海马脑片缺氧早期腺苷的作用及其机制研究

本实验采用海马脑片细胞外记录技术,观察了缺氧早期突触功能可逆性抑制中腺苷的作用并初步探讨其作用机制。结果发现：海马脑片缺氧早期突触功能出现可逆性抑制,与外源施加高浓度腺苷反应类同。腺苷Ａ１受体拮抗剂ＣＰＴ以及Ｋ＋通道阻断剂４－ＡＰ可阻断这种抑制作用;而ＴＥＡ以及ＡＴＰ敏感Ｋ＋通道阻断剂ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ均未见显著效应。结果提示：缺氧早期突触功能可逆性抑制与内源性腺苷大量释放有关,腺苷通过作用其Ａ１受体,激活４－ＡＰ敏感Ｋ＋通道,从而抑制突触传递,显示其抗缺氧作用。ＡＴＰ敏感性Ｋ＋通道可能不参于这个过程。     

心脏K^＋通道

Ｋ＾＋通道是生物膜上一种调节Ｋ＾＋流的跨膜蛋白质,广泛存在于各种可兴奋的细胞。在维持心脏正常功能方面发挥重要作用。本主要讨论内向整流Ｋ＾＋通道,延迟整流Ｋ＾＋通道,瞬进外向电流Ｋ＾＋通道,毒蕈碱／腺激活Ｋ＾＋通道,ＡＴＰ敏感性Ｋ＾＋通道的基本特性,及其在心脏电生理作用中的重功能,和相关的分子生物学信息。     

腺苷对缺氧时海马神经元内游离Ca^2＋的影响

实验用Ｆｌｕｏ－３负载细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下直接监测缺氧后分散培养的大鼠海马ＣＡ１区神经元内游离Ｃａ＾２＋浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）的变化,观察腺苷对这种变化的影响并初步探讨其作用机制。结果发现,急性缺氧使海马神经元［Ｃａ＾２＋］ｉ显著升高;腺苷（１００μｍｏｌ／Ｌ）明显抑制缺氧引起的［Ｃａ＾２＋］ｉ增高,腺苷Ａ１受体拮抗剂ＣＰＴ以及Ｋ＾＋通道阻断剂４－ＡＰ和ＡＴＰ敏感性Ｋ＾＋通道阻断剂ｇｌ     

牛磺酸调节缺氧性肺、脑血管反应的机理研究

本实验从磷脂酶Ａ＿２（ＰＬＡ＿２）、前列腺素（ＰＧｓ）、白三烯（ＬＴｓ）和过氧化脂质（ＬＰＯ）方面探讨了牛磺酸调节肺、脑血管对急、慢性缺氧反应的机制。急性缺氧时狗出肺与出脑血中ＬＰＯ增加,ＰＬＡ,活性有升高趋势,但出脑与出肺（入脑）血相比无显著性差异。出肺与出脑血中ＬＴＣ＿４、ＴＸＢ＿２、６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１ａ）及ＴＸＢ＿２／６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１ａ）比值均升高。慢性缺氧大鼠肺、脑组织中ＰＬＡ＿２活性均升高。牛磺酸增加缺氧时６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１ａ）,减弱其它变化。提示牛磺酸对缺氧性肺缩血管反应的调节作用可能与降低缺氧时ＰＬＡ＿２活性,抑制脂质过氧化和ＬＴＣ＿４、ＴＸＡ＿２生成,降低ＴＸＡ＿２／ＰＧＩ＿２比值有关;而牛磺酸减弱缺氧性脑舒血管反应不是直接通过上述变化起作用的。     

低氧性脑血管扩张机制研究的概况

低氧可以通过多种机制影响脑血管的张力,改变脑血流量,进而影响脑功能。低氧性脑血管舒张机制是近年研究热点之一。本文从ＮＯ、前列环素、ＡＴＰ敏感Ｋ通道、ＡＴＰ、兴奋性氨基酸、Ｃａ＾＋＋等诸多方面论述了低氧性脑血管舒张可能的作用机制,并就有待解决的若干问题与读者进行讨论。     

离子通道在肺动脉的分布及在低氧肺血管收缩反应中的作用

低氧性肺血管收缩反应（HPV）是指在急性低氧时,肺泡氧分压降到某一临界值,肺血管发生的快速、可逆的收缩反应,以纠正肺泡通气／灌流的不匹配。HPV的发生与肺动脉平滑肌细胞上K^＋、Ca^2＋、Cl^-通道的状态密切相关,而这些通道在不同部位的肺动脉上分布存在差异,因此不同部位的肺动脉在低氧中所表现的收缩反应程度也不同,本综述将对上述通道在肺动脉上的分布特点及其在HPV中的作用做一总结。     

