蓖麻毒素和凝集素LD50值的简易测定法

本文介绍了一种蓖麻毒素和凝集素LD₅₀测定的新方法。与经典LD₅₀测定法比较,该法简易、经济、快速,结果可靠,特别适用于蓖麻毒素和凝集素这类作用慢、毒性强的毒蛋白的急性毒性试验。     

高效氯氟氰菊酯对西方蜜蜂生存能力及记忆相关特性的影响

【目的】本实验旨在明确3个低浓度高效氯氟氰菊酯对西方蜜蜂Apis mellifera生存能力与学习记忆的影响,为蜂群的健康养殖及深入研究蜜蜂发生蜂群崩溃失调病(colony collapse disorder,CCD)现象机理提供一定的理论参考。【方法】通过点滴法分别给刚羽化蜜蜂背部点滴不同剂量(1/2 LD_(50),1/4 LD_(50)和1/8 LD_(50))的高效氯氟氰菊酯(以点滴纯丙酮为溶剂对照),并进行笼养,记录各组蜜蜂每天死亡情况;药物处理后第7天,利用吻伸反应(proboscis extension response,PER)方法测定不同浓度高效氯氟氰菊酯对西方蜜蜂工蜂学习记忆能力的影响。将刚羽化的蜜蜂用不同剂量高效氯氟氰菊酯处理后放入原始蜂群,20 d后采集氯氟氰菊酯处理后的20日龄工蜂,对其定距离放飞归巢能力进行检测,采用实时定量PCR对记忆相关基因谷氨酸受体基因(GluRA)和N-甲基-D天冬氨酸受体基因(Nmdar1)的相对表达量进行检测。【结果】1/2 LD_(50)组工蜂的平均寿命显著低于1/4 LD_(50)组、1/8 LD_(50)组和对照组(P0.05),而后三者之间差异不显著(P0.05)。1/2LD_(50)组工蜂PER成功率也显著低于1/4 LD_(50)组、1/8 LD_(50)组和对照组(P0.05),后三者之间差异也不显著(P0.05)。1/8 LD_(50)组和对照组蜜蜂在1 000 m处的归巢率显著高于1/2 LD_(50)组和1/4LD_(50)组(P0.05),但1/2 LD_(50)组与1/4 LD_(50)组以及1/8 LD_(50)与对照组之间差异不显著(P0.05)。1/8 LD_(50)组和对照组工蜂的GluRA基因表达量显著高于1/2 LD_(50)组和1/4 LD_(50)组(P0.05),而且1/4 LD_(50)组工蜂的GluRA基因表达量也显著高于1/2 LD_(50)组(P0.05),但1/8 LD_(50)组与对照组工蜂的GluRA基因表达量差异不显著(P0.05);1/4 LD_(50)组、1/8 LD_(50)组和对照组工蜂的Nmdar1基因相对表达量均显著高于1/2 LD_(50)组(P0.05),但前三者之间差异不显著(P0.05)。【结论】高效氯氟氰菊酯对西方蜜蜂的生存能力和记忆行为特性具有一定的影响,这种农药的不合理使用可能影响着蜜蜂的健康养殖。     

