体外培养新生大鼠大脑皮层星形神经元钾通道的特性及膜外钾离子浓度对其影响

用膜片钳技术中的细胞贴附方式和内面向外方式,首次在新生大鼠大脑皮层星形神经元胞体膜上记录到一类电压依赖性钾通道。此通道可被２０ｍｍｏｌ／ＬＴＥＡ,５ｍｍｏｌ／ＬＢａ２＋,１４０ｍｍｏｌ／ＬＣｓ＋阻断,不受２０ｍｍｏｌ／Ｌ４—ＡＰ影响,其激活不依赖Ｃａ２＋。膜外钾离子浓度对通道的特性有显著的影响,逆转电位随［Ｋ＋］０的增大而增大,并表现出一定的饱和现象,两者的对数呈线性关系;同一驱动电位下,平均开放时间和开放概率随［Ｋ＋］０的增大而增大,平均关闭时间的变化则相反。     

POTENTIATION OF CAFFEINEINDUCED CONTRACTURE BY RAISING EXTRACELLULAR POTASSIUM IN FROG SKELETAL MUSCLE

用蛙胫前肌小束为材料,研究了提高胞外钾［Ｋ＋］Ｏ对咖啡因挛缩的作用。［Ｋ＋］Ｏ从２ｍｍｏｌ／Ｌ提高到１０或２５ｍｍｏｌ／Ｌ,由３ｍｍｏｌ／Ｌ咖啡因引起的挛缩明显增强。以ＰＫＣ／ＰＣ（ＰＫＣ和ＰＣ分别为在高钾和正常钾条件下的咖啡因挛缩）表示的咖啡因挛缩增强,依赖［Ｋ＋］Ｏ和高钾作用时间。随着１０ｍｍｏｌ／Ｌ［Ｋ＋］Ｏ作用时间延长,直至１０ｍｉｎ,增强逐渐增加。但是,２５ｍｍｏｌ／Ｌ［Ｋ＋］Ｏ作用１ｍｉｎ时增强达到最大,然后下降到对照。ＰＫＣ／ＰＣ变化时程不能用高钾引起的去极化解释,而与由相似［Ｋ＋］Ｏ引起的胞浆自由钙变化时程相符。提示,至少在蛙骨骼肌,高钾引起的咖啡因挛缩增强主要是由胞浆自由钙升高引起的。     

SNP抑制5-HT诱导的胞内游离钙浓度升高和内钙释放

用Ｆｕｒａ － ２／ＡＭ 荧光测量技术研究了５ － 羟色胺（５－ ＨＴ） 诱导的大鼠尾动脉平滑肌细胞胞内钙升高和一氧化氮（ＮＯ） 的抑制效应。实验表明, 胞外０ｍ ｍｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 时胞内静息［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 为２０ ．２±８ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ８） 。１０μｍｏｌ／Ｌ ５－ ＨＴ 可诱导出胞内钙库释放引起的瞬态［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值达２４５ ．７ ±７１．６ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ６） 。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ 硝普钠（ＳＮＰ） 可抑制５－ ＨＴ 诱导的［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值浓度降为７５．１±３５ ．９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ５） 。当细胞浴液含２．５ｍ ｍｏｌ／Ｌ Ｃａ２ ＋ 时,静息［Ｃａ２ ＋］ｉ为１１２ ．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ５） , 这时１０μｍｏｌ／ Ｌ ５ － ＨＴ 可诱导［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 的峰值为２５２ ．３ ±８０ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,以及其后平台浓度为１４３ ．０ ±３７ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,略大于［Ｃａ２ ＋］ｉ 为１１２．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／Ｌ 的静息浓度,为外钙内流引起。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ ＳＮＰ 也可抑制５－ ＨＴ 诱导［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 平台相浓度。平台浓度由１４３ ±４７     

