静注免疫球蛋白生产过程中的病毒灭活

<正>许多静注免疫球蛋白(IVIG)制品有传染输血后肝炎(PTH)的记录而肌肉注射免疫球蛋白(IMIG)却有良好的病毒安全性记录,在许多IVIG制备过程中。血浆首先被低温乙醇法分离,该法也用于制备常规的IMIG。尽管如此,IMIG与IVIG的制备在分离过程的结尾即乙醇的去除方法上有所不同:Cohn乙醇法(IMIG)中通常使用冻干法,而在IVIG的生产中却使用了凝胶过滤或透析过滤法。此外,通过使用如胃蛋白酶或PEG处理的生产工艺去除IVIG中的聚合免疫球蛋白。使用胃蛋白酶和     

静注免疫球蛋白分离提纯中病毒的灭活和消除

<正>静脉输注免疫球蛋白(IVIG)适应于治疗原发性血小板减少性紫癜、川畸病、骨髓移植和获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。这些患者的抵抗力大多很弱,需用相对大剂量的IGIV。在Cohn氏乙醇分离过程中人免疫缺陷病毒(HIV)。被灭活。聚乙二醇(PEG)分层法可去除IgG聚合体和免疫复合物得到单体IgG。但作者注意到制品有传播非甲非乙肝炎的危险。为保障制品的安全性,作者发明了一种液体加温处理方法以灭活病毒并不使IgG变性。本文阐述了一种IVIG60℃加温10小时的方法。对加热的IVIG和相对应的非加热对照制品的理化和生物学特性试验结果作了比较。     

人静注免疫球蛋白和白蛋白紫外线处理过程中对病毒的灭活

<正>静注免疫球蛋白制品(IVIG)作为安全产品已赢得了良好声誉,IVIG中HIV和乙型肝炎的传染已被排除,对非甲非乙型肝炎的安全性提出了疑问并作了报导,但仍需作进一步的研究。 对IVIG制品使用最频繁的病毒灭活方法有低pH贮存、pH4/胃蛋白酶处理和β-丙内酯处理。在IVIG制品中,对干热处理法和有机溶剂与表而活性剂结合法作为病毒灭活步骤也作了研究。 所有这些病毒死活方法的主要适用处即主要的血液传播病毒群是脂包、酸性不稳定型和热歌感型。这样就遗留了大量的非脂包、非酸性不稳定病毒,对灭活这些病毒的其它方法也应继续进行研究。 最近才确定特性的含有一条单链RNA的丙型肝炎病毒,表现出类似于鼠疫病毒和黄热病病毒的顺     

由pH4处理的免疫球蛋白传播的非甲非乙肝炎

<正>威廉等报告了4例推定的,由苏格兰国家输血中心制造的静脉注射免疫球蛋白制品(IVIG)所传播的非甲非乙肝炎(NANBH)。象作者们指出的那样,这并不是第一次由IVIG所传播的NANBH;他们从有关文献上已查到4次流行,共5个病例。威廉的报告中所列的表1是非常有用的,因为它证实了在这些病例的大多数已发表的资料是多么马虎。     

在分离静脉注射免疫球蛋白时病毒的灭活和消除:湿热处理和PEG分离

<正>静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗无丙种球蛋白血症的效果和安全性,使治疗原发性血小板减少性紫癜、kawasaki病、骨髓移植和获得性免疫缺陷综合征都成为适应症。这些病人的防御能力可能很弱,需要给相对大剂量的IVIG。人类免疫缺陷病毒(HIV)在Cohn氏乙醇分离纯化IgG的过程中已被     

静注人免疫球蛋白IgG含量测定中的影响因素

为了进一步分析静注人免疫球蛋白(IVIG)IgG含量测定中的影响因素,分别以不同的稀释缓冲液、不同的稀释度、不同的稳定剂对IVIG的IgG含量进行测定。结果表明以不同的稀释缓冲液、不同的稳定剂测定的同批IgG含量无显著性差异;而用不同的稀释度测定的同批IgG含量有差异。因此可见,IVIG制品中采用的不同稳定剂对IgG含量测定影响不大;可以用不同的稀释度测定的均值作为该批IVIG制品的IgG含量。     

