一种简易的制备和纯化质粒DNA的方法

近年来随着遗传工程的飞速发展,DNA重组技术被广泛应用,许多实验室在制备一定纯度、产量较高、方法简便的质粒DNA方面作了许多工作。国外大多数实验室普遍采用CsCl等密度梯度超离心法,但国内受仪器限制,应用较少。我们比较了PEG沉淀质粒DNA, 羟基磷灰石法制备质粒DNA,快速抽提质粒DNA,以及M.A.K柱制备质粒DNA等方法,它们都各有利弊。本实验室对L.P.Elwell的实验条件稍作改进,温和地制备清亮裂解液并抽提质粒DNA,然后应用Sephacryl S-1000作凝胶过滤,获得了纯度高、产量大,无染色体DNA     

一种简易的抽提共价闭合环状DNA的方法

纯净的、具有生物学活性的共价闭合环状DNA是DNA体外重组技术的一个重要基础。 本文报道的是我们实验室经常使用的抽提质粒pBR 322 DNA的方法。在Zasloff等酸酚法的基础上省略了蛋白酶K和RNA酶,代之     

用于(医学)诊断的DNA探针

用DNA作诊断试验是非常迅速、灵敏和特异的,容易进行并容易分析。DNA杂交试验的非放射性检测方法出现,对现代的重组DNA技术从研究实验室进入更接近临床的实验室起到了相应大的促进作用。在这里要谈到这项新颖技术的基本原则及其应用。 DNA探针是一种能够识别并能特异地与互补DNA片段,即使这些互补的DNA序列是在其它完全无关的DNA序列中。     

中国科学院植物研究所系统与进化植物学开放研究实验室设备开放试行办法

本开放研究实验室以系统与进化植物学和保护生物学为主要方向,涉及生物多样性、系统发育、数量分类学、细胞分类学、居群(群体)生物学,物种生物学和分子系统学等研究领域。现由下列实验室组成:比较解剖与胚胎学实验室、细胞学实验室、同工酶实验室、DNA实验室、数量分类学与信息系统实验室。     

回收琼脂糖凝胶中DNA的简便方法

多年来国内分子生物学实验室所采用的几种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法不同程度地存在着各种问题。现介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA的简易方法,采用实验室常用的吸附柱中的吸附膜对DNA进行拦截、纯化和回收。实验证明这种方法回收DNA具有简便快捷、成本低和效率高等优点,是一种切实可行的方法。     

DNA提取过程中混入的实验室空气微生物DNA定量

元基因组测序方法为微生物研究提供了有力的工具。但其中的DNA提取过程,会不可避免地混入实验室中的空气微生物。这些微生物DNA,是否会对一些极微量的元基因组检测(如皮肤样本等)结果造成影响,有多大影响,仍没有明确结论。本研究首先收集了实验室空气样品,用16S rRNA引物建立了基于qPCR的标准曲线,并检测了在开放环境下提取DNA过程中可掺杂的环境微生物DNA量。然后在开放环境下提取纯水DNA样品并进行元基因组分析,以确定掺杂环境微生物的种类。最后分别在生物安全柜和实验室开放环境下提取皮肤样本,并用鸟枪测序方法对样本的微生物组成进行分析,以评估掺杂环境微生物对元基因组检测结果的影响。结果显示,在实验室开放环境的DNA提取过程中,环境微生物的DNA残留可达28.9 pg,可达某些极微量样本DNA总量的30%。元基因组分析显示,样品中掺杂的环境微生物主要是痤疮杆菌Cutibacteriumacnes、大肠杆菌Escherichia coli等皮肤常见细菌。与洁净皮肤样本的信息相比,开放环境下提取掺杂了数十种环境微生物,并导致主要菌种的丰度大幅降低,从而影响结果的真实性。因此,微量样品的DNA...     

《生物工程讲座》(Ⅲ) ——基因工程的理论及应用(二)重组DNA技术和基因工程

DNA双螺旋模型的提出意味着分子生物学的诞生,重组DNA技术的建立标志着遗传工程和生物工程的问世。可以说重组DNA技术对整个生物学研究的影响比起DNA双螺旋来说有过之而无不及。目前世界上从事生物学或医学研究的大多数实验室都在使用这项技术解决不同的生物学问题。许多人衡量一个生物学实验室是否先进总喜欢把是否运用重组DNA技术和基因工程作为一个重要标志。一、重组DNA技术和基因工程概况重组DNA技术和基因工程涉及的内容很广,不仅包括外源DNA和载体的重组,还应     