Ni^2＋对心肌细胞Na^＋,K^＋活度及膜钠泵活动的影响

本实验应用离子选择性微电极方法,动态监测了Ｎｉ２＋对心肌细胞Ｎａ＋、Ｋ＋活度的影响,并以细胞内Ｎａ＋逐出速率［ｄ（ａｉＮａ）／ｄｔ］作为膜钠泵活动度的指标,观察了Ｎｉ２＋对膜钠泵活动的影响。结果显示：（１）在本实验浓度下Ｎｉ２＋对静息及活动（自律或电刺激）的细胞内Ｎａ＋、Ｋ＋活度无明显影响;（２）可使细胞外Ｋ＋活度升高;（３）便刺激停止即刻细胞内Ｎａ＋逐出速率下降;（４）减小无钠无钙液引起的细胞外Ｋ＋活度下降幅度。结果提示：Ｎｉ２＋对处于高水平活动的心肌细胞膜钠泵具有明显的抑制作用,而对处于一般活动状态的膜钠泵则未见有明显影响;在Ｎｉ２＋存在下心肌细胞膜对Ｋ＋的通透性有不同程度的提高。     

血管平滑肌细胞上的自发内向阳离子通道

采用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌ－ａｔａｃｈｅｄ）,在酶法分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上记录到一种自发的内向阳离子通道。结果发现：１、在实验条件下（池子液：Ｋｒｅｂｓ,电极液：高钾）,该通道电导为２６．５±４．１ｐＳ,且具有明显的电压依赖、时间依赖和Ｃａ２＋依赖的特性;２、该电流具有极显著的内向整流特性;３、离子替换实验表明,该通道对Ｎａ＋和Ｋ＋具有很好的通透性,对Ｃｌ－的通透则很差;４、胞外加入４－ＡＰ（２ｍｍｏｌ／Ｌ或５ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＢａＣｌ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＣｓＣｌ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）均不能抑制该电流;５、内向阳离子电流可与Ｃａ２＋－激活Ｋ＋电流在同一细胞上交替活动,提示这两种电流可能在调控平滑肌细胞的基本活动方面起关键作用。     

小鼠巨噬细胞电压依赖内向整流K~＋通道及GM－CSF的影响

采用膜片钳技术,在细胞贴附方式下确定并分析了昆明白小鼠腹腔巨噬细胞电压依赖的内向整流型Ｋ＋通道（Ｋｉｒ）及其基本特性。当电极液含１４５ｍｍｏｌ／ＬＫ＋,保持电位Ｖｐ在－３０ｍＶ以上时,该通道电流发放,电导为４３ｐＳ。改变［Ｋ＋］ｏ,通道外延的反转电位Ｅｒｅｖ接近于封接膜片两侧的Ｋ＋平衡电位Ｅｋ,单通道电导正比于［Ｋ＋］ｏ的平方根,但不同［Ｋ＋］ｏ下,激活通道所需驱动电位ＶＤ相同。单通道显示电压敏感性,具有长短两个开放状态和两个关闭状态。除膜电位外,［Ｋ＋］ｏ是此型通道的另一个门控因素,且在膜电位超极化增高的情况下,其作用更加显著。以粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子ＧＭ－ＣＳＦ（１６ｎｇ／ｍｌ）预浴细胞４８小时,该通道开放概率Ｏ．Ｐ．显著升高,通道激活所需驱动电位的阈值显著下降,通道活动更加频繁。     

培养乳鼠心肌细胞自发性〔Ca~（2＋）〕_i瞬间变化的实验模型

使用Ｃａ￣（２＋）敏感的荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ,对培养的心肌细胞测定细胞内Ｃａ￣（２＋）的瞬间变化。结果为,在一个心搏周期中,经过大约１８０ｍｓ的时间,［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化达到最大值,然后恢复到基线水平（最小值）,经历了２６０ｍｓ。测得平均［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的最大值及最小值分别为３４６±３８ｎｍｏｌ／Ｌ和１０２±１８ｎｍｏｌ／Ｌ。血管紧张素Ⅱ１００ｎｍｏｌ／Ｌ引起［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化最大值明显增加,但对［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的基线水平没有明显的影响。ｒｙａｎｏｄｉｎｅ３μｍｏｌ／Ｌ使［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的幅度明显降低。ＫＣｌ５０ｍｍｏｌ／Ｌ使［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化完全停止,并明显增加［ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的基线水平。结果提示,本实验模型可用来观察［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的瞬间变化。     