人静脉注射丙种球蛋白制品的抗补体活性测定法

<正> 许多研究证明,分离提取的免疫球蛋白(IgG)制品,具有抗补体活性。有人证明,这种抗补体成分是IgG分子聚合体。来自于IgG分离过程中,物理化学因素等均可引起IgG分子聚合。 由于抗补体活性的存在,限制了球蛋白制品的临床应用。静脉用了这种制品,可引起严重全身反应。但可用低pH加蛋白酶水解,化学处理等许多方法消除抗补体活性     

不同来源血浆对静注人免疫球蛋白中抗-HBs、白喉抗体效价的影响

调查分析不同来源原料血浆对静注免疫球蛋白(IVIG)制品内的抗-HBs、白喉抗体效价的影响。选择6个单采血浆站,对其提供的血浆为原料制备的IVIG所含的抗-HBs抗体、白喉抗体效价进行了测定。检测结果显示,用A、B、C、D、E、F编号的6个相应血浆站采集的血浆为原料制备成IVIG其抗-HBs抗体(IU/g)效价分别为33.77、103.95、70.94、132.45、78.84、58.28;白喉抗体平均效价分别为5.17、7.36、4.26、7.67、10.14、9.24。6个单采血浆站间的IVIG制品中白喉抗体效价无明显差异,但抗-HBs效价却存有显著差异。     

反相HPLC法测定静注人免疫球蛋白中残余胆酸钠含量研究

用反相高效液相色谱法(R—HPLC)测定静注人免疫球蛋白(IVIG)中残余胆酸钠含量。首先用固相提取柱吸附、浓缩制品中残余胆酸钠,然后加入一定量胆酸钠,使样品中胆酸钠含量达到可检测水平后,依外标法进行测定。结果表明,用R—HPLC法测定胆酸钠准确性及重复性较好,是一种相对准确快速的方法。     

PEG化重组人白细胞介素-6制品游离PEG测定方法的研究

为了建立PEG化学修饰的重组人白细胞介素-6(PEG-rhIL-6)的部分质量控制方法,参照2005年版《中华人民共和国药典》三部附录III B高效液相色谱法,以RP-HPLC方法分离PEG-rhIL-6原液中的不同成分,用蒸发光散射监测器检测游离PEG,用外标法测定计算样品中残留PEG的含量。PEG修饰rhIL-6结构稳定;制品中的游离PEG含量符合要求。RP-HPLC法检测游离PEG结果可靠。     

加热灭活病毒的静脉注射免疫球蛋白的研究

<正>静脉注射免疫球蛋白(IVIG)的研究已有30多年的历史,能够大量供临床应用还是近十几年的事情。自1987年以来,我国的IVIG研究发展很快,已有较大规模生产条件问世,并已在加紧研究灭活病毒的新工艺。IVIG的出现,为需要大剂量注射免疫球蛋白的病人带来了许多好处和方便。但随之也不断出现因输注IVIG而发生非甲非乙肝炎的报导。近年来,日本学者致力于灭活病毒的IVIG-IH生产研究,并取得了成功。我有幸在1991年春赴日学习该技术,在导师指导下进行了VIG的提取及质量分析研究,现将结果介绍如下:     

低pH孵放、干热处理冻干静脉注射人免疫球蛋白的实验研究

主要介绍冻干静脉注射人免疫球蛋白 (IVIG)分别通过 60℃ 72h,80℃ 72h ,低pH孵放 2 1d处理后 ,IVIG的各项理化及生物活性的变化 ,以及IVIG经过低pH孵放的灭活病毒情况。实验结果表明 ,处理后的IVIG其IgG各组份相对含量、抗补体活性 (ACA)、前激肽释放酶激活剂 (PKA)、白喉抗体、抗 HBs等结果 ,除ACA ,PKA略有下降 ,其他指标无明显变化 ,各项指标均符合 2 0 0 0版《中国生物制品规程》 ;加热后没有新抗原产生。低pH孵放 2 1d通过加指示病毒的实验 ,病毒灭活效果达到 7.0 0logTCID50 / 0 .1mL以上 ,灭活病毒有效。     

