时间分辨免疫荧光分析测定人血清铁蛋白

用一种新型非放射性免疫分析——时间分辨荧光免疫分析法测定人血清铁蛋白含量。方法灵敏度达2ng/ml;测量范围5—1500ng/ml;批内、批间变异系数分别为7.1±0.8％和10.0±1.3％(x±SD);回收率为98.4±7.4％。测定值与RIA法测定值比较,相关性良好。     

时间分辨荧光免疫分析技术研究现状及进展

时间分辨荧光免疫分析是一种新型的超微量的免疫标记分析方法,集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身,且无放射性污染等.本文主要介绍了时间分辨荧光免疫分析的原理、优点,螯合剂的种类,以及各种分析技术及其应用现状和进展.     

IgG-Eu-IDPA对抗原IOV的时间分辨荧光免疫检测

镧系螯合物已经被广泛应用于高灵敏度的时间分辨荧光免疫分析.但是,使用紫外光激发镧系螯合物会对生物分子和细胞产生很大的损害.合成了能够被可见光(最大波长565nm)激发的IgG-Eu-IDPA,并测量了IgG-Eu-IDPA的光谱属性,如荧光寿命、在不同pH值和不同浓度环境下的荧光强度.在自制的时间分辨荧光仪上使用IgG-Eu-IDPA作为荧光探针,检测IOV抗原.数据显示,它的灵敏度远远高于传统的荧光仪.结果表明,IgG-Eu-IDPA能够在高灵敏度的原位和活体分析中作为一种新的、有潜力的荧光探针.     

时间分辨荧光免疫分析及其在临床检测中的应用

本文介绍了时间分辨荧光免疫分析法的检测原理、检测方法,分析了时间分辨荧光免疫分析仪的结构并介绍了其在临床检测方面的应用。     

时间分辨荧光免疫分析在兽药残留检测中的应用

近年来,兽药残留引起食物中毒的报道日益增多,兽药残留检测的意义重大。传统的气相色谱法、液相色谱法存在前处理复杂、仪器成本昂贵等缺陷,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)灵敏度也不高,而时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)操作简便、灵敏度高,已在兽药残留检测领域引起重视。介绍了TRFIA的原理和优势,综述了其在促生长繁殖类、瘦肉增产类和杀菌驱虫类兽药残留检测中的应用,并与传统方法进行了对比,TRFIA有望取代传统的检测方法成为兽药残留检测的常规方法。     

时间分辨荧光免疫分析仪的临床实验方法和评价方案

时间分辨荧光免疫分析技术是一种利用稀土离子及其螯合物作为示踪剂的灵敏度高、线性范围宽、应用范围广的非放射性标记免疫分析技术。研制了一种性能稳定的时间分辨荧光免疫分析仪,为了进一步将这一先进超微量物质检验技术推广于临床应用,根据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）制订的临床评价方案,选择放射免疫分析法、化学发光免疫分析法以及Perkin Eimer Life Sciences公司的Auto DFLFIA-1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪作为比较方法,提出了三套检验时间分辨荧光免疫分析仪性能的临床实验方法和评价方案。并利用其中的一套方案进行了实验,结果表明这些方案可操作性强,结果可信,经济适用,可作为同类医疗检验仪器进行临床实验的参考。     

GFP在植物分子生物学研究中的应用

许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白,这种蛋白质结构很特殊,在受到刺激时可以发射绿色或蓝色荧光.虽然对它的研究从20世纪60年代才开始,但是它独特的性质逐渐引起了生物学家的广泛关注.就绿色荧光蛋白的特性及其应用等进行简要综述.     

γ-干扰素时间分辨免疫荧光分析方法的建立

采用生物素-Eu³⁺标记链亲和素双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术(TRIFMA),建立新的γ-干扰素检测技术,提高γ-干扰素检测方法的灵敏度.用固相包被的兔多抗捕获样品中IFN-γ,以具有中和IFN-γ抗病毒活性的生物素化单抗作为二抗体,再加Eu³⁺标记链亲和素并荧光检测.已知不同浓度标准IFN-γ CPS值的标准曲线,判断待检样品中IFN-γ量.本方法最低检测值为0.02 μg/L,检测范围为0.02～400 μg/L,而TNF-α,IL-2和IFN-α等细胞因子无交叉反应.对基因工程IFN-γ的生产,纯化过程中定性, 定量监控以及对培养细胞上清中IFN-γ量的检测等都有实用价值.     

