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对磷酸化蛋白质组(phosphoproteome)进行系统深入的研究依赖于高重复性和特异性的磷酸化肽段富集与分离方法。目前发展了多种不同原理的磷酸化肽段富集方法,它们往往具有不同的选择性和特异性,因此,根据不同的研究目的选择最适合的富集方法显得尤为重要。本文综述了基于亲和色谱法(affinity chromatography)、免疫沉淀法(immunoprecipitation)、化学衍生法(chemical derivatization)、色谱法(chromatography)和其他新发展方法的磷酸化肽段富集方法,详细介绍了各自的优缺点及相关的优化与改进策略。此外,还简单介绍了磷酸化肽段富集与预分方法的不同组合的研究进展。 相似文献
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蛋白质磷酸化修饰的研究进展 总被引:9,自引:0,他引:9
蛋白质磷酸化是最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式,它参与和调控生物体内的许多生命活动。通过蛋白质的磷酸化与去磷酸化,调控信号转导、基因表达、细胞周期等诸多细胞过程。随着蛋白质组学技术的发展和应用,蛋白质磷酸化的研究越来越受到广泛的重视。我们介绍了蛋白质磷酸化修饰的主要类型与功能、磷酸化蛋白质分析样品的富集及制备、磷酸化蛋白的鉴定及磷酸化位点的预测、蛋白分离后磷酸化蛋白的检测,及蛋白质磷酸化的分子机制,并综述了近年来国内外的主要相关研究进展。 相似文献
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蛋白质磷酸化是生物体内一种广泛存在的蛋白质翻译后修饰形式,这种氨基酸与磷酸基团共价连接的修饰模式对蛋白质结构和功能起到了重要调节作用.目前天然蛋白质中发现的可磷酸化位点主要有9种氨基酸残基,其中包括以磷酰胺连接的磷酸化组氨酸.虽然该磷酸化形式在原核生物与真核生物中都起到了重要的调节作用,但对于其生物学功能的研究长期存在技术困难.由于磷酸化组氨酸本身不同于其他磷酸化氨基酸的化学性质,如存在异构体、化学不稳定等,其在传统的研究方法中容易发生水解去磷酸化.随着现代生物化学与分子生物学技术的不断进步,人们针对含有磷酸化组氨酸的蛋白质构建了新的制备、分离与表征策略,本领域也因此开始迅速发展.本文从磷酸化组氨酸的化学结构入手,分析其两种异构体的主要理化性质与化学反应特性,并概述了基于此发展的新型化学生物学研究手段以及对于磷酸化组氨酸生物功能的研究进展. 相似文献
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以小鼠断头脑缺血为模型,研究缺血小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的改变,对缺血1min,5min,15min和30min及对照小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的研究表明,有些磷蛋白如145kD,84kD,59kD和50kD 的磷酸化随缺血时间延长而减弱,还有些磷蛋白和如119kD,105kD,78kD,55kD的磷酸化随缺血时间延长而增加,对磷酸化程度变化显著的缺血15min小鼠脑内胞浆及膜上PKA、PKC、 相似文献
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以小鼠断头脑缺血为模型,研究缺血小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的改变。对缺血1min、5min、15min和30min及对照小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的研究表明,有些磷蛋白如145kD、84kD、59kD和50kD的磷酸化随缺血时间延长而减弱,还有些磷蛋白如119kD、105kD、78kD和55kD的磷酸化随缺血时间延长而增加。对磷酸化程度变化显著的缺血15min小鼠脑内胞浆及膜上PKA、PKC、Ca~(2+)/CaMPK底物的磷酸化进行了研究,发现胞浆组分中与钙相关的PKC、Ca~(2+)/CaMPK底物磷酸化在缺血鼠脑中明显减弱。同时研究了脑内唯一依赖于Ca~(2+)/CaM的钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)底物的变化,发现缺血小鼠脑内CaN的某些底物磷酸化降低。 相似文献
