotobacter beijerinckii survivent à la dessiccation, mais ne restent viables que peu de temps. En général, lesautresAzotobacter spp.,Azorhizophilus paspali, Azomonotrichon macrocytogenes, Beijerinckia spp. etDerxia gummosa peuvent être conservés par cette technique. Les résultats sont discutés en relation avec les structures cellulaires qui conditionnent la résistance à la dessiccation et avec l'écologie des organismes.

     

Rhizobium biomass production in batch and continuous culture with a malt-sprouts medium

Summary The growth of nine strains of four different species ofRhizobium (R. leguminosarum, R. meliloti, R. phaseoli andR. japonicum) was studied with media containing malt sprouts extract (MSE), in place of yeast extract (YE), as source of nitrogen and growth factors. The results obtained in batch cultures indicated that all the strains grew well in MSE medium. In the case of fast-growing strains the biomass increased with increase in the concentration of MSE in the medium, but with the slow-growing strains, likeR. japonicum, growth was inhibited completely by using a concentration of MSE (containing 3.75% w/v of solids) of 40% v/v. With all the strains the concentration of cells attained was greater than 5×10⁹ cells/ml, which clearly indicates that MSE is a suitable component of media, and one which can be used instead of YE. The results of continuous culture experiments showed that a high productivity of cells (15.3×10⁸ cells/ml/h) could be obtained using MSE medium.

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Producción de Rhizobium en cultivos batch y continuo sobre medio conteniendo extracto de raiz de malta

Resumen Se estudió el crecimiento de nueve cepas de cuatro especies diferentes deRhizobium (R. leguminosarum, R. meliloti, R. phaseoli y R. japonicum) en medios de cultivo conteniendo extracto de raíz de malta (ERM), en reemplazo de extracto de levaduras (EL), como fuente de nitrógeno y factores de crecimiento. Los resultados obtenidos en cultivos en batch indicaron que todas las cepas crecieron bien en los medios con ERM. En el caso de las cepas de crecimiento rápido la biomasa se incrementó con la concentración de ERM en el medio de cultivo, pero con las cepas de crecimiento lento(R. japonicum) el desarrollo celular se inhibió completamente para concentraciones de ERM (conteniendo 3,75% p/v de sólidos) de 40% v/v. Con todas las cepas empleadas la concentración celular alcanzada fue superior a 5×10⁹ cél/ml, lo que indica claramente que el ERM es un adecuado componente para los medios de cultivo que puede reemplazar al EL. Los resultados de los experimentos realizados en sistema continuo mostraron que se puede alcanzar una alta productividad (15,3×10⁸ cél/ml/h) utilizando un medio de cultivo suplementado con ERM.

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Production de Rhizobium en culture discontinue et continue sur milieu à base de germes de malt

Résumé La croissance de neuf souches appartenant à quatre éspèces différentes deRhizobium (R. leguminosarum, R. meliloti, R. phaseoli etR. japonicum) a été étudiée avec des milieux contenant, comme source d'azote et de facteurs de croissance, un extrait de germes de malt (MSE) au lieu d'extrait de levure (YE). Les résultats obtenus en culture discontinue (batch) montrent que toutes les souches poussent bien en milieu MSE. Dans la cas des souches à croissance rapide, la biomasse augmente proportionnellement à la concentration de MSE dans le milieu. Par contre, pour les souches à croissance lente, commeR. japonicum, la croissance est complètement inhibée lorsque la concentration en MSE (contenant 3.75% w/v de solides) atteint 40% (v/v). Avec toutes les souches, on obtient une concentration en cellules supérieure à 5×10⁹/ml, ce qui indique clairement que le MSE convient bien et peut être utilisé à la place de YE. Les expériences réalisées en culture continue montrent qu'on peut obtenir avec le milieu MSE une productivité en cellules très élevée (15.3×10⁸ cellules/ml/h.).

