康氏木霉(P2)纤维素酶转化蔗髓纤维素成糖及生产SCP

在30升卧式酶解罐和5升标准发酵罐中,进行了以蔗髓纤维素为基质,用康氏木霉(Trichoderma koningii)P2菌株产生的纤维素酶水解成糖生产单细胞蛋白的试验。10%的底物浓度可以得到较高的转化率。最适搅拌速度为10r/min,用酶量为2.21u/g底物,50℃酶促水解24小时,酶解液中还原糖含量为3—4%,底物得糖率49.5%,全纤维素转化率73.8%。用该酶解糖生产单细胞蛋白,试验了5升标准罐培养酵母的最适条件。     

转化蔗髓P2菌株的鉴定及其产酶条件

从蔗髓纸浆中分离筛选出一株霉菌,经鉴定,定名为康氏木霉(Trichoderma koningii)P2菌株。在蔗髓70g、麸皮30g、(NH₄)₂SO₄1.2g、(NH₂0.8g、MgSO₄·7H₂O 0.05g、KH₂PO₄0.1g、MnSO₄ 3.2mg、葡萄糖母液2g、水300ml,pH5,     

拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）UV Ⅲ产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UV Ⅲ,其液体发酵最适产酶培养基为（W／V）：豆皮粉3％,硝酸铵0．6％,磷酸二氢钠0．65％,硫酸镁0．25％,氯化钙0．15％,pH5.0;最佳发酵条件为：30℃,125r/min。发酵7d CMCase活力可达103．55IU／mL,滤纸酶活可达5．51IU／mL,β-葡萄糖苷酶活可达0．96IU／mL,分别比出发菌株TH提高了1．40、2．34、0．60倍。     

康氏木霉B—7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５－５．０,温度５５－６０℃;２５℃,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０－６．５;７     

高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子,ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理,得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７,其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力,如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ,羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,与８５４－β２相比,分别提高５．９倍,７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０,２８～３０℃,９６小时,最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３,１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。     

康氏木霉B－7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｋｏｎｉｎｇｉ）８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５—５．０,温度５５—６０°Ｃ;２５°Ｃ,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０—６．５;７０°Ｃ保温３０分钟,剩余酶活力３４．４％。     

康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶系中的Cx酶的定位

本文研究了康氏木霉Cx酶的定位。用超声和差速离心法得出Cx酶活力大量存在于培养液的上清液,一部分附着于细胞表面,少量存在于菌丝细胞内。用电镜细胞化学法得出Cx酶位于菌丝细胞壁的表面,较易脱落;有时发现位于质膜内侧与细胞壁之间。     

固态纤维素酶曲的制备

在3.54m~3体积的制曲机中,进行了以蔗髓纤维为基质,用康氏木霉(Trichoderma koningii)P_2,菌株制备纤维素酶曲及其最适参数的研究。稳定试验结果表明,P_2菌株的CMC酶活可达2000 mg/g·30 min,FP酶活10 IU/g·min。     

康氏木霉AS3.4001 纤维素酶系的研究

康氏木霉白色变异株AS 3.4001的纤维素酶系经系列分离纯化,获得6个聚丙烯酰安凝胶电泳均一的组分(组分I-V及β一葡萄糖苷酶)。组分1能单独作用于天然纤维素棉花,水解不溶性纤维素,如滤纸、纤维素粉及磷酸膨张纤维素较可溶性纤维素羧甲基纤维素钠 CMC-Na)更为容易,水解产物为纤维二糖及痕迹量葡萄糖。     

康氏木霉REMI突变株的差异表达蛋白分析（简报）

纤维素占植物干重的35%-50%,是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物,它的利用与转化对于解决目前世界能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义.     

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV III纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉 (T .pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UVIII,纤维素酶产量显著提高。研究表明 ,UVIII对诱导物的敏感性增加了 10 0倍 ,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降 ,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用 ,这可能都是该突变株产酶提高的原因     

拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)UV III产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变荻得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株uV III,其液体发酵最适产酶培养基为(w/V)豆皮粉3%,硝酸铵0.6%,磷酸二氢钠0.65%,硫酸镁0.25%,氯化钙0.15%,pH5.0;最佳发酵条件为30℃,125r/min发酵7d CMCase活力可达103.55 IU/mL,滤纸酶活可达5.51 IU/mL,β一葡萄糖苷酶活可达0 96IU/mL,分别比出发菌株TH提高了1.40、2.34、0.60倍.     