氟啶虫胺腈对意大利蜜蜂解毒、免疫和记忆相关基因表达的亚致死效应

【目的】新型杀虫剂氟啶虫胺腈广泛用于农业生产中的害虫防治,但其对蜜蜂健康影响的研究较少。本文探究了亚致死剂量的噻虫啉对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica 6种解毒相关基因(CYP9Q1、CYP9Q2、CYP9Q3、CYP9S1、CYP6AS5和CYP4G11)、4种免疫相关基因(Abaecin、Defensin、Hymenoptaeci和Apidaecin)和3种记忆相关基因(PKA、GluRA和NMDAR1)表达的影响。【方法】采用饲喂法确定氟啶虫胺腈对蜜蜂的经口急性毒性;并用1/3 LD_(50)和1/10 LD_(50)氟啶虫胺腈饲喂蜜蜂后48 h,运用荧光定量PCR技术分别检测了蜜蜂脑部解毒、免疫和记忆相关基因的表达变化,并统计各组蜜蜂的死亡率。【结果】氟啶虫胺腈对蜜蜂经口性半数致死剂量LD_(50)为0.099μg/蜂;饲喂1/3 LD_(50)氟啶虫胺腈能够显著抑制蜜蜂Abaecin和Defensin的表达(P 0.05),而PKA、NMDAR1、GluRA、CYP9Q2和CYP9Q3能够被其诱导上调表达(P 0.05);饲喂1/3 LD_(50)和1/10 LD_(50)氟啶虫胺腈均能显著诱导蜜蜂Hymenoptaecin、Apidaecin、CYP6AS5和CYP4G11上调表达(P 0.05)。但饲喂1/3 LD_(50)和1/10 LD_(50)氟啶虫胺腈的处理均不影响蜜蜂CYP9Q1和CYP9S1表达。【结论】氟啶虫胺腈的曝露可能会对意大利蜜蜂的免疫、记忆和解毒系统都有一定的影响,这对深入探究氟啶虫胺腈与蜜蜂之间互作的分子机制有一定生物学意义。     

凝集素和毒素

总的说来,凝集素并不很毒,但是在凝集素和毒素之间却存在一些关系。ＥＢＡ类毒素可以分为两个主要部分。其中一个部分呈现糖结合活性,负责靶向。另一部分则具有不同的酶活性,决定了其毒性。从天花粉中分离得到凝集素分享了ＤＥＡ类毒素（例如蓖麻毒素）的一些特性。还有一些毒素可以在细胞膜上造成孔,形成离子通道。半夏凝集素似乎可归属于这类毒素。从蛇毒中分离得到了一此凝集素,它们和蛇毒中的其它一些成员在氨基酸序列上有     

健康人皮肤菌群分离株的动物实验研究

我们对已驯化和鉴定的表皮葡萄球菌F_(65)株,疮疤丙酸杆菌A_(14-1)株,干酪乳干菌ad_3株,青春双歧杆菌Bf_1株和婴儿双歧杆菌Bf_2株,进行了动物实验研究,急性皮肤毒性试验和慢性皮肤刺激试验,结果表明:它们对受试动物的皮肤无毒性和无刺激性,使用SPF大鼠重复皮肤刺激试验,结果同样。我们还进行了兔角膜刺激试验和局部封闭涂抹试验,结果表明它们既无刺激性,也无致敏性,这些菌株的鼠尾静脉注射毒性试验结果如下:F_(65)株和A_(14-1)株LD_(50)为6亿,ad_3和Bf_1,Bf_2 LD_(50)都大于6亿。鼠腹腔注射毒性试验结果,F_(65)菌株LD_(50)为24亿,A_(14-1)株LD_(50)为3亿,ad_3,Bf_1,Bf_2株LD_(50)都大于30亿,急性经口毒性试验证明它们都属于口服无毒株,使用SPF小鼠重复急性经口毒性试验,结果相同。实验表明,它们是安全,无毒性,无刺激性,无致敏性菌株。     

苦豆碱对小鼠的急性毒性研究

本文拟探讨苦豆碱对小鼠的急性毒性,并明确其半数致死量(LD_(50))以及毒性靶器官。采用腹腔注射给药方式,给予600.00、480.00、384.00、307.20、245.76 mg/kg的苦豆碱,实验后观察7 d,记录体重变化及自主活动情况,检测苦豆碱对小鼠的急性毒性作用,用加权回归几率法(Bliss)计算LD_(50),并对死亡小鼠进行主要脏器的病理学检查。结果显示,苦豆碱的小鼠LD_(50)为395.62 mg/kg,95%可信限为305.23~535.04 mg/kg,LD_5为143.00 mg/kg,LD95为1094.47 mg/kg。7 d内小鼠体重有增长趋势。病理结果显示,苦豆碱对小鼠的主要毒性靶器官为肝脏。     