     

Effect of temperature,light intensity and dilution rate on the cellular composition of red algaPorphyridium cruentum in light-limited chemostat cultures

Summary The fatty acid, polysaccharide and pigment contents ofPorphyridium cruentum at different growth temperatures, light intensities and dilution rates were studied in light-limited chemostat. The highest biomass yield was obtained at 25°C over the range of dilution rate studied (0.079 to 0.30 day^–1). The production of fatty acids increased with increasing dilution rates. At low dilution rates, the contents of fatty acids at 20°C, 25°C and 30°C were comparable. Temperature did not affect the content of linolenic acid (182) though fatty acids with less than two double bonds predominated at higher temperatures, those with more than two double bonds accumulated at lower temperatures. The yields of arachidonic acid (204) increased under light of higher intensity. The maximum production of extracellular and cellular polysaccharides occured at low dilution rates under high light at 25°C. The amounts of chlorophylla, carotenoids and phycoerythrin all increased in the same proportions with dilution rate, and were highest at 25°C.

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Resumen Se estudió el contenido en polisaccaridos, pigmentos y ácidos grasos dePorphyridium cruentum a distintas temperaturas, intensidades lumínicas y porcentajes de dilución en un quimiostato con luz limitada. La mayor cantidad de biomasa para todas las diluciones estudiadas (0.079 a 0.30 día^–1) se obtuvo a 25°C. A bajas diluciones los contenidos en ácidos grasos a 20°C, 25°C y 30°C eran comparables. La temperatura no afectó al contenido en ácido linolénico (182), sin embargo los ácidos grasos con menos de dos dobles enlaces se acumularon a temperaturas más bajas. La producción de ácido arachidónico (204) se incrementó bajo la mayor intensidad lumínica ensayada. La producción máxima de polisaccaridos celulares y extracelulares se dió a bajas diluciones en condiciones de alta iluminación a 25°C. Las cantidades de clorofila a, carotenoides y ficoeritrina se incrementaron paralelamente al porcentaje de dilución siendo más elevadas a 25°C.

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Résumé On a étudié le contenu dePorphyridium cruentum en acides gras, en polysaccharides et en pigments, en fonction de la température de croissance, de l'intensité lumineuse et du taux de dilution dans un chémostat limité par la lumière. Le rendement le plus élevé en biomasse a été obtenu à 25°C quel que soit le taux de dilution (compris entre 0.079 et 0.30 jours^–1). La production d'acides gras augmente avec l'augmentation du taux de dilution. A des taux de dilution faibles, le contenu en acides gras est indépendant de la température (comprise entre 20 et 30°C). La température n'influence pas le contenu en acide linolénique (182) bien que les acides gras à deux ou plusieurs doubles liaisons s'accumulent à température plus basse. Les rendements en acide arachidonique (204) augmentent sous une lumière de plus forte intensité. La production maximum de polysaccharides tant extracellulaires que cellulaires a lieu à un taux faible de dilution sous une lumière intense à 25°C. Les teneurs en chlorophylle a, caroténoïdes et en phycoerythrine augmentent toutes les trois dans les mêmes proportions avec le taux de dilution et sont les plus élevées à 25°C.

     

Some factors influencing permeability of cell walls/membranes of the osmotolerant yeastSaccharomyces rouxii grown in the presence and absence of 18% NaCl

Summary Saccharomyces rouxii is an essential micro-organism in the soy sauce/Japanese shoyu/Japanese miso fermentations. Its major activity occurs under conditions of high NaCl content, up to 18% or higher when the pH of the substrate is below 5.0.Saccharomyces rouxii grew much more rapidly and to higher cell population levels in the absence of added salt than with 18% (w/v) NaCl at either pH 7.0 or 4.5. Cells grown with 18% salt were smaller than those grown without added salt. Lower surface area combined with a thicker membrane decreased passive permeability. Growth in the presence of salt resulted in higher content of crude protein, total lipids, phosphatidyl choline and glycerol. The lipid content of the cells reflected the osmotic pressure whether it was caused by NaCl or sugar concentration in the medium. On the other hand, the cells grown in the presence of 18% NaCl contained much less K⁺ and retained potassium and sodium less efficiently. The triosephosphate isomerase (TPI) activity of cells grown in 18% NaCl medium was consistently higher than that of cells grown without added salt.

