三孢布拉霉发酵生产番茄红素的提取工艺及残留溶剂去除

用超声波皂化法从三孢布拉霉(Blakeslea trispora)发酵菌丝中提取番茄红素,对皂化条件、超声处理时间、提取温度和时间进行优化,得到番茄红素含量大于0.5%的番茄红素油树脂,总提取率达92.9%。提出溶剂提取与SC-CO2去除溶剂的技术路线,使番茄红素粗提物的溶剂残留符合标准。     

三孢布拉霉发酵产番茄红素的研究进展

番茄红素是一种重要的类胡萝卜素,在生物体中具有抗氧化、抗衰老、提高免疫力等生理功能。虽然已经有部分企业实现了番茄红素的工业化生产,但产量仍然是制约三孢布拉霉发酵生产番茄红素的重要因素。在本实验室研究的基础上,本文结合近年来国内外学者的研究成果,从遗传育种、发酵工艺优化、化学调控等方面综述了提高三孢布拉霉中番茄红素产量的研究进展,并展望了未来的研究方向。     

三孢布拉霉生产番茄红素研究进展

番茄红素是一种能够预防某些癌症,心血管疾病等慢性病的重要类胡萝卜素。三孢布拉霉是产生番茄红素的主要微生物之一。对番茄红素的理化性质,三孢布拉霉的生物学特性,高产菌株的选育,培养基及工艺的优化,番茄红素的提取,市场状况及开发前景等进行了综述。     

补料工艺对三孢布拉霉菌合成β-胡萝卜素的影响

微生物发酵法是现在国际上工业化生产天然β-胡萝卜素的主要研究方向,三孢布拉霉菌是其中一种理想的出发菌株。为进一步提高此菌株的合成能力,本文采取了在发酵过程中添加结构类似物的方式,研究了不同时间和不同浓度下补料对最终合成β-胡萝卜素的影响,确定了补料工艺对最终产物合成的促进作用,其中尤在发酵24hr时添加0.01%的巴比妥酸效果最佳。     

菌体形态对发酵法生产番茄红素的影响

菌体形态是影响霉菌代谢的重要因素。主要考察了煤油和不同表面活性剂对三孢布拉氏霉菌菌体形态及番茄红素合成能力的影响。结果表明:当添加煤油和triton-X100形成菌丝球时,该菌丝形态不利于物质的传递,细胞合成番茄红素的能力无明显变化。而当添加水溶性表面活性剂span-20时,形成粗、短分散型的菌丝体,强化了传质,促进了番茄红素的合成,番茄红素生产能力提高了近3倍。     

三孢布拉氏霉生产合成β—胡萝卜素的研究：Ⅰ.三孢布拉氏霉负菌优？…

采用紫外照射、亚硝基胍（ＮＴＧ）和离子束综合诱变处理,获得汪株三孢布拉氏霉菌负菌优良菌株ＳＣＢ２０１。在优化了的培养条件下,它与三孢布拉氏霉菌正菌ＳＣＢ２００接合培养产β－胡萝卜素达到２ｇ／１,较其亲株０．２ｇ／１的水平提高１０倍。     

丝状真菌三孢布拉霉DNA的提取研究

用氯化苄提取丝状真菌三孢布拉霉DNA.用100mMTris*HCl;40mMEDTApH9.0;2%SDS作为提取液,使氯化苄在碱性条件下与三孢布拉霉细胞壁中的多糖成分发生反应,从而达到破坏细胞壁结构,释放DNA的作用.实验得到的DNA污染少,质量高.     

大孔吸附树脂对苦瓜皂甙的吸附研究

试验通过静态吸附对几种树脂进行筛选,结果表明D-101对苦瓜皂甙有较大的吸附率和解吸率,适合用来提取纯化苦瓜皂甙.进一步对D-101进行动态吸附研究,结果表明,浓度为95%的乙醇,3个柱体积可以洗脱几乎所有的苦瓜皂甙.苦瓜皂甙粗提物的上样浓度为2.8～5.6 ms/mL之间.     