用Fura－2双波长荧光法测定神经细胞内游离钙

采用新型Ｃａ＾２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２建立双波长荧光法测定分离的大鼠神经细胞内游离钙浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）。结果显示,在静息状态下,其［Ｃａ＾２＋］ｉ为１０９±１２ｎｍｏｌ／Ｌ．３０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ可显增加［Ｃａ＾２＋］ｉ,并且ＫＣｌ的这种效应呈一定的剂量依赖关系,提示该法灵敏、可靠。     

体外培养新生大鼠大脑皮层星形神经元钾通道的特性及膜外钾离子浓度对其影响

用膜片钳技术中的细胞贴附方式和内面向外方式,首次在新生大鼠大脑皮层星形神经元胞体膜上记录到一类电压依赖性钾通道。此通道可被２０ｍｍｏｌ／Ｌ ＴＥＡ,５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｂａ＾２＋,１４０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃｓ＾＋阻断,不受２０ｍｍｏｌ／Ｌ４－ＡＰ影响,其激活不依赖Ｃａ＾２＋。膜外钾离子浓度对通道的特性有显著的影响,逆转电位随Ｋ＾＋的增大而增大,并表现出一定的饱和现象,两者的对数呈线性关系;同一驱动电位下,     

兔血管平滑肌延迟整流钾通道研究及其与克隆Kv1.5通道的电生理特性比较

本文用膜片箝全细胞技术比较了研究了单个兔肺动脉血管平滑肌细胞上延迟整流钾通道与克隆Ｋｖ１．５通道的电生理及药理学特性。将平滑肌细胞箝制在－４０ｍＶ,以１０ｍＶ的步跨阶跃去极化（０￣６０ｍＶ）可产生一系列快速上升的外向电流,几无衰减,其激活曲线的Ｖ１／２为２７．２ｍＶ。灌流液中加入１００ｍｍｏｌ／Ｌ和ＴＥＡ １ｍｍｏｌ／Ｌ ４ＡＰ,电流幅度均明显减小,细胞外Ｃａ＾２＋水平由１．５ｍｍｏｌ／Ｌ降至０．     

不同氮营养水平下草莓叶片光合作用对高CO2浓度的适应

研究了不同氮素水平（12mmol／L,4mmol／L,0、4mmol／L）下生长的‘丰香’草莓在富C02（700μL/L）和大气CO（390μL/L）下的光合作用。结果表明,高氮（12mmol／L）下,在富CO2环境中生长的‘丰香’草莓叶片未出现光合作用下调,富CO2下草莓叶片的净光合速率、最大羧化速率（Vc.max）、最大电子传递速率（Jmax）、碳同化的电子传递速率（Jc）和光化学猝灭系数（qp）等均显著提高;而在中氮（4mmol／L）、低氮（0．4mmol／L）下,富CO2下生长的草莓叶片的上述参数均出现不同程度的下降。富CO2下,无论氮素水平如何,草莓叶片的光呼吸电子传递速率（Jo）均降低高氮草莓叶片的非光化学猝灭系数（qN或NPQ）降低,光抑制降低,而低氮则相反。上述结果说明,氮素供应不足时草莓叶片在富CO2下光合作用出现下调,因此生产上进行CO2施肥时应适度增加氮素的供应。     

香蕉不同成熟度果实活性氧、乙烯与淀粉酶活性相关性研究

采用各种活性氧诱发剂(0.5g/L百草枯、10mmol/L H₂O₂和10mmol/L H₂O₂+10mmol/L FeSO₄·7H₂O)及相应的清除剂(20mmol/L没食子酸丙酯、10个单位CAT和70mmol/L DMSO)、外源乙烯(750μl/L乙烯利)、乙烯生成先导物(合成前体,1mmol/L ACC)和乙烯合成抑制剂(10mmol/L AOA)处理香蕉果肉切片。结果表明,在不同成熟度的香蕉果实中,只有O₂^·存在及乙烯合成不受抑制时,淀粉酶活性才能呈现,果实才能软化、成熟;而O₂^·及OH^·可能在乙烯合成中所起的作用有所不同。     