蓖麻毒素的分离纯化及其亲和吸附剂的制备

蓖麻毒素(ricin)是从蓖麻(Ricinus commun-is)种子中分离出来的一类植物凝集素。有的蓖麻毒素具有剧烈的毒性而无凝集活性,另外一些则有很高的凝集活性却只显示出较低的毒性。因为蓖麻毒素能够专一地与含有半乳糖末端残基的多糖或糖蛋白等相结合,所以利用蓖麻毒素制成亲和吸附剂     

从美国国会通过的一项法令看生物毒性试验的发展

1988年9月22日美国参议院接受一项提案并在国会通过了一项《消费者产品安全试验法令》(Consumer Products Safe Testing Act,以下简称“法令”)。法令指出在产品试验中脊椎动物进行的急性毒性试验——LD_(50)(半致死剂量)试验是不准确的,使人误解而无益,为此联邦政府采取禁止使用LD_(50)试验。     

西藏凹乳芹根、叶提取物的急性及亚急性毒性研究

对西藏凹乳芹根、叶提取物进行急性毒性及亚急性毒性实验研究,先经预试验确定给药组数和剂量,然后灌胃给药,测试西藏凹乳芹根、叶提取物的半数致死量(LD_(50))及最大耐受量(MTD);再分别以LD_(50)的1/20和1/40剂量连续灌胃给药做亚急性毒性实验。结果显示,西藏凹乳芹根和叶提取物的LD_(50)分别为154.81和58.27 g/kg,MTD分别为108.28和32.62 g/kg。西藏凹乳芹根、叶提取物的亚急性毒性实验各组的血液生化指标、脏器指数、体重及摄食量与对照组相比均没有明显变化。因此,西藏凹乳芹根、叶提取物属无毒级,长期服用未发现毒性反应,有较高的食用安全性。     

四种不同方法注射眼镜蛇蛇毒对小鼠LD_(50)的影响分析

目的比较小鼠经不同途径注射眼镜蛇蛇毒的半数致死量(LD_(50)),并观察中毒症状。方法将小鼠分别经四种途径注射眼镜蛇毒冻干粉溶液,并根据各组小鼠死亡情况,运用Bliss软件测定LD_(50)估计值、置信区间等。观察各组小鼠生物学行为及死亡情况,并对死亡小鼠和存活小鼠进行解剖分析。结果小鼠经静脉、腹腔、肌肉和皮下注射眼镜蛇蛇毒的LD_(50)分别为0.691 mg/kg、0.741 mg/kg、0.803 mg/kg和0.915 mg/kg,95%CI分别为0.634～0.742 mg/kg、0.676～0.792 mg/kg、0.754～0.856 mg/kg和0.851～1.05 mg/kg。各组小鼠中毒症状明显,表现为呼吸困难、精神萎靡、眼球昏暗、眼角有分泌物、身体出现扭体抽搐等反应,均在2～9 h内死亡。结论小鼠经静脉注射眼镜蛇毒溶液中毒的毒性剂量最小,皮下注射眼镜蛇毒溶液中毒的毒性剂量最大。小鼠经四种不同途径注射眼镜蛇蛇毒的LD_(50)的值按从大到小的排序为皮下注射,肌肉注射,腹腔注射,静脉注射。     