一种从琼脂糖凝胶上回收DNA的高效、快捷、经济的方法

目前在国内分子生物学实验室所采用的多种从琼脂糖凝胶上回收DNA的方法普遍存在着各种问题。本文介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA简易装置。实验表明用这种装置回收DNA具有高效、快捷和经济的优点,非常适合在国内实验室普及推广。     

《重组DNA实验室手册》

《重组DNA实验室手册》(Recombinant DNA laboratory manual)修订版,由Judith W.Zyskind和Sanford I.Bernstein著,1992年出版,224页。该书著者J.W.Z.精通细菌遗传学和分子生物学,而s.I.B.在真核基因操作上是专家。每个DNA分子生物学家都需要有能力操作大肠杆菌及其噬菌体。该书包括的技术有:基本微生物操作;染色体、质粒、M13和入噬菌体DNA提取;凝胶电泳;活体诱变;限制性绘图;限制性片段离析和克隆;DNA测序;探针标记;DNA凝胶印迹法、噬菌斑迹法和分子杂交。修订版还包括了新的实验室技术即聚合酶链反应,它对基因分析是场革命。读者对象为具有分子生物学背景,但在操作DNA分子上经验有限的科研人     

基于SPE法的新型DNA提取微芯片的制作和研究

在生物医学和临床诊断中,DNA提取是关键的步骤。随着生物分析仪器的小型化和芯片化,有必要制作DNA提取芯片。固相提取法（Solid-Phase Extraction,SPE法）是近年来实验室常用的DNA提取方法,其操作简单,时间消耗少,但是基于SPE法制作的微芯片报道较少,利用硅微加工工艺制作DNA提取芯片,并使用SPE法进行PCR产物中DNA提取实验及大肠菌培养液中DNA的提取实验。此芯片可以在半个小时内完成DNA的提取,易于和别的芯片（如PCR芯片等）整合,具有很好的发展前景。     

DNA多面体数学模型的研究进展

近年来,越来越多的DNA多面体在实验室中被合成出来,深入理解这些新颖的多面体结构和性质成了新的挑战,迫切需要综合运用数学、生物、化学等理论和手段进行研究。现在综述文献的基础上,以两种十四面体为例,系统介绍通过DNA多面体的新欧拉公式和两种示性数来刻画DNA多面体的拓扑结构,探索DNA多面体的组装规律和性质。     

一种简单有效的去除植物DNA中多糖等杂质的方法

目的：寻找一种经济、快速、简便的去除多糖等杂质并获得高质量DNA的、适于不同植物而又便于一般实验室操作的基因组DNA提取方法。方法：使用1mol/LNaCl溶液溶解常规方法提取的DNA,离心后弃沉淀,从而使多糖等杂质去除。结果：提取DNA纯化之后经电泳检测以及OD260nm和OD280nm比值的测定,限制性内切酶反应,PCR扩增的结果表明,基因组DNA条带清晰,亮度均一,DNA片段大小一致,无降解弥散,用改进方法提取的DNA,无论在纯度上还是在完整性上都比用常规方法要好。结论：该方法能较好的去除DNA中色素、多糖等干扰物质。     

姊妹染色单体差别染色(SCD)标本制作方法

姊妹染色单体交换(SCE)是检查致癌物或致突变物的细胞遗传学效应的一种新方法。它具有灵敏、准确和比较简便、快速的优点。近来,在研究染色体的分子结构、DNA复制方式、DNA的损伤和修复等基本问题方面,此法亦逐渐显示了重要性。兹将本实验室的操作技术介绍如下(以人外周血淋巴细胞培养为例):     

DNA探针的诊断应用

<正>使用重组DNA技术制备特异的分子(常为DNA)探针已为医学和兽医诊断实验室提高对传染病、遗传紊乱、恶性肿瘤的诊断提供了新的强有力的工具,同时也给完成如组织分型、亲缘关系试验这类工作提供了更灵敏感更特异的方法,该技术对法医学也是很有用的(如表1)。DNA探针作为诊断试剂的应用或使实验室减少周转时间,拓宽所检测、鉴别和/或定量的试样的范围,且由于简化     

简便、快速测定细胞裂解液中DNA含量的荧光分析

生物组织中DNA的定量测定方法,均需进行样品的处理,步骤烦琐,费时,又影响灵敏度和重现性。Ananda等利用荧光探针——菲啶溴红检测生物样品中核酸的含量,虽然简化了样品的处理过程但仍不能直接测定细胞匀浆中DNA的含量。Rassel和Williamson等报道了4,6-二脒基-2苯吲哚(DAPI)荧光试剂能与DNA特异性结合成荧光复合物。Labarca等利用反苯并咪唑荧光试剂直接检测生物组织粗匀浆液中DNA含量,我们实验室在此基础上建立了直接测定细胞粗裂解液中DNA含量的方法、可检测10ng DNA。     

