阿维链霉菌来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及其在毕氏酵母中的异源表达

本文旨在构建阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因(pss)的重组质粒,研究其在毕氏酵母中的异源分泌型表达。利用PCR技术克隆阿维链霉菌来源的pss基因,再通过电转化方法将重组质粒pOG-01转入毕氏酵母KM71中,构建重组工程菌KP1。实验结果表明,阿维链霉菌来源的磷酯酰丝氨酸合成酶基因在毕氏酵母KM71中成功表达,2 mL菌体上清催化50 mmol/L卵磷脂,转酯反应的转化率为58%,酶活为4.83 U/mL。     

农用抗菌素1222的研究

农用抗菌素1222是从我国土壤中分离得到一株链霉菌NO.1222所产生的抗菌素,对多种植物病原真菌、酵母及真菌有抑制作用,但对细菌无作用。链霉菌NO.1222经分类鉴定证明为烬灰链霉菌类群。农抗1222经理化性质的研究表明是属于四烯类抗菌素。我们把它用于浸种试验,表明对棉花枯萎病菌的灭菌有较好的效果。本文报告链霉菌NO.1222的菌种鉴定,抗菌素的理化性质及防治病害的研究结果。     

圈卷产色链霉菌分化及其特性的研究

链霉菌分化的分子生物学研究是一个饶有兴趣并富有挑战性的世界前沿研究课题.在原核生物的分化研究中,主要以枯草杆菌(Bacillus subtilis)作为模式系统,但枯草杆菌的生命周期尤其是分化过程远比链霉菌简单,不象链霉菌有基质菌丝、气生菌丝、菌丝螺旋和孢子分隔那样的发育分化过程[1].在真核生物中也有分化研究的报道,如构巢曲霉、酵母等.由于真核生物的基因结构比原核生物复杂得多,弄清分化中基因调控的关系就更加困难.因此,选用链霉菌作分化研究的材料有其独一无二的优越性.国际上有关链霉菌的分子生物学研究,近年来主要以链霉菌的抗生素生物合成基因和链霉菌的分化基因两个大的方面作为研究的热点和主攻方向,并展开了一些开拓性的研究.     

产抗生素链霉菌的原生质体融合重组

已知抗生素的65%以上是放线菌产生的,其中80%以上是由链霉菌中筛选得到的。近年来发展起来的细菌、链霉菌、酵母和真菌的原生质体融合技术,它不仅有助于工业上重要菌株的改良,而且也有助于更好地了解抗生紊合成的次生代谢途径,并得以阐明     

抗生素

<正>产生红霉素的红链霉菌3038菌株分离出质粒pPC7和pPC8已有报道,并给出了限制性内切酶的图谱。该菌株在含有甘氨酸的TSB培养基中,在振荡下于30℃培养18-24小时。在相同的培养基中培养40小时就形成原生质体。按以前的方法进行蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)和红链霉菌属的转化。把原生质体加进含有酵母提取物的R_2培     

一种新的抗真菌抗菌素——金褐霉素

金褐霉素是从我国土壤中分离得到的链霉菌R-22所产生的一种抗真菌物质,对多种酵母型及菌丝型真菌有作用,但对细菌无作用。链霉菌R一22经分类鉴定证明为一株新的链霉菌,命名为金褐链霉菌(Streptomyces aureofuscui n. sp.)。金褐霉素经理化性质的研究证明是一个新的四烯类抗菌素。它的急性毒性：对小白鼠LD,。腹腔注射为2{．68土2．36毫克／公斤,静脉注射为28．27±2．49毫克／公斤。金褐霉素目前在临床上用于冶疗真菌性角膜溃疡,有明显的疗效,     

庆丰霉素的研究I．产生菌的分类鉴定

本文研究了庆丰霉素产生菌的生物学特性及其所产生抗菌素的制菌谱,并和资料报道的相近似的已知种作了比较,认为这是一个属于链霉菌金色类群的新种,定名为庆丰链霉菌 (Streptomyces qingfengmyceticus n. sp. SAALMSIPP.)。     