几种杀虫剂亚致死中量对褐稻虱生殖力影响的初报

<正> 五十年代,由于大量使用氯代烃类(六六六、DDT、毒杀芬等),有机磷等以后,引起害虫再猖獗(resurgence)。 许多研究者认为引起害虫种群再猖獗的主要原因是农药使用后大量杀伤了害虫的捕食性、寄生性天敌和病原微生物所致。一些作者认为,另一原因可能使用农药后,对害虫生殖力刺激,而引起再猖獗。 Bartlett(1968)在一篇综述中列举59种农药,证实有机氯对螨类生殖力存在刺激作用。 S.Chelliah(1979)1977-79年进行杀虫剂对褐稻虱Nilaparvata lugens Stal再猖獗的一系列试验研究。其中用LD_5、LD_(10)、LD_(25)、LD_(50)剂量的溴氰菊酯,甲基1605,乙滴滴处理褐稻虱,结果与对照比,用溴氰菊酯四种剂量处理     

逆向转运过程中ARFRP1与蓖麻毒素相互作用的研究

利用MTT法检测了ADP糖基化因子相关蛋白1(ADP-ribosylation factor-related protein 1,ARFRP1)在蓖麻毒素逆向转运中的作用。研究发现,转染ARFRP1和ARFRP1(Q97L)后,蓖麻毒素对细胞的毒性增强,而转染ARFRP1(T31N)后,毒性有所降低;用brefeldin A阻断高尔基体上的蛋白运输后,转染ARFRP1和ARFRP1(Q97L)后的细胞依然对蓖麻毒素敏感;低温培养细胞,过量表达ARFRP1的细胞抵抗毒素的能力与其他细胞相比变化明显。结果说明ARFRP1能够促进蓖麻毒素在细胞内的逆向转运。     

蓖麻毒素对肝癌细胞有丝分裂原激活蛋白激酶的影响

为进一步探讨蓖麻毒素的毒作用机理 ,采用 Western印迹和免疫组化方法研究蓖麻毒素对人肝癌细胞内磷酸化状态和有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)的影响 .其结果表明 :蓖麻毒素能够影响细胞内的磷酸化状态 ,并能激活细胞内的有丝分裂原激活蛋白激酶 ,对 MAPK的激活有时间依赖性和剂量依赖性 . MAPK信号传导途径参与了蓖麻毒素对肝癌细胞的毒作用 .     

拟除虫菊酯杀虫剂杀虫效果观察

拟除虫菊酯杀虫剂PY901为新合成的拟除虫菊酯类杀虫剂,室内试验结果:对家蝇的LD_(50)为3.62～4.17×10~(-3)μg/蝇;按5mg/m~3喷雾,对蚊、蝇的KT_(50)为7.8～8.9min;制成浓度为0.25％的蚊香,对成蚊的KT,为3.0min。对美洲大蠊的LD_(50)为6.6～7.9×10~(-2)μg/虫;对德国小蠊为1.1～1.3×10~(-1)_μg/虫。     

土荆芥生物总碱对家蝇的毒杀作用及药剂敏感性的影响

通过室内毒力测定和生化分析方法,测定了土荆芥生物总碱对敌百虫抗性种群,溴氰菊酯抗性种群,敏感种群等3个家蝇(Musca domestica)种群成虫的毒杀效果,土荆芥生物总碱处理前后家蝇种群成虫对溴氰菊酯和敌百虫的药剂敏感性变化,以及对家蝇成虫羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活力的影响。结果表明,土荆芥生物总碱不仅对家蝇有毒杀效果,处理后能提高家蝇对杀虫剂的敏感性,而且能抑制家蝇体内解毒酶系活性。土荆芥生物总碱对不同种群家蝇成虫的LD_(50)没有显著差异;土荆芥生物总碱处理前后,敌百虫对抗性种群和敏感种群的LD_(50)比值分别为1.6277和1.2914,溴氰菊酯对抗性种群和敏感种群的LD_(50)比值分别为2.0768和1.3871;土荆芥生物总碱处理前后,家蝇敌百虫抗性种群、溴氰菊酯抗性种群和敏感种群成虫的羧酸酯酶活性比值分别为1.1692、1.2947和1.2259,谷胱甘肽-S-转移酶活性比值分别为1.2476、1.6519和1.0570。     