大孔吸附树脂吸附链霉菌702抗真菌活性物质工艺

研究大孔吸附树脂吸附链霉菌702抗真菌活性物质的工艺条件。采用5种不同大孔吸附树脂吸附链霉菌702发酵液提取液中抗真菌活性物质,选择吸附效果较佳树脂进行吸附条件优化,以桔青霉为指示菌,纳他霉素为对照抗生素．采用“管碟法”测定抗真菌活性物质含量。结果发现,XAD18树脂吸附效果较好,获得优化吸附条件：上样液pH6,NaCl质量浓度10g/L,上样量22．63mg／g湿树脂,吸附流速2．5mL／min,水洗体积180mL,洗脱流速1．5mL／min,洗脱剂为体积分数10％、50％和90％的甲醇,洗脱方式为梯度洗脱。在确定的工艺条件下XAD18对链霉菌702抗真菌活性物质的吸附率可达90％,洗脱率可达75％,回收率可达80％。     

大孔树脂提取链霉菌4903菌株除草活性物质的研究

化感活性物质的提取方法是研究化感作用的重要步骤,对化感链霉菌4903的前期研究证明其具有抑菌及除草活性。本文选用了4种大孔吸附树脂(X-5, NKA-II, AB-8和HP-20)对化感链霉菌4903发酵液的除草活性物质进行提取。实验结果显示:树脂AB-8对链霉菌4903菌株发酵液除草活性成分具有较好的吸附性能和较易被解吸的特性,树脂AB-8对链霉菌4903菌株发酵液的静态吸附量约可达到树脂体积的7倍。用树脂2-3倍体积的80%乙醇溶液则可以把吸附的除草活性物质全部从树脂中解吸出来。AB-8适合用于链霉菌4903菌株发酵液除草活性物质的提取和纯化。     

皂化法分离测定三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的研究

目的:为研究醇碱皂化法分离三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的最佳工艺。方法:采用正交实验,对醇碱皂化法分离测定三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的各工艺条件进行了研究。结果:皂化时间、醇碱浓度及焦性没食子酸添加量对皂化效果影响显著,而温度(50~90℃)对其影响较小。醇碱皂化法提取三孢布拉氏霉中辅酶Q10的最佳工艺条件为:KOH加入量为湿菌体的1/2(w/w),醇碱浓度为10%,焦性没食子酸量添加量为湿菌体的10%(w/w),在70℃下皂化60min。此提取工艺平均回收率达81.8%,RSD为2.6%。     

卡那霉素抗性基因在三孢布拉霉菌种中的表达

利用一个带有自主复制子,但缺失自身启动子的源于转座子Tn-5的卡那霉素抗性基因的质粒PVB32,在大肠杆菌中克隆丝状真菌三孢布拉霉DNA中有启动子功能的DNA片段;通过原生质体转化,获得了三孢布拉霉对卡那霉素抗性的表达,且抗性表现稳定,可通过孢子无性繁殖稳定遗传下去。     

大孔吸附树脂分离虎杖中白藜芦醇的研究

目的:采用大孔吸附树脂对虎杖粗提物中白藜芦醇进行初步富集、分离和纯化.方法:考察18种树脂对白藜芦醇的吸附量和解吸率,选择吸附量大、解吸率高的数种树脂进行吸附动力学研究,确定最佳的脱附工艺.结论:HPD-500树脂对白藜芦醇的吸附量可达58.67mg/g,解吸率为92.6%,经大孔吸附树脂的吸附与解吸,白藜芦醇的含量由粗提物中9.25%提高至39.5%.     

大孔吸附树脂吸附分离紫草色素的研究

研究了几种大孔吸附树脂对紫草色素的吸附提取。结果表明,NKA-Ⅱ具有较高的吸附量,且易于解吸,适于在新疆紫草细胞大量培养过程中用于对紫草色素的吸附分离。     

初级代谢产物和有性生殖促进剂对番茄红素发酵的影响

考察几种初级代谢中间产物对三孢布拉霉发酵生产番茄红素的影响,以及卵磷脂对三孢布拉霉正负菌接合孢子及发酵的影响。结果表明：发酵24h分别添加2．0％的柠檬酸和2．0％的三孢酸,番茄红素的产量分别达到0．99g／L和1．26g/L,比对照分别提高39．43％和32．63％;卵磷脂的添加能促进三孢布拉霉两性接合孢子的形成,进而促进番茄红素的合成,当大豆卵磷脂的添加量为0．3％时,番茄红素的产量为1．58g/L,比对照提高56．44％。