内皮素和ATP敏感性钾通道介导缺氧所致家兔窦房结起搏细胞的电生理效应

用细胞内微电极技术研究了ＡＴＰ－敏感性钾（Ｋ_（ＡＴＰ））通道和内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ,ＥＴ）在缺氧所致窦房结起搏细胞负性频率中的作用,主要结果如下：（１）缺氧引起窦房结起搏细胞的ＲＰＦ降低和ＡＰＤ缩短,这一效应随时间延长而加重。（２）Ｋ_（ＡＴＰ）通道开放剂ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ浓度依赖性地对窦房结起搏细胞有负性频率作用,且明显缩短ＡＰＤ_（５０）。该通道的阻断剂格列苯脲能部分阻断缺氧对起搏细胞的上述效应,表明缺氧效应中有Ｋ_（ＡＴＰ）通道的参与。（３）ＥＴ－１可显著加重缺氧所致的ＲＰＦ降低,使起搏细胞停跳时间前移;而以ＥＴ_Ａ受体阻断剂ＢＱ－１２３预处理窦房结标本后,则能有效地缓解缺氧对起搏细胞的效应,提示内源性ＥＴ－１的释放在缺氧效应中的作用。上述结果表明,缺氧所致起搏细胞的负性频率作用和ＡＰＤ缩短,与Ｋ_（ＡＴＰ）通道的激活和内源性ＥＴ－１的释放有关。     

急性分离的大鼠皮层神经细胞膜去极化激活的优降糖敏感钾单通道电流

本实验利用氰化物阻断细胞呼吸链模拟缺氧模型,采用膜片钳技术的记录方法,对急性分离的大鼠大脑皮层神经细胞膜上ＡＴＰ敏感Ｋ￣＋通道特性进行研究。结果提示：在急性分离的大鼠大脑皮层神经细胞膜丢极化激活时,可记录到一类被优降糖（ＡＴＰ敏感钾通道阻断剂）阻断的钾通道,可能属新型ＡＴＰ敏感Ｋ￣＋通道。     

剪切力诱导微血管内皮细胞K~+通道的开放

利用膜片针及内皮细胞流动小室方法对大鼠脑微血管内皮细胞在剪切力作用下内上细胞壁Ｋ＾＋通道的开放进行了初步研究。结果提示脑微务人皮细胞膜上存在剪切力敏感的Ｔ＾＋通道,剪切方作用后,内皮丰Ｋ＾＋电流明显增大,此电流有明显的短智延迟现象也可以被胞外施抑制,符合ＩＫＶ特征。流动剪切力可以影响内皮细胞膜上的Ｋ＾＋通道的开放引身 离子通透性的增加,进而引起细胞内Ｃａ６２＋的变化,在Ｋ＾＋、Ｃａ＾２＋等离子浓度     

大鼠肺动脉平滑肌培养细胞内Ca~(2+)反应的多样性

用Ｃａ２＋荧光色素Ｆｌｏｕ－３／ＡＭ负荷原代培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,在共聚焦激光显微镜下观察细胞内Ｃａ２＋对各种缩血管物质反应的非均一性。实验结果提示：各种Ｃａ２＋通道的反应与细胞培养时间相关。８０％以上的Ｃａ２＋贮库具有ＣＩＣＲＣａ２＋通道,在肺血管管平滑肌细胞可能存在一种只具有ＣＩＣＲ通道的Ｃａ２＋贮库,ＣＩＣＲ的Ｃａ２＋释放作用强于ＩＣＲＣａ２＋通道     

