无溶剂体系中脂肪酶改造猪油制备功能性脂的研究

我国有丰富廉价的动植物油资源,但这一资源并未得到有效的利用,为了充分利用这些资源,开展了无溶剂系统脂肪酶催化猪油与辛酸酸解制备功能性脂的研究工作。脂肪酶筛选实验表明,在所选用的五种脂肪酶中,来自T .languginosa的固定化脂肪酶LiopzymeTLIM的催化效果最好。以LipozymeTLIM为催化剂,进一步研究了酶量、底物比率、反应时间、反应温度和水分添加量对猪油中辛酸插入率的影响。反应产物通过高效液相色谱法(HPLC)进行分析。研究结果表明,当脂肪酶量为20% (底物重量百分比)时,猪油中辛酸插入率最高。反应时间研究表明,当反应时间达到24h时,辛酸的插入率最高,达到38.77mol%。当猪油与辛酸的比率为1∶2 (摩尔比)时,辛酸的插入率最高,达到30 95mol%。在4 5～6 0℃范围之内,反应温度对辛酸插入率没有明显的影响,温度高于6 0℃时,辛酸插入率降低。水分添加量为2 5 %时,辛酸插入率最高,高达35 76mol%。     

响应面法优化耐有机溶剂脂肪酶营养条件

目的：通过优化蜡状芽孢杆菌SWWL6产耐有机溶剂脂肪酶营养条件,产酶量有较大提高。方法与结果：通过单因素实验确定了产酶的最佳碳源、氮源及无机盐分别为可溶性淀粉、酵母膏、NH4NO3、MgSO4·7H2O和NaCl。部分因子实验结果表明初始培养基中酵母膏、NH4NO3的质量浓度对产酶的影响显著。通过最陡爬坡实验逼近最大响应区域。以中心组合设计和响应面分析法确定了最优培养基。结论：优化的培养基为酵母膏0.64%、NH4NO30.384%、可溶性淀粉1%、MgSO4·7H2O0.1%、NaCl0.25%、甲苯20%。优化后脂肪酶相对酶活为348.44%,比优化前提高了3.48倍。     

Galactomyces geotrichum Y25产脂肪酶条件的优化

应用响应面法对Galactomyces geotrichumY25液体发酵产脂肪酶的条件进行了优化。首先采用Plackett-Burman设计对影响产酶因素的效应进行评价,筛选出黄豆粉、玉米浆和发酵时间3个对产酶影响显著的因素。用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后,利用响应面设计对显著因素进行优化,得出黄豆粉、玉米浆最佳质量分数分别为2.51%、2.12%,最佳发酵时间101.95 h。优化后液体发酵液中脂肪酶活力提高到34.65 U/mL,比初始酶活力9.6 U/mL提高了3.61倍。表明响应面法可显著优化Galactomyces geotrichumY25液体发酵产脂肪酶条件。     

脂解麻疯树油脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其催化特性

[目的]分离筛选具有脂解麻疯树油能力的脂肪酶产生菌株,为以麻疯树油为原料酶法生产生物柴油奠定基础.[方法]以麻疯树油为唯一碳源,从麻疯树种子粉末处理过的土壤中分离筛选出1株具有脂解疯树油能力的脂肪酶产生菌,考察该菌株及其脂肪酶对有机溶剂耐受性以及脂肪酶催化酯化和转酯反应的能力,并通过生理生化特征和16S rDNA序列分...     

响应面法优化Burkholderiasp．SYBCLIP—Y发酵产低温脂肪酶条件的研究

用响应面法对Burkholderiasp．SYBCLIP—Y液体发酵产低温脂肪酶的发酵条件进行了快速优化。首先利用Plackett—Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的三个因素：牛肉膏,橄榄油,TritonX-100;用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,确定出牛肉膏,橄榄油,TritonX-100的最佳浓度分别为：牛肉膏31．8g／L、橄榄油21mL／L、TritonX-10036．55mL／L,优化后脂肪酶的酶活达到61．52U／mL,是优化前的2．62倍。     

Candidasp．99-125脂肪酶催化猪油酸解合成1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯

人乳脂是一种在甘油骨架Sn-2位上富含棕榈酸（C16：0）的结构酯。经分析可知,猪油中棕榈酸主要分布在甘油酯的Sn-2位,可作为制备1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯（OPO）的原料。以Candidasp．99—125脂肪酶作催化剂,以猪油和油酸为原料,通过正交试验对无溶剂体系中酸解合成OPO的工艺条件进行研究,得到最适反应条件：猪油与油酸的质量比为1：2．0,酶用量为总底物质量的10％,反应温度40℃,反应时间4h。在该反应条件下,经酸解合成的产物三甘酯中,Sn-2C16：0的含量大于70％,占总脂肪酸中棕榈酸含量的93％以上,并合有43％以上的OPO。     

响应曲面法制备蛹虫草子实体酶解液的研究

为了将蛹虫草开发成为便于人们食用的产品形式,本实验以不同的酶对蛹虫草进行水解得到蛹虫草酶解液.以水解度和酶解液中腺苷含量为目标,确定选用木瓜蛋白酶.以水解度为响应指标,应用响应曲面法对蛹虫草酶解条件进行优化,根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,选取酶解温度、酶解时间、加酶量三因素三水平进行中心组合实验,响应曲面分析结果表明水解最佳条件为:酶解温度60.92℃,酶解时间11.85 h,加酶量1.02％,此条件下蛹虫草的水解度达到最大.水解度验证值61.27％与预测值60.76％接近,说明建立模型正确.     

