豆球蛋白β亚基的分离提纯及其完整一级结构

豆球蛋白(Legumin)是豌豆、蚕豆、大豆等豆科植物种子中一类主要贮藏蛋白质。豆球蛋白是由6对亚基组成的六聚体,每对亚基是由分子量40000的酸性亚基(α亚基)和分子量20000的碱性亚基(β亚基)通过双硫键相结合。α亚基和β亚基又是由分子量60000的豆球蛋白原前体多肽(Prolegumin precursorpolypeptide)通过翻译后蛋白质水解作用(Post-translational proteolysis)而生成。一些研究者还发现,水稻、燕麦等禾本科植物种     

豌豆核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶亚基结合蛋白的纯化及特性

用~(35)S-Met在照光下与豌豆完整叶绿体保温,显示新合成的标记的RubisCO大亚基与结合蛋白形成一复合物,经ATP处理后解离为结合蛋白亚基,同时释放出的标记的RubisCO大亚基参与了RubisCO的装配。豌豆叶片提取液经热处理,硫酸铵分部,DEAE-Sepharose fast flow和Sephacryl S-300柱层析在ND-PAGE,SDS-PAGE上显示为一条带,估计纯度达90％以上,得率比以前报道的高12倍。纯化的结合蛋白表面巯基数经测定为12±1个,总巯基数为36±1个。远紫外CD光谱具有典型的α-螺旋结构的光谱特性,α-螺旋度为39％。此外,以纯化的豌豆结合蛋白制备了多克隆抗体。琼脂糖双扩散实验显示,结合蛋白的抗体与结合蛋白产生一条沉淀线,而与豌豆的RubisCO无沉淀反应,这表明所得到的抗体是高度专一的。     

碱性7S球蛋白和豆类胰岛素研究进展

碱性7S球蛋白和豆类胰岛素在豆科植物中广泛存在,对生长发育起着胰岛素信号通路样调控作用。碱性7S球蛋白是一个富含半胱氨酸的糖蛋白,具有酪氨酸激酶活性,结构上与胰岛素受体有相似点,能和胰岛素及胰岛素生长因子Ⅰ和Ⅱ结合。豆类胰岛素含37个氨基酸,3对二硫桥键,结构上属于抑制型胱氨酸结构模体,某些疏水残基在拓扑结构上和胰岛素存在相似之处,能调节植物生长。豌豆胰岛素在象鼻虫(Sitophilusoryzae)、豌豆蚜虫(Acyrthospiphonpisum)和果蝇(Drosophilaalbomicans)中发现单一的膜结合位点,可用作昆虫毒素。文章总结了碱性7S球蛋白和豆类胰岛素在结构和功能上的研究进展。     

热带假丝酵母(Candida tropicalis)79微体蛋白质组分的分析研究

纯化的微体,经过渗透休克、反复洗涤,被分成微体膜和可溶性组分两部分。它们的蛋白质含量分别占微体蛋白质总量的70%和30%左右。酶学分析表明,过氧化氢酶和尿酸氧化酶主要分布在微体可溶性部分,NADH-细胞色素c还原酶(抗霉素不敏感型)可能是与微体膜相连结的蛋白质。用淀粉凝胶分离、普鲁士蓝染色的方法,在微体可溶性部分检出两种不同类型的过氧化氢酶。经SDS-PAGE分析,微体膜显示出25条蛋白亚基带,可溶性部分显示出21条蛋白亚基带。微体蛋白亚基分子量范围在14K～140K之间。其中,33K蛋白亚基是微体膜的主要结构蛋白;24K、26K和33K蛋白亚基为糖蛋白;63K和36K蛋白亚基分别是过氧化氢酶和尿酸氧化酶。在双相凝胶电泳图谱上,微体膜出现110个斑点,可溶性部分出现59个斑点。过氧化氢酶和尿酸氧化酶在双相凝胶电泳图谱中的位置都已确定。采用交叉免疫电泳的方法,研究了微体蛋白质在酵母生长过程中的变化。结果表明:热带假丝酵母79培养18小时,微体发育成熟;36小时后,微体开始降解。     

叶绿体陪伴蛋白在几种藻类中的存在和分布

用豌豆叶绿体陪伴蛋白（ｃｈ－ｃｐｎ６０）的杭体对衣藻和多种蓝藻细胞提取液作Ｗｅｓｔ－ｅｒｎｂｌｏｔ分析表明：真核的衣藻和原核的有异形胞丝状蓝藻的一种鱼腥藻中存在一种与豌豆ｃｈ－ｃｐｎ６０抗体有交叉反应的蛋白,其一个亚基的分子量与豌豆该蛋白的分子量相似,而另一亚基的分子量高于豌豆的β亚基分子量。绿藻和丝状蓝藻中这一蛋白在热处理后含量增加,而经－２０℃冷处理１２ｈ后含量明显下降。在单细胞蓝藻中则检测不到这种蛋白。     