氧化胁迫对Alkalibacterium sp. F26防御酶和辅因子的影响

将一株能够高产过氧化氢酶的低度嗜盐嗜碱茵Alkalibacterium sp.F26作为模式微生物,采用高效液相色谱技术测定胞内代谢物浓度,研究氧化胁迫对其防御酶活性和辅因子的影响.研究结果表明:相比低浓度H2O2(＜1 mmol/L)胁迫,此菌株在高浓度H2O2(＞1 mmol/L)胁迫下的应答表现曼为明显:经3 mmol/L H2O2胁迫后胞内CAT酶活为106.54 U/mg protein,是对照产量的1.76倍;ATP浓度则从对照浓度20.55 μmol/L下降到17.80 μmol/L;NAD 浓度自对照样品的69.89 μmol/L减少至31.77 μmol/L.由于ATP和NAD 浓度的减少,相比未经过H2O2胁迫菌体.细胞能荷值EC从0.77降低至0.68,NADH/NAD 则从0.08增加至0.41.然而,这种应答机制在细胞受到低浓度H2O2的胁迫后并不明显:除发现100 μmol/L H2O2能够导致细胞防御机制的激活而使胞内ATP浓度相比对照有所增加的情况外,经50 μmol/L和500 μmol/L H2O2胁迫后胞内ATP水平从对照的22.69 μmol/L只下降到22.38 μmol/L和13.70 μmol/L;并且此种胁迫条件下NADH浓度变化也不显著.     

活性氧所致超氧化物歧化酶肽链断裂的观察

探究活性氧所致铜锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）肽链断裂的情况。将过氧化氢或抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）分别作用于马来酰亚胺标记的ＳＯＤ,然后用高效液相反相色谱（ＲＰＨＰＬＣ）分析,经１ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ用ＲＰ－ＨＰＬＣ分离出二个肽段,用顺磁共振检测显示只有一个肽段具有马来酰亚胺信号,经５ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ有四个肽段生成,其中有一个肽段具有马来酰亚胺信号,用５ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸和０．０１ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ有三个肽段生成,用５０ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸及１．０ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ也产生相同的三个肽段,只是肽段的量多．结果提示Ｈ２Ｏ２所致ＳＯＤ肽链断裂无“定点”现象,而抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）所致ＳＯＤ肽链断裂呈“定点”断裂。     

氟代柠檬酸对体外培养的神经胶质瘤细胞G422增殖的抑制效应

为研究氟代柠檬酸(Fluorocitrate)对体外培养的神经胶质瘤细胞生长的影响,采用MTT法研究不同的氟代柠檬酸浓度(0.0025mmol/L,0.005mmol/L,0.01 mmol/L,0.025mmol/L和0.1 mmol/L)和作用时间(36h,48h和60h)对神经胶质瘤细胞G422增殖的影响.结果发现:(1)氟代柠檬酸可抑制G422细胞的增殖,并且其抑制作用随氟代柠檬睃浓度的增加而增强;(2)高浓度(0.01 mmol/L,0.025 mmol/L和0.1 mmol/L)氟代柠檬酸对G422细胞的增殖抑制作用随作用时问的延长而增强:(3)低浓度(0.0025mmol/L和0.005mmol/L)氟代柠檬酸对G422细胞的增殖抑制作用不随作用时间的延长而改变.实验表明,氟代柠檬酸能够抑制神经胶质瘤细胞的增殖,其抑制能力随氟代柠檬酸浓度的增加和作用时间的延长而加强.     