黄色直丝链霉菌新种

34-773链霉菌对产朊圆酵母(Torulopsis utilis)细胞及稻瘟菌(Piricularia oryzae)菌丝有溶菌作用,对形态、培养特征、生理生化特性等方面的研究指出,34—773链霉菌的孢子丝直形,孢子长杆状,表面光滑;气生菌丝体先蚌肉白,后豆汁黄;基内菌丝体淡鹅掌黄、淡雅梨黄;无可溶性色素。经鉴定和国内、外文献中报道的近似种比较定为新种——黄色直丝链霉菌(Streptomyces flavorectus n. sp．)。     

大线性质粒pHZ1000,pHZ1001在链霉菌种间的接合转移

从1979年首先在娄彻氏链霉菌(Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒｏｃｈｅｉ)中发现第一例原核生物线性质粒ｐＳＬＡ2[1]至今,人们已在多种链霉菌中发现了线性质粒,大小12ｋｂ到640ｋｂ不等[2]。从红球菌[3]和诺卡氏菌中[4],在硫杆菌属和螺旋体属中,以及酵母、丝状真菌等真核生物中也都陆续发现了线性质粒的存在[5],大肠杆菌噬菌体Ｎ15的原噬菌体也是一种特殊的线性质粒[6]。线性质粒存在的生物学意义引起了人们的浓厚兴趣。然而20多年以来,链霉菌线性质粒,尤其是大线性质粒的研究始终进展不快。目前有关链霉菌线性质粒复制机理、端粒结构的阐明,都…     

负调节基因nsdA在链霉菌中同源性及激活沉默抗生素合成基因簇的研究

nsdA基因是在天蓝色链霉菌中发现的抗生素合成负调控基因。以nsdA基因片段为探针,通过Southern杂交发现nsdA存在于多种链霉菌中。根据天蓝色链霉菌和阿维链霉菌的nsdA序列设计PCR引物,扩增多种链霉菌中nsdA基因并测序。发现在不同链霉菌中nsdA基因的相似性高达77%~100%。其中变铅青链霉菌与天蓝色链霉菌A3(2)的nsdA序列100%一致。变铅青链霉菌通常不合成放线紫红素,中断nsdA获得的突变菌株WQ2能够合成放线紫红素;在WQ2中重新引入野生型nsdA,又失去产抗生素能力。表明nsdA的中断可以激活变铅青链霉菌中沉默的放线紫红素生物合成基因簇的表达;nsdA的广泛存在及其序列高度保守则提示可以尝试用于这些菌种的抗生素高产育种。     

生物表面活性剂产生菌的筛选

从１０００份土壤和水等样品中,经富集培养、血平板分离、摇瓶培养和排油活性测定等方法筛选出１０株能产生各种生物表面活性剂的菌株（包括细菌,酵母和霉菌）。其中一株细菌产海藻糖脂,一株细菌产鼠李糖脂,两株细菌分别产长碳链不饱和脂肪酸和壬二酸,两株酵母产生的脂多糖具有良好的乳化性能     

黑暗链霉菌DNA转移系统的建立

研究了黑暗链霉菌的基因转移系统,探索了通过PEG介导的原生质体转化、接合转移向黑暗链霉菌中转入外源DNA的可能性。多次尝试用质粒pIJ702转化黑暗链霉菌9904原生质体均未成功。对原生质体进行“热处理”后转化、利用单链DNA转化等都不能将质粒导入黑暗链霉菌中,表明黑暗链霉菌对外源DNA有很强的限制修饰作用。利用接合转移将具有oriT的大肠杆菌链霉菌穿梭质粒pHZ132转入大肠杆菌ET12567(pUZ8002)中,获得供体菌ET12567(pUZ8002,pHZ132)。将供体菌与预萌发的黑暗链霉菌9904的孢子进行接合转移,成功地将pHZ132转入黑暗链霉菌9904中。质粒pHZ132经黑暗链霉菌自身修饰后也可转入黑暗链霉菌9904菌株的原生质体中,转化率约为103/μg DNA(pHZ132)。     