降低静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性的试验观察

采用CH50试验法测定静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)抗补体活性(ACA),在中性pH条件下,比较了不同的Na^ 含量及不同种类的糖对ACA测定结果的影响。结果表明,NaCl含量由0．2％上升至1．0％时,ACA呈逐渐下降趋势;用5％葡萄糖作稳定剂时ACA最低。IVIG在37℃条件下放置一月后,ACA有明显下降趋势。在半成品配制过程中,pH及各种成份的加入顺序对ACA也有一定影响。     

预过滤系统对静注人免疫球蛋白纳米过滤的效率和质量影响

本文对静注人免疫球蛋白(以下简称静丙)进行纳米膜过滤时,使用不同预过滤系统对纳米过滤效率和静注人免疫球蛋白产品质量的影响进行了比较,旨在得出不同预过滤系统对静丙进行纳米过滤的效率和主要质量指标的影响。结果:不同的预过滤系统对IVIG纳米过滤的效率影响较大,选择适宜的预过滤系统能够有效提高纳米过滤的效率,且过滤后制品质量检查结果无明显差异(P0.05)。结论:选择适宜的预过滤系统,可显著提高静丙纳米过滤效率,且不影响其主要质量指标。     

采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(pH4)中抗体Fc段生物学活性的初探

目的初步探讨采用多种抗原测定静注人免疫球蛋白(IVIG)(pH4)中抗体的Fc段生物学活性,了解IVIG中抗体的Fc段生物学活性。方法采用补体活化的经典途径中免疫复合物激活补体的方法,将不同浓度的麻疹病毒、风疹病毒、乙肝表面抗原(HBsAg)、破伤风类毒素、脑膜炎球菌P64k外膜蛋白和白喉类毒素6种抗原分别致敏人O型血红细胞形成红细胞-抗原结合物;然后,6种致敏红细胞分别与IVIG孵育,与特异性抗体形成红细胞-抗原-抗体复合物;最后,此复合物与补体反应,在541 nm波长处读取吸光值,并绘制溶血反应动力学曲线,分别计算IVIG中针对上述6种抗原IgG的Fc段生物学活性。采用此方法,用6种抗原致敏的红细胞测定IVIG的Fc段生物学活性10次,验证此方法的重复性。结果麻疹病毒、风疹病毒、HBsAg、破伤风类毒素和脑膜炎球菌P64k外膜蛋白致敏的红细胞分别与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线较平缓,而白喉类毒素致敏的红细胞与供试品和补体反应后,测定的溶血反应动力学曲线下降明显,呈典型的"S"型曲线。计算结果显示,IVIG中针对此六种抗原的抗体Fc段生物学活性相对于参考品均大于80%。Fc段生物学检测方法重复性较好。结论采用多种抗原分别致敏红细胞,可以用来检测IVIG中多种抗体的Fc段生物学活性,为深入了解IVIG制品中的多种抗体的Fc段生物学活性奠定了基础。     

免疫诊断细胞方法(续三)

<正> 检查已处理的红细胞的特异性及其与Ig结合能力。检查已处理的红细胞的特异性及其与相应分类免疫球蛋白的相互作用可用下列方法。①用抗一个类型的免疫球蛋白抗体处理红细胞,仅应与该类免疫球蛋白出现血球凝集,但不与其他类凝集,使用的免疫球蛋白可通过层析法和通过带上特异性抗体免疫吸收剂分离。②用携带抗一个类型的免疫球蛋白抗体     