赭曲霉毒素 A 的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA) 技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素 A (OTA) 全自动检测方法 . 将 OTA-BSA 作为免疫分子免疫 Balb/c 小鼠, OTA-KLH 为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析 (ELISA) 法筛选出专一针对 OTA 的高效价的阳性克隆 3G9 ,用杂交瘤细胞制备抗 OTA 单克隆抗体 . 用 OTA-BSA 包被 96 孔板为固相抗原,与游离 OTA 共同竞争有限的抗 OTA 单克隆抗体,以稀土离子 Eu3+ 标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立 OTA-TRFIA. 该方法的灵敏度为 0.03 μg /L ,测量范围为 0.03 ~1 000 μg /L ,批内和批间变异分别为 3.7% 和 5.3% ,平均回收率为 94.2% ,与赭曲霉毒素 B 的平均交叉反应为 3.7% ,与黄曲霉毒素 B1 、 牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好 . 8 条不同时间进行的间接竞争 OTA-TRFIA 的效应点均值 ED80 、 ED50 、 ED20 分别为 (0.33±0.02) μg /L、 (1.44 ±0.08) μg /L 和 (5.22 ± 0.12) μg /L ,说明方法的稳定性好,样品经 TRFIA 和 ELISA 试剂盒同时检测 OTA ,两者的相关系数为 0.925 ,结果相符 . 研究表明, OTA-TRFIA 是目前报道的 OTA 检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景 .     

BAS—时间分辨免疫荧光分析检测丙型肝炎抗体

本文介绍将丙肝抗原包被于微量滴定条孔上,使待测丙肝抗体与生物素化抗人ＩｇＧ产生免疫反应,再与Ｅｕ３＋标记的链亲合素产生亲合反应。将ＢＡＳ引入检测方法中,建立了ＢＡＳ－ＴＲＩＦＭＡ检测抗－ＨＣＶ,提高了检测方法的特异性和敏感性     

时间分辨荧光免疫分析法确定血痕种属

采时时间分辨荧光免疫分析法（ＴＲＦＩＡ）鉴定微量血痕种属。固相和铕标记抗体均采用抗人ＩｇＧ抗体。通过检测可确定血痕是否来源于人体。使用本法检测血清样品的灵敏度达５０万倍稀释度,检测血痕样品达２０万倍稀释度,时间分辨荧光免疫分析法具有无放射性污染,标记物保存期长,特异性好,结果稳定,操作简便等优点,适于法医学的常规检测。     

Alexa Fluor荧光标记在细胞学和分子生物学研究中的应用

Alexa Fluor染料为罗丹明或香豆素的衍生物,是一种含有活性基团的有机荧光染料,具有激发光谱窄、发射光谱宽、量子产率高、光稳定性好,以及受温度、p H影响小等优点。近年来,Alexa Fluor染料作为荧光探针在细胞学和分子生物学研究领域取得了广泛应用,但对Alexa Fluor染料进行系统阐述的文章很少。因此,在综述Alexa Fluor染料的基本特征和优缺点的基础上,阐述其在细胞学和分子生物学研究中的应用,并对其应用和发展方向进行展望。     

固相时间分辨荧光免疫螯合剂 BCPDA 的制备及其标记技术

报道了固相时间分辨荧光免疫螫合剂4,7-二氯磺基苯-1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸(BCPDA)的制备方法,BCPDA 标记蛋白质及螫合 Eu³⁺方法,BCPDA-Eu³⁺标记物荧光光谱研究以及固相时间分辨荧光免疫分析法检测甲胎蛋白异质体(AFP-R-LCA)方法的建立.结果表明 BCPDA 能在温合条件下与蛋白质氨基结合并与 Eu³⁺螯合,BCPDA-Eu³⁺蛋白质标记物荧光特性、标记比度、生物结合活性与国外同类产品一致,所建立的检测 AFP-R-LCA 免疫分析法最小检测值0.6ng/ml,为提高我国非放射性同位素标记技术水平奠定了基础.     