小鼠巨噬细胞电压依赖内向整流K~＋通道及GM－CSF的影响

采用膜片钳技术,在细胞贴附方式下确定并分析了昆明白小鼠腹腔巨噬细胞电压依赖的内向整流型Ｋ＋通道（Ｋｉｒ）及其基本特性。当电极液含１４５ｍｍｏｌ／ＬＫ＋,保持电位Ｖｐ在－３０ｍＶ以上时,该通道电流发放,电导为４３ｐＳ。改变［Ｋ＋］ｏ,通道外延的反转电位Ｅｒｅｖ接近于封接膜片两侧的Ｋ＋平衡电位Ｅｋ,单通道电导正比于［Ｋ＋］ｏ的平方根,但不同［Ｋ＋］ｏ下,激活通道所需驱动电位ＶＤ相同。单通道显示电压敏感性,具有长短两个开放状态和两个关闭状态。除膜电位外,［Ｋ＋］ｏ是此型通道的另一个门控因素,且在膜电位超极化增高的情况下,其作用更加显著。以粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子ＧＭ－ＣＳＦ（１６ｎｇ／ｍｌ）预浴细胞４８小时,该通道开放概率Ｏ．Ｐ．显著升高,通道激活所需驱动电位的阈值显著下降,通道活动更加频繁。     

细胞外Ba^2＋对内向整流钾通道的阻断作用

实验采用双微电极电压箝（ＴＥＶ）法研究Ｂａ＾２＋对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道（ＩＲＫ１）的阻断作用。细胞外Ｂａ＾２＋浓度分别为０,１,３,１０和１００μｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＾＋浓度分别为１０和９０ｍｍｏｌ／Ｌ,可见快速开通道阻断剂Ｂａ＾２＋对ＩＲＫ１的瞬间电流（施加电压后１ｍｓ）的阻断作用依赖Ｂａ＾２＋、Ｋ＾＋、时间和电压;但对ＩＲＫ１的开关特性几乎无影响,ＩＲＫ１对之不通透。三级指数拟合的结     

大鼠胰腺β细胞离子通道的一些特性

实验以单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺β细胞为对象,用穿孔膜片箝和细胞贴附式记录技术研究ＡＴＰ敏感Ｋ＾＋通道（ＫＡＴＰ）、延迟整流型Ｋ＾＋通道（ＫＤＲ）、Ｃａ＾２＋通道和Ｎａ＾＋通道的有关特性。结果表明：⑴ＫＡＴＰ通道的内流电导约６５ｐＳ,外流电导约３１ｐＳ,反转电位在－６０ｍＶ左右;⑵ＫＤＲ通道在延迟２０ｍｓ后达到最大激活,ＫＤＲ电流约为ＫＡＴＰ的１／３;⑶钙电流在０ｍＶ左右达到４０－６０ｐＡ的峰值,Ｌ     

两类Ca~(2 )通道拮抗剂对脑缺血时Ca~(2 )/CaM PK Ⅱ活性抑制的保护作用

本文以蒙古沙土鼠双颈总动脉结扎（ＢＣＡＯ）前脑缺血模型Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性变化为指标,研究了以氯胺酮（ＫＴ）、右美沙芬（ＤＭ）、苄丙咯（ＢＰ）及硝苯吡啶（ＮＤ）为代表的配体门控Ｃａ２＋通道（ＬＧＣＣ）及电压门控Ｃａ２＋通道（ＶＧＣＣ）两类Ｃａ２＋通道拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用。结果如下：（１）脑缺血后,胞浆型及颗粒型Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性均明显下降;（２）缺血前单独用药,ＫＴ、ＤＭ、ＢＰ及ＮＤ对酶活性均具有剂量依赖性的保护作用;（３）与单独用药相比,联用异类药,ＫＴ＋ＢＰ、ＫＴ＋ＮＤ及ＤＭ＋ＢＰ的保护作用显著增高,而联用同类药,ＢＰ＋ＮＤ及ＫＴ＋ＤＭ的保护作用无明显增高。结果提示：脑缺血中,ＬＧＣＣ及ＶＧＣＣ两类Ｃａ２＋通道均参与了缺血性脑损伤过程;两类Ｃａ２＋通道的单一拮抗对缺血性脑损伤均有保护作用,而联合拮抗效果更佳。     