乳酸堆积和二氯乙酸钠对肝癌细胞凋亡及bax、bcl-2 表达 和caspase-3 活性的影响

目的：探讨乳酸堆积和二氯乙酸钠(DCA)对肝癌细胞(HepG2)凋亡和bax、bcl-2 表达及caspase-3 活性的影响。方法：通过体 外培养HepG2,建立稳定的体外培养模型,配制成终浓度分别为0 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、4.0 mmol/L、8.0 mmol/L的乳 酸培养液以及在不同浓度乳酸组中加入终浓度为10-3mmol/L DCA 培养液与HepG2共同培养,其中以0 mmol/L 乳酸组为对照 组。采用MTT法检测乳酸对HepG2 的抑制率,流式细胞仪检测乳酸和DCA 对HepG2的凋亡百分率,用Real-time PCR法测定 bax 及bcl-2 mRNA的表达,用免疫荧光法检测caspase-3 的活性。结果：乳酸对HepG2 的IC50值为13.6 mol/L,与对照组比较,随 着乳酸浓度的增加,HepG2 凋亡率增加,bax mRNA 表达升高,bcl-2 mRNA 的表达降低,caspase-3活性增加,其中1.0 mmol/L 乳 酸组与对照组比较(P>0.05),2.0 mmol/L,4.0 mmol/L 和8.0 mmol/L乳酸组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。加入DCA 后,HepG2 凋亡减少,2.0 mmol/L 乳酸+DCA 组、4.0 mmol/L乳酸+DCA 组、8.0 mmol/L乳酸+DCA 组与同浓度的乳酸组比较, bax mRNA 表达减少（P<0.05）,bcl-2 mRNA 表达增加（P<0.05）,caspase-3 活性减低（P<0.05）。结论：乳酸可诱导HepG2凋亡,且随 着乳酸浓度的增高,HepG2 的凋亡率增加,其机制可能是通过对bcl-2 及bax mRNA 表达的改变以及激活caspase-3 活性而实现, DCA可以降低HepG2 凋亡,对乳酸堆积造成的HepG2凋亡有抑制作用。     

微流控芯片电泳分离血清高密度脂蛋白亚类的研究

描述了一种微流控芯片电泳快速分离血清高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)亚类的方法.利用自制的微流控芯片,结合激光诱导荧光检测系统,40mmol/L Tricine、50mmol/L甲基葡胺(MEG)、0.2mmol/LSDS(pH8.5)为样品缓冲液,40mmol/L Tricine、50mmol/LMEG、0.01mmol/L SDS(pH8.5)为分离缓冲液,4min内HDL3和HDL2两种亚类得到基线分离.该法操作过程简单,重复性较佳,测试费用低廉,在临床HDL亚类的检测中具有较好的应用前景.     

低氮胁迫诱导木薯幼苗花青素积累及其基因表达

为明确氮素浓度和形态与木薯花青素产生和积累的关系,基于氮素胁迫能够在拟南芥等植物中促进花青素产生的研究结果,以木薯品种Arg7为研究对象,研究木薯无菌幼苗在添加了(1)40 mmol/L NO₃^-+ 20 mmol/L NH₄⁺,(2)40 mmol/L NO₃^-,(3)20 mmol/L NH₄⁺,(4)0.4 mmol/L NO₃^-+ 0.2 mmol/L NH₄⁺,(5)0.4 mmol/L NO₃^-,(6)0.2 mmol/L NH₄⁺,(7)1 mmol/L(N),(8)5 mmol/L(N),(9)9 mmol/L(N),(10)13 mmol/L(N)10种氮素浓度和形态的MS培养基中生长40 d的农艺性状,以及对花青素合成相...     

东北红豆杉细胞培养生产紫杉醇的调控研究

研究了诱导子、前体及抑制剂的协调作用对东北红平杉生产紫杉醇的影响。结果表明,向培养基中加入80mg/L水到、80mg/L茉莉酸甲酯、0.5mmol/L乙酸钠、2mmol/L苯丙氨酸、0.5mmol/L丝氨酸、0.1mmol/L甘氨酸、10mg/L肉桂酸、0.5mmol/L苯甲酸钠、5mmol/L丙酮酸钠、10mg/L氯化氯胆碱、和1mg/L赤霉酸可使紫杉醇含量提高368.65%。并且证明交互作用对紫杉醇合成有显著作用。     

钙对花生叶片糖代谢有关酶活性的影响

5mmol／Lca2抑制花生叶片果糖-1,6-二磷酸酯酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸磷酸酯酶、丙酮酸激酶和NADP-磷酸甘油醛脱氢酶活性。以含0、5、15mmol/LCa2 的Hoagland营养液培养花生幼苗,在5mmol/LCa2 条件下,果糖-1,6二磷酸酯酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性最高,0、15mmol／LCa2 均使酶活性降低,光合速率亦呈现相同变化趋势。丙酮酸激酶活性在缺Ca2 时最高,与呼吸速率变化相同。15mmol/LCa2 提高了叶绿素含量。