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肌球蛋白是肌原纤维粗丝的组成单位,由多条重链与多条轻链组成,被视为一种分子马达。在肌肉收缩、趋化性胞质分裂、胞引作用、膜泡运输以及信号传导等生理过程中起重要作用。目前肌球蛋白磷酸化是研究的一个热点,它对细胞的迁移、收缩、胞质分裂以及其他未知功能都有着至关重要的作用。肌球蛋白磷酸化分为重链的磷酸化与轻链的磷酸化。根据国内外的最新相关研究报道,分别从肌球蛋白的结构与功能、磷酸化的作用机制、磷酸化的生物学功能以及最新研究成果等方面,对肌球蛋白的磷酸化研究进展进行阐述。 相似文献
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植物生理学教材中光合作用一章的光合磷酸化机理部分,是本章的重点和难点,每当讲到这个内容时,我们都感到很难把这个问题向学生讲请楚,因为现有的几套植物生理学教材在这方面的论述显得不够具体,而师范院校的植物生理学教材在这方面则编写得过份简单,学生总是反映教材中这部分内容不够详细,对光合磷酸化的机理不太明白。为了解决这一问题,我参考了现有的几套植物生理学教材,把有关光合磷酸化机理方面的内容作了比较、分析和归 相似文献
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摘要:蛋白质磷酸化是一种可逆的翻译后修饰,这种翻译后修饰可以改变蛋白质的构象,进而使蛋白质活化或者失活。组氨酸磷酸化在细胞信号传导过程中发挥着重要作用,且组氨酸磷酸化与人类某些疾病密切相关,然而,由于组氨酸磷酸化含有P-N键,具备不稳定性,有关于组氨酸磷酸化的报道远远少于其它磷酸化的报道。本综述系统的总结了组氨酸磷酸化在生物学过程中的作用,以及近些年取得的重要研究进展,以期对深入研究组氨酸磷酸化提供理论参考。 相似文献
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神经递质合成酶、胞吐相关蛋白、神经递质受体,以及离子通道等蛋白的磷酸化和去磷酸化对神经系统的功能具有重要作用。神经递质的释放往往伴随众多蛋白的磷酸化或去磷酸化过程,包括突触蛋白磷酸化引起突触囊泡从细胞骨架上解离、突触囊泡通过复合体SNARE和Ca2 的介导与突触前膜发生锚靠、融合和神经递质释放,以及以网格蛋白依赖的形式实现突触囊泡从突触前膜上内陷、出芽和缢缩后,从膜上裂解到胞浆中重新形成突触囊泡。因此,蛋白磷酸化和去磷酸化对于神经系统完成神经信号传递具有重要的意义。 相似文献
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败血症休克大鼠肝细胞质膜钙ATP酶磷酸化、去磷酸化的改变 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验观察了早期、晚期败血症休克大鼠肝细胞质膜钙ATP酶磷酸化、去磷酸化的改变。败血症休克模型由结扎大鼠盲肠并穿孔(CLP)的方法复制,采用蔗糖密度梯度离心法分离肝细胞质膜,由聚丙烯酰胺凝胶电泳(SOS-PAGE)鉴定肝细胞质膜钙ATP酶磷酸化中间产物。结果发现,肝细胞膜钙ATP酶磷酸化能力在败血症休克早期降低32.3%,晚期降低46.6%(P<0.01)。动力学分析发现,早期、晚期败血症休克时,钙离子使钙ATP酶磷酸化的最大反应速度都明显降低,而Km值无明显变化。SDS-PAGE分析证实,肝细胞质膜钙ATP酶磷酸化的中间产物是一个分子量为107ku的蛋白质。结论认为:败血症休克时,肝细胞质膜钙ATP酶磷酸化能力明显减低,去磷酸化能力无明显变化,可能是败血症休克时肝纳胞钙稳态失衡,进而引起机体代谢改变的重要原因之一。 相似文献
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真核细胞由间期进入有丝分裂期时,伴随着一系列的事件发生,这些事件不少是由许多特定蛋白质的磷酸化引起的。这些蛋白质被磷酸化后,其构型和生理功能发生改变。细胞内有多种蛋白激酶参与这些磷酸化过程,而其中P 34~(cdc2)激酶起着核心作用。 相似文献