来源于橄榄绿链霉菌A1的高比活木聚糖酶XYNB的高效表达及性质的比较分析

高效表达高比活木聚糖酶是进一步提高木聚糖酶发酵效价、降低其生产成本的有效途径。将橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis) A1的高比活木聚糖酶成熟蛋白编码基因xynB克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母得到重组酵母,在重组酵母中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达,且表达产物具有生物学活性。在3L发酵罐中蛋白表达量约14mg/mL, 酶活性(效价)为1200IU/mL。SDSPAGE分析表明,表达的木聚糖酶XYNBa为糖基化蛋白, 分子量为31kD, 经脱糖基化处理得到21kD 的XYNBb, 与橄榄绿链霉菌A1所产原酶XYNB大小一致。通过对XYNB、XYNBa及XYNBb酶学性质的比较发现：三者在比活性、Vmax及热稳定性方面有较大差异。该酶对不同木聚糖的酶解产物的糖份分析表明：酶解产物的主要成分为木二糖、木三糖和木四糖,占总糖含量的95%以上。     

化学制品在发酵工艺中的利用

把微生物直接作催化剂使用的方法,是由于微生物化学转化甾体的试验取得很大成功,才得到广泛证实的。霉菌、细菌或酵母作用于甾体,催化羟化、脱氢、侧链切断等多种反应。其中有几例已在工业上应用。过去这种方法特别在用化学方法     

羊毛硫肽SapB类多肽促进链霉菌形态分化作用的研究

【目的】链霉菌属于革兰氏阳性菌,以复杂的形态分化过程和强大的次级代谢产物合成能力为主要特征。链霉菌的形态分化与次级代谢产物的产生密切相关。Ⅲ型羊毛硫肽SapB能够促进天蓝色链霉菌气生菌丝体形成,暗示这类多肽可以作为靶标用于形态分化改造工程开发。本研究表征了SapB类多肽对多种链霉菌形态分化的影响,为该类多肽的工程化应用提供理论基础。【方法】生物信息学分析多个链霉菌基因组中SapB类多肽的生物合成基因簇,构建SapB类多肽的异源表达载体,利用接合转移方法导入不同链霉菌中进行异源表达,探究SapB类多肽对链霉菌形态分化的影响。【结果】SapB类多肽在不同程度上促进了多个链霉菌由营养菌丝向气生菌丝分化,表现为气生菌丝体数量的增多和分化速度的加快,缩短了链霉菌形态分化周期。【结论】SapB类多肽的过表达有助于缩短链霉菌形态分化周期,可用于针对链霉菌形态分化的工程改造。     