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Resumen Saccharomyces rouxii es un microorganismo esencial en los procesos fermentativos japoneses shoyu miso y de obtención de salsa de soja. La parte más importante de la actividad de esta levadura se desarrolla en medios con una elevada concentración de sal (hasta más de 18%) y pH inferiores a 5.0.Saccharomyces rouxii creció más rapidamente y alcanzó concentraciones celulares mayores en un medio sin sal que en un medio con 18% de sal, tanto a pH 7.0 como a pH 4.5. Las células desarrolladas en el medio con sal fueron de tamaño inferior que las obtenidas en el medio sin sal. La menor superficie de estas últimas combinada con un mayor espesor de su membrana celular resultan en una disminución del transporte pasivo. El contenido proteíco de las células desarrolladas en el medio sin sal fue de 36.0% contra 49.5% en las células obtenidas en el medio con 18% de NaCl y 43% en células desarrolladas en medios con un contenido en sal entre 6 y 12%. Las células obtenidas en un medio sin sal retuvieron de forma similar su contenido en Na⁺ y K⁺ independientemente de la solución de lavado y de la temperatura empleadas. El contenido de Na⁺ fue de 0.04–0.06 mg Na/g de materia seca y el de K⁺ 7.78–10.04 mg K/g de materia seca. Las células desarrolladas en un medio con adición de sal contenían menor cantidad de K⁺ (0.48–4.77 mg/g de materia seca) variando con las condiciones de lavado. Se observó que las células obtenidas en el medio con 18% de NaCl contenían más lípidos totales (10.13%) comparadas con las células desarrolladas sin sal (6.22%). La cantidad total de fosfatidilcolina y sus liso derivados fue de 72% para las células del medio salado contra 58% en las células sin sal. El contenido lipídico de las células refleja la presión osmótica, ya sea esta producto de la concentración de NaCl o de azucar. Al incrementar el contenido en sal de el medio desde 0–6% hasta 12–18% el contenido intracelular de glicerol aumentó proporcionalmente de 0.429–1.014 hasta 1.107–1.668 mg%. El contenido en triosafosfatoisomerasa de las células crecidas en el medio con 18% NaCl fue de 66.94 unidades/mg de proteína comparado con 42.82 unidades/mg de proteína en las células obtenidas en el medio sin adición de sal.

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Résumé Saccharomyces rouxii est un micro-organisme essentiel dans la fermentation des sauces de soja japonaises (shoyu, miso). Son activité optimale nécessite des concentrations en NaCl élevées, allant jusqu' à 18% (poids/volume), ou même davantage lorsque le pH du substrat est inférieur à 5,0. A pH 7,0 ou 4,5,S. rouxii se développe beaucoup plus rapidement et abondamment en présence qu'en l'absence de sel. Les cellules cultivées en présence de NaCl sont plus petites que celles cultivées sans sel. Du fait à la fois de leur surface moindre et de leur membrane plus épaisse, leur perméabilité passive est diminuée. Leurs teneurs en protéine brute, lipides totaux et glycérol sont sensiblement plus élevées. La teneur des cellules en lipides est déterminée par la pression osmotique, que celle-ci dépende de la concentration du milieu en NaCl ou en sucre. D'autre part, les cellules cultivées avec 18% de NaCl contiennent beaucoup moins de K⁺ et retiennent moins bien le potassium et le sodium que les cellules cultivées sans sel. L'activité triose-phosphate isomérase des cellules cultivées avec 18% de NaCl est supérieure à celle des cellules cultivées sans addition de sel.