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将油桐尺蠖核多角体病毒晚期基因-多角体蛋白基因启动子及5’端编码区,以两种不同方式置于缺乏启动子的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因上激,使其分别终止在不同翻译终止位点,其宿主菌具有明显不同的氯霉素抗性,最高达200mg/LLB培养基以上,表明昆虫病毒启动子能启动原核基因表达,对多角体蛋白基因启动子能在大肠杆菌中有效工作的原因进行了讨论。 相似文献
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齐义鹏 《中国生物工程杂志》1990,10(6):23-24
一般相信,增强子是生物基因表达调控的普遍机制。1983年Cochran等发现昆虫杆状病毒AcNPV基因组中有5个同源序列(hrl-5)。1986年,Guarino等证明,它们有增强功能,其中以hr5活性最强。 1990年,武汉大学病毒及分子生物学系齐义鹏、张生家发现,大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)启动子上游有增强子序列,这是关于IBV极晚期高表 相似文献
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为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性, 利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus, WSSV)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子PPH, 构建了含有不同启动子控制下的EGFP报告基因的重组杆状病毒, 分别感染Sf9昆虫细胞, 利用流式细胞术检测报告基因的表达水平。结果表明, WSSV的ie1启动子和杆状病毒的mETL启动子在昆虫细胞Sf9细胞中都具有较强而早的启动子活性, 能够控制报告基因早期高效表达, 而PPH在感染后期才表现较强活性。并且研究中发现, 杆状病毒同源重复区(hr1)可以增强ETL启动子的活性。 相似文献
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为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性, 利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus, WSSV)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子PPH, 构建了含有不同启动子控制下的EGFP报告基因的重组杆状病毒, 分别感染Sf9昆虫细胞, 利用流式细胞术检测报告基因的表达水平。结果表明, WSSV的ie1启动子和杆状病毒的mETL启动子在昆虫细胞Sf9细胞中都具有较强而早的启动子活性, 能够控制报告基因早期高效表达, 而PPH在感染后期才表现较强活性。并且研究中发现, 杆状病毒同源重复区(hr1)可以增强ETL启动子的活性。 相似文献
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昆虫杆状病毒表达系统的研究进展与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
昆虫杆状病毒表达载体系统具有安全性好、重组蛋白表达量高、能同时表达多个基因、重组蛋白翻译后加工完整等特点,因而得到了广泛的应用。随着重组杆状病毒构建技术的不断发展,昆虫杆状病毒表达载体系统的操作在逐渐简化,重组杆状病毒获得的效率也在不断提高。昆虫细胞培养技术的改进和转基因昆虫细胞系的发展,进一步推动了昆虫杆状病毒表达载体系统在商品化药物、治疗性抗体、生物农药研发和基因治疗中的应用。尽管仍存在着重组蛋白降解的问题,但随着分子生物学技术的发展,对杆状病毒载体的研究与改造也会更加深入,未来昆虫杆状病毒表达载体系统的应用将更为广泛。 相似文献
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昆虫抗杆状病毒活性物质的诱导及鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
用BmNPV感染家蚕3龄幼虫,取其血淋巴经(NH4)2SO4分级沉淀,得到病毒抑制因子(viral iinhibitory factor,VIF)粗制样品Ⅰ和Ⅱ。通过TCID 50测定检测其抗病毒活性,结果VIF样品Ⅰ和样品Ⅱ均表现出抗病毒活性。将样品Ⅰ、Ⅱ经DEAE—SepharoseFF柱初步纯化,测得主要活性峰分别为峰c1,峰b2。对样品Ⅰ、Ⅱ进行SDS-PAGE电泳分析表明,样品Ⅰ比其对照样品多出4条带,它们的分子量分别为:83.7kD、65.2kD、43.0kD、32.8kD;而粗VIF样品Ⅱ比其对照样品多出一个组份,并且有3个组份表达量增多,多出的组份分子量为36.0kD。对灭活指数最高的峰b2作进一步电泳分析,证明存在5条带,其中有一条带可能是对应于样品Ⅱ上多出的那个组份。基于此初步证明,感染BmNPN的家蚕的免疫血淋巴中产生了抗病毒活性物质。 相似文献