B-藻红蛋白和R-藻红蛋白γ亚基的分离、特性及其在分子中的空间位置分析

紫球藻 (Porphyridiumcruentum)B 藻红蛋白和多管藻 (Polysiphoniaurceo lata)R -藻红蛋白经蛋白酶K部分酶切消化后 ,分离得到近似天然态的γ亚基 ,并且对它的光谱特性以及在藻红蛋白分子中的空间位置进行了研究 .酶解动力学分析表明γ亚基位于R- 藻红蛋白和B -藻红蛋白六聚体 (αβ) ₆的中央空洞中 .分离的γ亚基上藻红胆素的吸收峰位于 5 89nm ,荧光发射峰位于 6 2 0nm ,与藻蓝蛋白的吸收峰重叠 ,有助于藻胆体中藻红蛋白与藻蓝蛋白分子间高效能量传递 .     

CRP变构及其促炎机制研究进展

天然C-反应蛋白是固有免疫系统中一个进化保守的蛋白,由5个相同亚基通过非共价键形成五聚体结构.C-反应蛋白不仅作为监测炎症的分子标志物,也是炎症发展的直接参与者.C-反应蛋白主要存在两种不同的构型,即五聚体和单体.在炎症微环境,五聚体能够解离形成单体,从而贡献局部炎症反应.为此,本文对C-反应蛋白如何变构以及促炎反应机制的研究进展展开综述.     

CS3纤毛抗原表达调控机理的研究

定居因子抗原(CFA)是肠毒素大肠杆菌(ETEC)的重要毒性因子和保护性抗原,大多以菌毛的形式存在。此类抗原的表达及菌毛的装配需要2类基因的共同作用,即亚基结构基因和辅助蛋白结构基因。亚基是纤毛抗原的基本组成单位,而辅助蛋白则参与亚基蛋白分子的输送及装配过程。CS3亚基结构基因位于辅助蛋白结构基因的下游,处于CS3操纵子的3′端。CS3亚基结构基因的核苷酸序列分析揭示,在其翻译起始位点的上游存在着rbs位点及原核     

BK通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布*

摘要目的：研究大电导、钙离子和电压激活的钾离子通道（BK通道）在HEK293 细胞膜上的单分子定位及其总体空间分布情况。 方法：分别用mEos2、Dronpa 等荧光蛋白标记BK通道的α亚基和辅助性β2 亚基,将这些质粒在HEK293 细胞内瞬时转染以表 达通道蛋白,然后用激光共聚焦荧光显微成像、全内反射荧光显微成像、光敏定位荧光成像等技术观察BK通道的亚细胞定位及 单分子分布,并用电生理实验技术检测荧光蛋白对BK通道有影响。结果：激光共聚焦荧光显微成像和全内反射荧光显微成像技 术只能在亚细胞水平定位通道蛋白,BK 通道在细胞膜上聚集并形成不规则的蛋白簇,它的α亚基和β2 亚基在细胞膜上完全共 定位;光敏定位荧光成像技术成功定位BK通道蛋白簇里面的单分子,虽然α和β2 亚基紧紧靠在一起,它们之间依然存在空间 距离;BK通道的质膜表达和功能特性不受荧光蛋白的影响。结论：BK通道蛋白簇里面包含大量的α和β2 亚基的蛋白单分子, 它们紧密地聚集在一起,但是并没有完全共定位,在分子水平上揭示了BK通道α和β亚基功能耦合的结构基础,为以后研究大 分子蛋白质间的相互作用机制提供了很好的分子模型,光敏定位荧光成像技术作为一种全新的单分子荧光成像手段,在基因表 达、信号通路、蛋白质相互作用等许多重要生命活动的研究中发挥重要作用。     

影响豌豆Rubisco组装的因子及其作用机制

将新鲜制备的不含Rubisco的豌豆叶片低分子量（LMW）蛋白组分在离体条件下室温保温48h后,经ND－PAGE分析发现,ATP和Mg^2 是组装的必需条件。随着Mg^2 浓度的增加,组装成的Rubisco量逐渐增加,直至其浓度到2．5mmol/L后达到平衡。K^ 对组装有抑制作用,抑制程度随着K^ 浓度增加逐渐增强,当K^ 浓度为5mmol/L时组装被抑制56％,当K^ 浓度达到40mmol/L时,组装被抑制高达90％以上;但同样浓度的Na^ 则没有抑制作用。另外,以羟自由基对豌豆LMW蛋白组分中的大亚基进行降解处理,对大亚基专一性降解肽谱与对全酶中和相同,也能产生37kD的降解肽段,而且,预先经ATP和Mg^2 处理的样品,LMW组分中37kD的大亚基降解条带会消失,而在20－30kD位置附近产生新的降解条带;而K^ 预处理同样能够产生20－30kD大亚基的降解条带,但其37kD的大亚基降解条带没有消失,这说明K^ 对组装的抑制作用可能是通过与组装中间体结构后产生不利于组装的构象变化实现的。     