用旋光度法测定静脉注射用人免疫球蛋白中麦芽糖含量

用旋光度测定法测定静脉注射用人免疫球蛋白 (IVIG)中麦芽糖含量 ,简便、快速 ,准确 ,重复性好 ,麦芽糖浓度与旋光度成正比 ,用该方法制备标准曲线具有很好的相关性 ,相关系数r(n =10 ) ±s为 0 .99996± 0 .0 0 0 0 3。测定两批IVIG ,分别重复测定 9次 ,麦芽糖含量分别为 9.85± 0 .0 82和 9.5 5± 0 .0 85变异系数分别为 0 .6 0 % ,0 .6 9% ,该法的内标回收率 % (n =9) ±s分别为 10 0 .4%± 0 .82和 98.8%± 0 .85 ,此法可作为IVIG中麦芽糖含量检测的常规方法     

人免疫球蛋白中肠道病毒71型中和抗体效价的测定

采用经典微量细胞病变法,应用近两年分离自中国手足口病(HFMD)高发区的3株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对中国不同血液制品厂家生产的35批人免疫球蛋白制品进行抗-EV71中和效价检测。结果显示,3株不同EV71病毒株间的抗-EV71中和效价差异均在4倍以内,差异无显著的统计学意义(F=2.323,P0.05)。根据这3株毒株检测结果判定,35批人免疫球蛋白的抗-EV71均为阳性,肌肉注射用免疫球蛋白(简称肌丙)的抗-EV71-GMTs(525.9)显著高于静脉注射用免疫球蛋白(简称静丙)的GMTs(252.3,F=66.518,P0.01)。30批静丙的抗-EV71-GMTs中和效价分布在128.0~384.0之间。应开展原料血浆中抗-EV71中和效价的筛选,研制高效价的EV71特异性免疫球蛋白制品,用于HFMD的治疗和预防。     

乙型肝炎疫苗和乙型肝炎母婴传播的免疫阻断

乙型肝炎疫苗和高价抗乙肝免疫球蛋白(HBIG)均已研制成功,并开始大量生产使用,这是近年预防医学和生物制品研究的两项重大突破;它使人类在征服全球性重大传染病方面又迈出了历史性的一步。近十年来的研究已完全确认,上述两大制品在预防高危人群乙肝感染和阻断暴露后人群(如乙肝带毒母亲的婴儿)的乙肝带毒,卓有成效。这两大生物制品的有计划大量生产和正确使用,将会根本改变乙肝的流行状况,使控制和甚至消灭乙肝成为可能。现就国内外乙肝疫苗,高价乙肝免疫球蛋白的研究、生产和应用现状及乙肝母婴传播的免疫阻断等有关问题,作一简要介绍。     

干旱胁迫下景天植物能量水平与超微弱发光的关系

该试验以德景天幼苗为材料,设计PEG、PEG+H_2O_2、PEG+苯甲酸钠、蒸馏水(CK)4个处理,分析PEG模拟干旱胁迫及活性氧调控干旱胁迫下超微弱发光(ultraweak luminescence,UWL)和能量水平的变化及两者的关系,为揭示UWL的产生及其来源提供理论依据。结果表明:(1)在PEG模拟干旱胁迫过程中,CK和PEG处理德景天叶片的ATP含量、能荷和UWL强度均随着胁迫时间延长呈下降趋势,但PEG处理的上述指标的下降较CK更快、降幅更大。(2)进一步采用H_2O_2和苯甲酸钠调控活性氧的PEG干旱胁迫过程中,PEG+H_2O_2、PEG+苯甲酸钠处理的德景天叶片ATP含量、能荷和UWL强度的变化趋势与PEG处理基本一致,均随胁迫时间的延长呈下降趋势;但PEG+H_2O_2处理的上述指标均低于PEG处理,而PEG+苯甲酸钠处理的上述指标却高于PEG处理。(3)相关分析表明,在干旱胁迫及活性氧调控干旱胁迫下,德景天叶片UWL强度均与ATP含量和能荷呈显著正相关。研究发现,在干旱胁迫和活性氧调控干旱胁迫下,德景天叶片ATP含量和能荷较CK均明显下降,UWL强度也随之明显降低;UWL强度随着以ATP为代表的能量水平的下降而降低,说明植物中UWL的产生与其能量水平的高低显著相关。