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杆状病毒早期基因启动子载体的构及报道基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以AcNPVp10基因为侧翼序列,用AcNPV的IEI基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体,并将新霉天抗性基因插入IE1基因启动子下游,得到转移载体pAcPIneo。将它和野生型AcNPV DNA共转染昆虫细胞Sf9,由于neo基因的表达,通过G418的选择和富集作用,得到重组病毒vAcPIneo的纯培养。 相似文献
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人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
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小鼠Nanog基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
按照nanog基因编码序列设计合成引物,利用RT-PCB从小鼠的囊胚期胚胎中扩增得到该 基因,并将该基因克隆到pET-28b(+)载体上,获得pET-28b(+)-nanog原核表达重组质粒,限制 性酶分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为nanog基因编码序列。重组质粒转化大肠杆 菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达,western杂交证实该 蛋白具有6-His抗原活性,从而证实目的蛋白为Nanog蛋白。 相似文献
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霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)的克隆及其表达 总被引:7,自引:0,他引:7
从霍乱弧菌中抽提基因组DNA,用PCER方法获取霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)。序列分析结果表明,CtxB基因编码124个氨基酸,其中编码62位Thr的密码子与文献报道有差异。将CtxB基因插入质粒pGEX-4T-2,构建pGEX-CTXB表达质粒,转化大肠相菌BL21(DE30,筛选表达菌株CTXB/BL21。工程株经IPTG诱导表达,可产生大量的表达蛋白,经SDS-PAGE分析,融合蛋白分子 相似文献
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人白细胞介素22基因的分离及其在大肠杆菌中的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
白细胞介素 2 2 (IL 2 2 )是 2 0 0 0年发现的一种新的人类细胞因子 ,它在多种组织中均有表达 ,包括胰腺、脑 ,肝、小肠、直肠和肾等 .在功能方面 ,IL 2 2上调肝细胞急性期产物 ,参与炎症反应[1~ 3] ;诱导胰腺相关蛋白PAP1 Reg2和OPN的高表达 ,表明IL 2 2参与胰腺免疫功能反应[4 ] ;它对ConA刺激下Th1细胞IFN γ的产生没有明显的抑制作用 ,却大大抑制了Th2细胞IL 4的分泌 ,这对于哮喘有潜在的治疗作用[1] .我们利用反转录PCR获得了编码hIL 2 2成熟蛋白的cDNA ,并构建了高表达载体pBVhIL 2 2 ,… 相似文献
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富含蛋氨酸玉米醇溶蛋白在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:克隆玉米中富含蛋氨酸的10kD玉米醇溶蛋白,证明植物源目的基因在大肠杆菌中能够表达.方法:从玉米胚乳中克隆高蛋氨酸基因zein,通过PCR扩增zein片段,连接pGEX - 4T -1原核表达载体,转入大肠杆菌中,IPTG诱导后,HPLC测定蛋氨酸含量.结果:经PCR扩增出467bp条带,Blast分析同源性99%,经IPTG诱导进行SDS - PAGE检测,发现在36kD处出现一条明显的条带.诱导后菌体总蛋氨酸含量比正常菌体提高了9.6%.结论:证实了植物源10kD玉米醇溶蛋白在大肠杆菌中能够表达. 相似文献
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将人源CPP32基因分别克隆到载体pBV321和pEX31B中,得到pBV321/CPP和pEX31B/CPP两种重组质粒。将它们分别转化到大肠杆菌中的结果显示,诱导真核细胞程序性死亡的CPP32基因对大肠杆菌的生长也有明显的抑制作用。NorthernBlot显示CPP32基因在转录水平上得到了表达。这表明人源CPP32功能上的保守性 相似文献
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Neurturin基因克隆及在大肠杆菌中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
Neurturin( N T N)是最近发现的一种与胶质细胞源性神经营养因子( G D N F)相关的神经营养因子.利用 P C R 方法以染色体 D N A 为模板,扩增获得了编码人 N T N 成熟蛋白的基因,将其克隆于 p U C19 质粒,进行序列分析,结果与文献报道一致.将基因重组于硫氧还蛋白融合表达载体p Thio His 系统,在宿主菌 Top10 中获得了高效、稳定表达,表达的h N T N 占菌体总蛋白 20% 左右.这为进一步的基础研究与临床应用奠定了基础. 相似文献