BK通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布

目的：研究大电导、钙离子和电压激活的钾离子通道（BK通道）在HEK293细胞膜上的单分子定位及其总体空间分布情况。方法：分别用mEos2、Dronpa等荧光蛋白标记BK通道的α亚基和辅助性β2亚基,将这些质粒在HEK293细胞内瞬时转染以表达通道蛋白,然后用激光共聚焦荧光显微成像、全内反射荧光显微成像、光敏定位荧光成像等技术观察BK通道的亚细胞定位及单分子分布,并用电生理实验技术检测荧光蛋白对BK通道有影响。结果：激光共聚焦荧光显微成像和全内反射荧光显微成像技术只能在亚细胞水平定位通道蛋白,BK通道在细胞膜上聚集并形成不规则的蛋白簇,它的仅亚基和β2亚基在细胞膜上完全共定位;光敏定位荧光成像技术成功定位BK通道蛋白簇里面的单分子,虽然α和β2亚基紧紧靠在一起,它们之间依然存在空间距离;BK通道的质膜表达和功能特性不受荧光蛋白的影响。结论：BK通道蛋白簇里面包含大量的α和β2亚基的蛋白单分子,它们紧密地聚集在一起,但是并没有完全共定位,在分子水平上揭示了BK通道α和p亚基功能耦合的结构基础,为以后研究大分子蛋白质间的相互作用机制提供了很好的分子模型,光敏定位荧光成像技术作为一种全新的单分子荧光成像手段,在基因表达、信号通路、蛋白质相互作用等许多重要生命活动的研究中发挥重要作用。     

大肠杆菌中青霉素G酰化酶成熟的限制性因素

为了研究大肠杆菌中青霉素G酰化酶 (PenicillinGacylase ,PAC)成熟的限制性步骤 ,分别构建了PAC表达质粒pKKpacSP ,pETpacSP ,并将它们在大肠杆菌宿主中表达。通过酶活性的测定及Westernblotting分析 ,分别在PAC自身表达系统 ,Tac ,T7及氧调控表达系统中 ,研究PAC前体蛋白加工成α亚基、β亚基的效率及亚基折叠组装形成活性酶的能力。结果表明 :PAC成熟过程中的限制性步骤因宿主 载体系统而异 ;PAC本身表达系统中 ,前体肽加工成α亚基、β亚基的效率为 57.2 % ,亚基组装能力为 0.72;Tac启动子表达调控系统中α亚基的折叠和稳定成为限制性步骤 ;T7及氧调控表达系统中 ,PAC前体肽加工成α亚基、β亚基的效率达 90 %左右 ,亚基组装成活性酶的能力分别为 1 82 ,2 ;低氧调控系统表达PAC时 ,成熟的效率最高 ,PAC表达的单位重量活性提高 10倍.     

野生大豆(Glycine soja Sieb et ZUCC)球蛋白A_5 A_4 B_3 cDNA的研究(简报)

大豆球蛋白是大豆种子中主要的贮藏蛋白。它们在某些作物中占种子干重20%以上。已经知道大豆球蛋白由6个亚基组成。每个亚基由一或两个酸性多肽(A)和一个碱性多肽(B)组成,多肽之间由二硫键联结。这些亚基是从编码A-B亚基前体的mRNA合成,然后经过转录后加工剪切形成A肽和B肽。至今所有关于球蛋白的基因结构与表达的报道都集中于栽培大豆上。由于我国有丰富的大豆     

三种鼠科动物血浆超氧化物歧化酶和乳酸脱氢酶以及血浆蛋白成分的比较分析

本文利用SOD和LDH在一块凝胶板上同时显色的优点,电泳分析黑线姬鼠(Apodemus agrarius)、褐家鼠(Rattus norvegicus),黄胸鼠(Rattus flavipectus)血浆SOD和LDH同工酶以及血浆蛋白成分。结果表明,LDH为有色区带,SOD为无色透明区带,而且SOD比LDH泳动快,两类区带互不重迭,以致3种鼠血浆中SOD和LDH的图谱清晰可辨。由于黑线姬鼠的SOD和LDH的泳动度不同于其余2种鼠,周此3种鼠的图谱各具特征。3种鼠血浆蛋白中的前清蛋白和铁传递蛋白区带数和泳动度亦具有明显差异,说明上述酶分子亚基和血浆蛋白分子的化学结构不同,成为种间差异在分子水平上典型的表现。     