力达霉素产生菌球孢链霉菌C-1027中atrA同源基因的克隆及分析

目的：在天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中多效性调节因子AtrA（AtrA-c）可通过激活放线紫红素途径特异性的调节因子ActII-ORF4的转录来控制放线紫红素的产生。在灰色链霉菌Streptomyces griseus NBRC13350和阿维链霉菌Streptomyces avermitilis MA-4680中也发现了AtrA-c 编码基因（atrA-c）的同源基因,分别影响链霉素和阿维菌素的生物合成。本文目的在于探索球孢链霉菌C-1027（Streptomyces globisporus C-1027）中是否存在AtrA,克隆球孢链霉菌C-1027中atrA基因并进行生物信息学分析,为进一步确定其对力达霉素产生的调控作用及调控机制奠定基础。[方法] 采用在球孢链霉菌C-1027中异源表达AtrA-c,来确定AtrA-c对力达霉素产量的影响;通过Southern blot 分析来判断在球孢链霉菌C-1027 基因组中是否有atrA-c同源基因;PCR扩增方法获得球孢链霉菌C-1027 atrA基因（atrA-gl）并测序;通过多种生物信息学软件来分析atrA-gl及其与旁侧基因的组织结构、对已发现的AtrA蛋白进行同源性比对及亲缘关系分析。[结果]在球孢链霉菌C-1027中异源表达天蓝色链霉菌AtrA-c蛋白,发现其对力达霉素的产量有影响。以atrA-c为探针,通过Southern blot分析显示球孢链霉菌C-1027基因组中存在atrA-c的同源基因。PCR扩增得到球孢链霉菌C-1027 的atrA基因的全序列以及该基因上下游的旁侧序列（GenBank/EMBL/DDBJ 登录号GU723707）。通过对球孢链霉菌C-1027、天蓝色链霉菌A3(2)、灰色链霉菌NBRC13350以及阿维链霉菌MA-4680 AtrA蛋白序列进行同源性分析发现,四种AtrA蛋白编码氨基酸序列一致性达到65%至 87%,相似性高达70% 至89%。并且,球孢链霉菌C-1027 atrA基因与相邻基因形成的组织结构与天蓝色链霉菌和灰色链霉菌完全一致。根据蛋白质同源性绘制进化树,发现球孢链霉菌AtrA蛋白与灰色链霉菌AtrA蛋白亲缘关系最近。[结论]确定在球孢链霉菌C-1027中存在atrA同源基因并影响力达霉素的产量,克隆了首个力达霉素生物合成基因簇外的调节基因--atrA基因,通过生物信息学分析初步推测了该基因的功能,为进一步研究AtrA-gl对力达霉素途径特异性级联调控网络的调控关系奠定了基础。     

嗜热放线菌类群分类的研究I．嗜热链霉菌的分类鉴定(二)

将我国各地的厩肥、畜粪、堆肥、土壤样品,经52屯培养,分离出耐热的链霉菌菌株,通过 分类研究,证明其中有七个新种和一个新变种,定名为热丁香色链霉菌(S.lhcrmolila“砌、热栗色链霉菌(S. thermocastaneus)、热藤黄链霉菌(S. thermolulus)、热藤黄链霉菌褐色变种(S. thormoluleus var．Fuscu,)、热蓝紫色链霉菌(S. thermocyaneoviolaceus)、热淡天蓝链霉菌(S．Thermocoerulescens)、 热蓝斑链霉菌 (S. thermocyaneomaculatus)、 热黑绿链霉菌(S.Thermoatroviridis)。     

关于白色链霉菌的筛选与鉴定

白色链霉菌(Streptomyces albus)是链霉菌属的代表种,是白放线菌素、硫藤黄菌素及白真菌素等的产生菌,在放线菌的分类和抗菌素生产上具有一定的意义。已有的文献资料对白色链霉菌典型种的特征描述和鉴定依据,看法不一,概念不清,对白色链霉菌生态问题的意见也有很多分歧。目前,国际上公认的白色链霉菌     

途径特异性调控因子介导的链霉菌来源天然产物的产量提升

链霉菌是活性天然产物的重要来源.基因组学研究揭示了链霉菌有巨大的生物合成潜力,平均每株菌拥有20-40个生物合成基因簇.在常规的实验室条件下,大多数链霉菌来源的天然产物产量较低,影响了对其进一步研究和产业化开发.由于链霉菌中天然产物的生物合成受到严格的调控,对于这些调控因子和调控网络的深入研究将有力地促进链霉菌来源的天...     

链霉菌分类方法学研究近展

链霉菌是重要的资源微生物 ,由于具有重要的商业及学术价值而被广泛研究。但链霉菌属内的分类关系仍未能很好解决。主要介绍了当前链霉菌的分类方法研究状况 ,强调了运用基因型和表型相结合多相分类方法对链霉菌进行分类的重要性。