缺氧时大鼠红细胞变形性损伤的机制研究

本实验通过测定平原和模拟高原减压缺氧３０天大鼠红细胞滤过指数（ＩＦ）、红细胞内［ｐＨ］ｉ、［Ｋ＋］ｉ／［Ｎａ＋］ｉ比值、［Ｃａ２＋］ｉ、［Ｍｇ２＋］ｉ、平均红细胞体积（ＭＣＶ）及平均红细胞血红蛋白浓度（ＭＣＨＣ）,从而探讨缺氧条件下大鼠红细胞变形性损害的机制。结果发现：１．缺氧组大鼠红细胞［Ｃａ２＋］ｉ明显升高,且与ＩＦ呈显著正相关,但［Ｍｇ２＋］ｉ无明显差异;２．缺氧组［Ｋ＋］ｉ／［Ｎａ＋］ｉ值较平原组明显降低,且与ＩＦ呈显著负相关;３．缺氧组ＭＣＨＣ与平原组无明显差异,但ＭＣＶ显著升高;４．缺氧组红细胞内［ｐＨ］ｉ较平原组明显升高。提示：缺氧时红细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高,［Ｋ＋］ｉ／［Ｎａ＋］ｉ值降低,ＭＣＶ增大以及红细胞［ｐＨ］ｉ值的改变在其变形性损伤中起重要作用。     

一种只有一个跨膜域的离子通道蛋白

ＩｓＫ蛋白只含有一个跨膜域,但具有电压依赖的慢Ｋ＾＋通道活性。突变分析表明,ＩｓＫ蛋白本身就构成了Ｋ＾＋通道,提示存在一类新的电压依赖性通道蛋白。     

海马培养细胞的缺氧损伤及降钙素基因相关肽的保护作用

采用新生大鼠海马细胞进行分离培养,观察缺氧对海马培养细胞的影响以及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的保护作用。结果表明：培养１２ｄ的细胞置于缺氧环境（９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）中４─２４ｈ后,随着缺氧时间延长,神经细胞由肿胀、胞膜受损乃至死亡,台盼蓝染色细胞数增多,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和Ｋ＋漏出增加。经ＣＧＲＰ孵育的细胞缺氧后形态变化轻微,细胞死亡率以及ＬＤＨ和Ｋ＋漏出量均明显低于对照组。本结果表明,体外培养的海马神经元对缺氧甚为敏感。缺氧造成海马细胞严重损伤,ＣＧＲＰ对此有明显的保护作用。     

缺氧对大鼠大脑皮层星形胶质细胞Inos Mrna表达的影响

目的：观察缺氧和谷氨酸对星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS)mRNA表达的影响,探讨大脑星形胶质细胞在缺氧性脑血管扩张反应中的作用。方法：取新生Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞原代、传代培养,分为四组：（1）对照组;（2）谷氨酸组;（3）缺氧组;（4）缺氧＋谷氨酸组。每一组包括5个时相点：0h、3h、6h、12h、24h(以缺氧后开始记时）。于（2）和（4）组加入100μmol/Lr L-谷氨酸。（3）和（4）组用95％N2／5％CO2的混合气体缺氧。提取总RNA,用RT－PCR技术检测iNOS mRNA的表达量。结果：对照组和谷氨酸组各时相点未见星形胶质细胞iNOS mRNA表达。缺氧组与缺氧＋谷氨酸组iNOSmRNA于6h开始显著增高,以后更为显著（24h内）。缺氧＋谷氨酸组iNOSmRNA表达的幅度显著高于缺氧组。结论：缺氧及缺氧＋谷氨酸可使iNOSmRNA表达增强,后者催化合成一氧化氮,作用于脑血管平滑肌,可能是缺氧性脑血管扩张的重要机制之一。     

哺乳动物及人精子膜离子通道的研究进展

离子的跨膜转动对精子的生理活动起重要的作用。近年,应用膜片钳及人工膜重组等研究通道有关的电生理技术,人们直接观察到哺乳动物及人精子膜上Ｋ、Ｎａ＾＋、Ｃａ＾２＋、Ｃｌ通道的存在。这些结果为揭示精子成熟、获能精卵结合反应等生理过程的某些细节提供了有有的资料,特别是对人精子膜的研究,还为临床应用提供了可能。     

谷氨酸对大鼠海马CA1区神经元的短暂性外向K+电流的影响

为了在离子通道水平探讨谷氨酸对急性分离海马ＣＡ１区神经元的短暂外向Ｋ＋电流的影响。用７～１０ｄ大鼠,以链霉蛋白酶Ｅ酶解加吸管吹打法制备海马ＣＡ１区神经元;利用全细胞膜片箝技术,观察了谷氨酸对海马ＣＡ１区锥体细胞的短暂性Ｋ＋电流的影响。结果观察到谷氨酸对短暂性Ｋ＋电流有明显抑制作用,且呈明显浓度依赖性、时间依赖性和部分电压依赖性。上述结果表明,谷氨酸对Ｋ＋通道的影响在中枢神经系统中具有重要作用。