蚧虫基因组DNA不同提取方法的比较

实验以日本龟蜡蚧CeroplastesjaponicusGreen,白蜡绵粉蚧PhenacoccusfraxinusTang ,朝鲜球蚧DidesmococcuskoreanusBorchseniush和瘤大球坚蚧EulecaniumgiganteaShinji等 4种蚧虫为材料 ,分别用十二烷基硫酸钠 (SDS)法、十六烷基三乙基溴化铵 (CTAB)法、醋酸钾 (KAc)法和氯化钠 (NaCl)法等 4种方法 ,对单只蚧虫进行基因组DNA提取 ,用 0 8%琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA。结果表明 ,4种方法都可以提取到基因组DNA ,但是比较而言 ,CTAB法和NaCl法所提取的DNA质量明显优于SDS法和KAc法 ,并适用于PCR。因此认为 ,CTAB法和NaCl法是实验室提取单只蚧虫基因组DNA更有效而实用的方法。     

欧洲分子生物学实验室的重组DNA研究简况

欧洲分子生物学实验室由奥地利、丹麦、法国德意志联邦共和国、以色列、意大利、荷兰、比利时、瑞典、瑞士、及大不列颠北爱尔兰联合王国共同资助,于1978年正式成立。成立实验室的目的并不是为了和各国的研究机构竞争,而是利用先进的设备和条件向它们提供服务,解决困难。例如:实验室拥有能产生世界上最强X射线的电子同步加速器以及与之配套的用于生物学研究的各种设备。实验室还建造了将中子射线用于生物学研究的各种设施。吸引了欧洲各地的科学工作者到这里来做实验。本实验室的最大特点是它的全部活动的一半用于发展生物学仪器。它还应各国科学家的要求建立了一个可进行重组DNA研究的最高水平的防护设施。重组DNA在这里是最重要的研究项     

欧洲分子生物学实验室的重组DNA研究简况

欧洲分子生物学实验室由奥地利、丹麦、法国德意志联邦共和国、以色列、意大利、荷兰、比利时、瑞典、瑞士、及大不列颠北爱尔兰联合王国共同资助,于1978年正式成立。成立实验室的目的并不是为了和各国的研究机构竞争,而是利用先进的设备和条件向它们提供服务,解决困难。例如:实验室拥有能产生世界上最强X射线的电子同步加速器以及与之配套的用于生物学研究的各种设备。实验室还建造了将中子射线用于生物学研究的各种设施。吸引了欧洲各地的科学工作者到这里来做实验。本实验室的最大特点是它的全部活动的一半用于发展生物学仪器。它还应各国科学家的要求建立了一个可进行重组DNA研究的最高水平的防护设施。重组DNA在这里是最重要的研究项     

一种从活性污泥中提取微生物总DNA的方法

对活性污泥的微生物群落进行研究的首要前提是获得大量的高纯度微生物基因组DNA。本文建立了一种高效、简便的提取活性污泥总DNA方法。从提取的核酸总量、纯度、基因组完整性等多方面对所得到的DNA质量进行了评价,结果表明,本法从单位活性污泥中提取的DNA得率为105-823μg/g,结构完整,纯度很高,无需进一步的纯化,可直接进行微生物群落分析及构建文库等后续分子生物学操作。现在实验室使用的提取活性污泥中DNA的方法,纯度普遍都无法达到PCR反应和建立文库的要求,本文建立的活性污泥DNA提取方法则可以克服这一难题。     

耐辐射球菌DNA双链断裂修复机制研究新进展

耐辐射球菌对于电离辐射等DNA损伤剂具有极强的抗性,能够将同一个基因组中同时产生的高达100个以上的DNA双链断裂在数十小时内高效而精准地进行修复,是研究DNA双链断裂修复机制的重要模式生物。同源重组、非同源末端连接和单链退火途径作为3个主要的修复途径参与了耐辐射球菌基因组DNA双链断裂的修复过程。此外,一系列新发现的重要蛋白质,如Ppr I、Ddr B等对于耐辐射球菌基因组的修复过程同样至关重要。根据本实验室和国内外在这一研究领域近年来的报道,以不同的修复途径为线索,综述该菌DNA双链断裂修复机制的最新研究成果。