硫矿硫化叶菌P2分子伴侣基因的克隆表达及其性质

[目的]研究重组表达的硫矿硫化叶菌P2分子伴侣β亚基体外同源聚合体的结构和生化功能.[方法]利用PCR技术从硫矿硫化叶菌P2的基因组DNA中克隆得到分子伴侣β亚基的基因,将该基因克隆到表达载体pET-21a( )上并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了表达.对纯化后的β亚基单体进行体外聚合,利用透射电镜观察β分子伴侣的结构,并对其促蛋白折叠性质进行了研究.[结果]硫矿硫化叶菌P2分子伴侣β亚基基因在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,纯化后的分子伴侣β亚基单体在ATP和Mg2 存在的条件下可自组装形成分子伴侣聚合体.透射电镜观察表明:该β分子伴侣具有Ⅱ型分子伴侣典型的双层面包圈结构,每个环由8个亚基构成.该β分子伴侣具有ATPase活性,最适反应温度为80℃;它不仅能够促进变性的绿色荧光蛋白(GFP)重新折叠,而且还能有效的提高木聚糖酶的热稳定性.[结论]本文根据P2基因组序列分析预测的分子伴侣基因设计引物,克隆表达了硫矿硫化叶菌P2分子伴侣的β亚基,纯化后对其进行体外聚合,透射电镜观察表明该聚合体具有Ⅱ型分子伴侣的经典结构,功能分析表明该β分子伴侣能够在体外促进异源蛋白质的折叠、提高其它酶分子的热稳定性.这为进一步深入研究嗜热古菌耐热抗逆的分子机制,奠定了良好的基础.     

病毒蛋白的解离和聚合作用 Ⅰ.烟草花叶病毒(TMV)的解离及其蛋白亚基的构型变化

近年来,通过对简单病毒细微结构的研究,已经揭示了病毒的一般结构原则,即许多蛋白亚基聚合成棒或廿面体,并将活性核酸包围在中心,蛋白外壳与核酸相互作用而各自得到更高的稳定性。在此我们第一次看到蛋白质分子的聚合反应在形成最原始的生命中所起的重要作用。     

精子头后部质膜融合蛋白fertilin的研究进展

精子头后部(或赤道区)表面fertilin糖蛋白由相关的两个跨膜亚基α和β构成异二体形式。这两个亚基前体均含有金属蛋白酶区(met-alloprotease domain)和整联蛋白配体区(disin-tegrin domain),属于ADAMs gene家族。α和β前体分别在睾丸和附睾中从上述两区域连接处水解后,得到成熟型亚基。受精时,穿过透明带的顶体反应后精子借助β亚基的disintegrin肽段与卵母细胞表面的整联蛋白结合,同时fertilin结构发生变化,暴露出α亚基上潜在的融合肽段(90—111aa),并介导精子与卵母细胞发生质膜融合,最终完成受精过程。     

豌豆球蛋白及其亚基的分离提纯

本文详细地叙述了提取、分离、提纯豌豆球蛋白及其亚基的方法:用硼酸钠缓冲液提取豌豆球蛋白,用85%饱和度硫酸铵沉淀除去其它蛋白质杂质,再用凝胶柱进一步提纯;提纯的豌豆球蛋白通过DE_(52)-纤维素阴离子树脂柱(8M尿素作为变性分离试剂)和S_(200)凝胶柱(70%甲酸作为变性分离试剂)则可分离出豌豆球蛋白的各个亚基;试验结果还表明:在pH8.5时,33,000的亚基携带少量负电荷;而12,000的亚基携带大量负电荷。     

油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由ＳＤＳ及梯度胶电泳测得测得油桐尺蠖核型多型多角体病毒多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为３６３ｋＤ与３１．５ｋＤ从而推断此蛋白为十二聚体,亚基间无二硫键作用,ＢｓＮＰＶ多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示,它的二级结构含有３１．７％的α螺旋,２３．８％的β折叠及４４．５％的无规卷曲,与二级结构预测结果相符,通过荧光光谱实验推知,ＢｓＮＰＶ多角体蛋白的表面疏水性弱;其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部。     

变构现象中的类似相变重整化群研究

一、引言所谓变构现象,是指寡聚蛋白(例如变构酶)这样的大分子与配位体(例如底物)这样的小分子结合中表现的协同现象,是分子生物物理中研究得很活跃的课题。如果令θ_s表示酶蛋白分子的亚基结合底物分子的百分数,θ_c表示酶蛋白分子亚基的某种构象呈现的百分数,则在热平衡条件下,实验观测到在不同配位体浓度s下,θ_s或θ_c与s的关系皆呈s-型曲线,如图1。S-型曲线表现了系统的宏观景像在某个配