荷包地不容生物碱成分研究及3种阿朴菲类生物碱的毒性初步评价

采用硅胶柱色谱分离技术,结合TLC、紫外光谱、NMR、MS等方法对荷包地不容(Stephania.dicentrinifera H.S.LoM.Yang)中生物碱成分进行研究。采用小鼠尾静脉注射法进行同亚属植物中所得三种阿朴菲类(Aporphine,AP)生物碱的急性毒性试验,用Bliss法计算半数致死量(LD50)并比较几种AP类生物碱的毒性与结构的关系。结果分离和鉴定了3个生物碱成分,分别为AP型的荷包牡丹酮(Dicentrinone,Dico)和荷包牡丹碱(Dicentrine,Dic),以及原小檗碱(Protoberberine,PBB)型的四氢巴马汀(Tetrahydropalmatine,Tet)。其中Dico为首次从荷包地不容中分离出来,其LD_(50)=7.266 mg/kg,Dic的LD50=26.802 mg/kg,异可利定(Isocorydine,Isoc)的LD_(50)=32.167 mg/kg。     

植物组培可减少毒性试验中动物的使用量

K·Strube等用光度法测定体外花粉管的生长.根据管壁对Alcian蓝的结合能力,筛选以下七种除草剂的光毒性:DCMU、phenmedipham、DNBP、DNOC、DDTC、CIPC和glyphosate。上述除草剂的毒性作用分为五种不同类型:(1)抑制光合成,(2)抑制叶绿体和线粒体中的ATP合成,(3)影响脂肪酸代谢,(4)与微管互作,(5)干扰莽草酸盐途径。 Strube等报道,上述方法不仅是测定化学物质对植物毒性的快速、有效技术,且其结果与大鼠的LD_(50)值有很好的对应关系。花粉管生长抑制作用和大鼠LD_(50)系统显示与毒性有关的除草剂的相同序列。因此,     

一种纯化蓖麻毒素的新方法

该文介绍了一种新的提取、纯化蓖麻毒素的方法,首次将P-苯胺基-1-巯基-β-D-吡喃半乳糖苷（P—aminobenzyl-1-thoi-β-D-galactopyranoside）琼脂糖凝胶作为亲和层析介质,结合凝胶层析介质Sephcaryl S-200,通过两步层析纯化,获得了高纯度的蓖麻毒素。MALDI—TOF测得分子量为62925,LD50为12．4μg／kg。该方法可以制备高纯度蓖麻毒素。     

蓖麻毒素与其单克隆抗体相互作用动力学研究

表面等离子体激元共振(SPR)是一种可微量、实时、动态地监测生物分子相互作用的生物传感技术。蓖麻毒素为核糖体失活蛋白,具有很强的细胞毒性作用。通过SPR技术研究了两种抗蓖麻毒素的单克隆抗体C5、D12与蓖麻毒素相互作用的动力学,计算出两者的亲和常数分别为2.49×108mol-1·L和7.9×108mol-1·L,并对两种抗体的抗原表位进行了分析。     

骆驼蓬种子凝集素粗品活性的初步研究

采用硫酸铵分级沉淀法提取骆驼蓬种子凝集素粗品,并进行凝血活性和抗菌活性检测.凝血实验结果表明:(1)50%～60%硫酸铵饱和度下提取骆驼蓬种子的凝集素粗品对鸡红细胞的凝集活力最强,最低凝集浓度为0.6 mg/L,且其凝集素粗品的活力受温度、pH值、金属离子及糖溶液的影响.(2)不同硫酸铵饱和度沉淀获得的凝集素粗品对6种人体致病细菌及5种能引起水果腐烂和粮食霉变的真菌均有不同程度的抑制作用,其中50%～60%硫酸铵饱和度下提取的凝集素粗品抑菌活性最强,其浓度为1.071 mg/mL时对鲍曼不动杆菌和意大利青霉菌的抑菌环半径分别可达8.1 mm和4.9 mm.