纤维素酶的生物化学和分子生物学研究新进展

纤维素酶的生物化学和分子生物学研究新进展林风（福建省微生物研究所福州３５０００７）１引言纤维素是地球上最丰富的可更新的资源之一,占地球总生物量的４０％,与人类生存有密切的关系。从纤维素酶入手以期达到有效利用天然纤维素目的的研究已有八十多年的历史。近年...     

根瘤菌多样性分析中的几种分子生物学方法

随着生物化学,分子遗传学和分子生物学技术的发展,一些全新的方法应用于根瘤菌分类。这些新的方法把根瘤菌分类提高到研究根瘤菌系统发育和遗传多样性的水平。研究根瘤菌系统发育行之有效的分子生物学技术除DNA／DNA杂交,DNA／rRNA杂交和16srDNA序列分析外［1,2］,近几年又有一些新技术广泛应用于根瘤菌遗传多样性的分析,这里介绍RFLPs,RAPd［3,4］,REP-PC和ErIC-PCR等方法［5.6］。1RFLPs技术RFLPs（RestrictionFragmentLengthPolymorphi－sms）意即限制性片段长度多态性。该方法首先由Grodzicker等用在adenovir…     

FISH技术在贝类分子生物学研究中的应用

在牡蛎和其它的海产贝类中,基因组研究的许多重要领域,如：利用非整倍体在牡蛎种间进行基因转移,三体牡的分离,牡蛎和其它贝类的连锁图的建立,三倍体的基因组稳定性和染色体缺失的分析等在缺少可靠的方法鉴定染色体而受到了限制,传统的带型技术很难鉴定牡的染色体。一种新的生物学技术－荧光原位杂交（FISH）为其提供了新的机遇。通过将DNA序列直接杂交到染色体上,FISH不仅是鉴定染色体的一个有力的工具,也是许多基因组研究如基因定位的一种有效的方法,结合最新研究成果,概述了FISH技术在贝类中的应用背景、现状和展望。     

学习记忆分子生物学机制的最新理论研究综述

遗传学和分子生物等技术的快速发展,直接影响到了基因水平对构成学习记忆分子机制。目前,有关学习记忆的分子生物学研究仍是一个热点话题,从学习记忆的分子生物学分析,长时记忆中突触传递的长时程增强(LTP)和长时抑制(LTD)在学习记忆中个扮演着重要的角色,本文就对这一重要角色在学习记忆分子生物学中的作用进行详细解析。     

艾滋病的分子生物学和防治

艾滋病,即获得性免疫缺损综合症(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)是1981年首先在中美洲发现的一种人类传染病。1984年确定其致病因子是艾滋病毒,又称人类免疫缺损病毒(human immunodeficiency virus, HIV);主要侵害免疫系统。游离HIV存在于患者的脑脊液和血液中,其主要靶细胞为T4淋巴细胞(或称辅助性T细胞)。在HIV复制的第一个高峰中有发热、出疹和流感样症状,神经系统疾病也时有发生;随     

C肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步临床应用

建立钐(Sm3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu3+)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量.将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No.E54094M)与抗insulin单克隆抗体(BiodesignNo.E86306M)混合包被96孔板,然后用Sm3+标记抗C肽单克隆抗体(Medix No.9103),Eu3+标记抗insulin单克隆抗体(Biodesign No.E86802M),运用双抗体夹心一步法建立C肽/胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法.结果显示:C肽分析灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0.5～22μg/L,平均回收率达到99.6%,分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～7.6%.胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L,线性范围为3.6～180 mU/L,平均回收率为99.4%,分析内和分析间变异系数分别为3.7%～6.0%和5.1%～8.0%.C肽/胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样本200份,检测结果高度相关,具有较好的一致性,相关系数分别为0.98与0.99.总之,自建C肽/胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求,有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂,可用于胰岛素分泌不足导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选.