茴香酸产生菌发酵条件的优化

为提高微生物降解反式茴脑获得茴香酸的产量,对假单胞菌Pseudomonas sp.NT2的发酵参数进行优化,以提高降解过程的转化率。利用单因素试验考察碳氮源种类及浓度、反式茴脑添加量、发酵温度、接种量、初始pH以及装液量对茴香酸生成量、反式茴脑降解率的影响,通过Plackett-Burman试验和最陡爬坡试验确定影响茴香酸生成量的显著因素并获取中心点,最后采用Box-Behnken模型进行响应面优化得到最佳发酵条件并验证。结果表明氯化铵浓度、初始pH和装液量是显著影响因素,最佳发酵条件为:柠檬酸钠10 g/L,氯化铵1.26 g/L,反式茴脑添加量1%,发酵温度30℃,接种量4%,初始pH 7.9,装液量42 mL/250 mL。优化后茴香酸生成量为7.24 g/L,为优化前的3.5倍,茴香酸摩尔生成率为80.72%,反式茴脑降解率为89.81%,分别比优化前提高了270.28%和97.78%。综上,假单胞菌NT2是生物转化生产茴香酸的潜力菌株。响应面优化可以显著提高反式茴脑的降解率和茴香酸产量,这为大规模生产茴香酸奠定了基础。     

解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1的克隆、密码子优化及功能表达

摘要：【目的】克隆解脂耶氏酵母（Yarrawia lipolytica）脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达。【方法】通过PCR扩增Y. lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P. pastoris密码子偏爱性,运用重叠延伸PCR合成改造后基因MLip1,将其分别克隆至诱导型分泌载体pPIC9K和新构建的组成型分泌载体pGAP9K上,电转至P. pastoris GS115中,G418抗性筛选得到高拷贝转化重组子,摇瓶发酵     

寄生曲霉CICC40365利用木糖产L-苹果酸的发酵条件优化

【目的】为提高L-苹果酸产量及木糖利用率,以寄生曲霉(Aspergillus parasiticus CICC40365)为菌种,木糖为碳源,对其发酵工艺及木糖代谢途径进行初步研究。【方法】采用单因素试验和响应曲面法(Box-Behnken设计)对培养基和发酵条件进行优化。【结果】获得最佳培养基配方为:木糖100.0 g/L、硫酸铵2.0 g/L、酵母浸粉3.0 g/L、硫酸镁0.20 g/L、硫酸锰0.15 g/L、硫酸亚铁0.08 g/L、碳酸钙80.00 g/L,L-苹果酸的产量为53.58 g/L,较优化前提高40.5%。发酵条件较好组合为:接种量为8%(体积比)、摇瓶装液量60 mL/250 mL、发酵温度32°C、摇床转速170 r/min、发酵周期8 d,L-苹果酸的产量为55.47 g/L。Mg2+、Mn2+对木糖代谢中相关酶的影响研究结果表明,木酮糖激酶在该菌株代谢木糖过程中起着重要作用。【结论】寄生曲霉CICC40365能够较好地利用木糖发酵产L-苹果酸,其产量及木糖的利用效率均得到提高。     

Lithocholic Acid Side-chain Cleavage to Produce 17-Keto or 22-Aldehyde Steroids by Pseudomonas putida strain ST-491 Grown in the Presence of an Organic Solvent,Diphenyl Ether

We devised a method to screen for microorganisms capable of growing on bile acids in the presence of organic solvents and producing organic solvent-soluble derivatives. Pseudomonas putida biovar A strain ST-491 isolated in this study produced decarboxylated derivatives from the bile acids. Strain ST-491 grown on 0.5% lithocholic acid catabolized approximately 30% of the substrate as a carbon source, and transiently accumulated in the medium androsta-1,4-diene-3,17-dione in an amount of corresponding to 5% of the substrate added. When 20% (v/v) diphenyl ether was added to the medium, 60% of the substrate was converted to 17-keto steroids (androst-4-ene-3,17-dione-like steroid, androsta-1,4-diene-3,17-dione) or a 22-aldehyde steroid (pregna-1,4-dien-3-on-20-al). Amounts of the products were responsible for 45, 10, and 5% of the substrate, respectively. In the presence of the surfactant Triton X-100 instead of diphenyl ether, 40% of the substrate was converted exclusively to androsta-1,4-diene-3,17-dione.