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV Ⅲ纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉（T．pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖遏突变株UVⅢ,纤维素酶产量显著提高。研究表明,UVⅢ对诱导物的敏感性增加了100倍,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用,这可能都是该突变株产酶提高的原因。     

康氏木霉纤维素酶转录因子ACEII与外切纤维二糖水解酶基因 I（cbh1）启动子的结合分析

ACEI、ACEII和Xyr1是康氏木霉中调控纤维素酶基因表达的转录因子。体外实验已证实ACEI和Xyr1可与cbh1启动子上的287bp序列（-304bp~-18bp）结合从而调控cbh1基因转录,但ACEII是否可与此序列结合仍未清楚。为进一步研究ACEII调控纤维素酶基因表达的机制,利用PCR技术扩增康氏木霉ACEII DNA结合区的基因序列,并使其在大肠杆菌中表达。凝胶迁移率移动试验表明ACEII DNA结合区不能与cbh1启动子的287bp序列结合。提示了康氏木霉cbh1基因在诱导表达时起调控作用的主要是Xyr1,而不是ACEII。这对阐明真菌纤维素酶基因表达调控的分子机制具有重要的意义。     

康宁木霉液体深层发酵生产纤维素酶

以康宁木霉（ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉｉ） Ｔ２１５为生产菌,在 ３０ｔ气升式发酵罐中进行了液体深层发酵生产纤维素酶的扩大试验。一、二级罐种子培养基由８％麦麸组成,种龄２４ｈ。产酶培养基由６％稻草粉,１％麦麸和１％蛋白胨组成,起始ｐＨ５．０。每罐装２２ｔ培养基,１０％接种量,通气量０．４ｖｖｍ,罐压０．０８ＭＰａ,２９℃±１℃培养 ９６ｈ。连续试验 ５批,平均发酵液酶活力： ＣＭＣ－Ｎａ活力 ７８．３ＩＵ／ｍＬ,脱脂棉活力 １.３ＩＵ／ｍＬ,水杨苷活力１.４ＩＵ／ｍＬ,滤纸活力     

长梗木霉纤维素酶的产生及提取

对长梗木霉(Trichoderma Longibrachiatum)ANU_3-958纤维素酶的产生及提取进行了研究。结果表明,固体曲培养144小时,固体曲与浸提液比例为1:7(W/V),采用硫酸铵分级沉淀法时所得纤维素酶活力最高。所得冻干纤维素酶粉经测定:羧甲基纤维素(CMC)酶活最高为2788.89IU/g,滤纸糖酶活(FPA)最高为79.44IU/g。相对固体曲得率平均为13.28%。     

康氏木霉纤维素酶系中Cx酶多分子型的分离纯化及某些性质

从康氐木霉(Trichoderma kkoningii) 白色变异株 AS 3．4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组C_x酶(C_xt C_xz C_z3 C_z4)。分离步骤包括Sephadcx G-75凝胶过滤,DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharnse亲合层析,SE—Sephadcx C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。C_xt 与C_xt 的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。C_xz—C_x4 的分子量相同而所带电荷不同。纯化的C_xt—C_z4“经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC—Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上C_xz>C_z3>C_z1>C_x4。     

康氏木霉纤维素酶系中C_x酶多分子型的分离纯化及某些性质

从康氐木霉(Trichoderma k(?)ningii)白色变异株As 3.4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组C_x酶(C_(x1) C_(x2) C_(x3) C_(x4))。分离步骤包括Sephadex G-75凝胶过滤,DEAESephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharose亲合层析,SE-Sephadex C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。C_(x1)与C_(x2)的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。C_(x2)—C_(x4)的分子量相同而所带电荷不同。纯化的C_(x1)—C_(x4)经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上C_(x2)>C_(x3)>C_(x1)>C_(x4)。