应用荧光标记多重PCR对原发性胃癌进行微卫星不稳定性检测

为探讨 19号染色体微卫星不稳定性 (microsatelliteinstability ,MSI)在原发性胃癌发生中的作用 ,选择覆盖 19号染色体的 2 6个高分辨 (<5cM)微卫星标记 ,采用FAM、TET和HEX3种不同颜色的荧光染料标记微卫星引物 ,应用荧光标记多重PCR对 44例原发性胃癌及其正常对照组织进行扩增 ,产物在ABI3 77测序仪上经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,通过GeneScanTM及GenotyperTM 软件进行图像收集和MSI分析。同时采用PCR SSLP 银染技术检测了其中4个位点的MSI状态。 2 6个微卫星位点中 ,2 2个 (84 62 % )存在MSI,以D19S40 2MSI发生频率最高 (2 2 73 % ) ,平均MSI频率为 8 3 %。 44例胃癌中 ,3 4例 (77 2 7% )在一个或一个以上位点出现MSI。MSI作为胃粘膜癌变过程中一种可能的分子病理学机制 ,可作为胃癌分子检测的指标之一     

中国人胃癌染色体17q21区域基因遗传不稳定性研究

研究17号染色体上D17S396位点、D17S579及D17S855位点微卫星不稳定性和杂合性缺失,探讨其对胃癌nm23H_1和BRCAl蛋白表达的影响,为胃癌临床治疗及分析预后提供实验依据。石蜡包埋组织中抽提DNA,应用PCR-单链构象多态性(singlestrandconformationpolymorphism,SSCP),常规银染、Envision免疫组织化学及Leica-Qwin计算机图像分析等方法。结果发现,40例胃癌D17S396位点MSI、LOH检出率和nm23H_1蛋白阳性率分别为20.00%、17.50%和55.00%。40例胃癌D17S579位点MSI、LOH检出率和BRCAl蛋白阳性率分别为22.50%、15.00%和37.50%。37例胃癌D17S855位点MSI、LOH检出率和BRCAl蛋白阳性率分别为18.92%、18.92%和37.84%。在肿瘤TNM分期中,上述3个位点MSI检出率在Ⅰ Ⅱ期分别高于Ⅲ Ⅳ期,结果具有统计学意义;而LOH检出率在Ⅲ Ⅳ期分别高于Ⅰ Ⅱ期。随着胃癌TNM分期的升高,MSI检出率呈现降低趋势,而LOH检出率有增加趋势。对于D17S396位点,淋巴结转移组的MSI检出率为5.00%,低于无淋巴结转移的35.00%(P<0.05);在淋巴结转移组,LOH检出率为30.00%,高于无淋巴结转移组(5.00%)(P<0.05)。在D17S579位点,MSI检出率随着胃癌分化程度的降低而呈下降趋势,高、中、低分化组阳性率分别为50.00%、20.00%、0%。TNMⅠ Ⅱ期的nm23H_1蛋白、BRCAl蛋白阳性率明显高于TNMⅢ Ⅳ期,并随着管状腺癌分化程度升高,它们的阳性率呈增高趋势,均具有统计学意义(P<0.05)。在淋巴结转移组,nm23H_1蛋白阳性率为30.00%,低于无淋巴结转移组的80.00%(P<0.01)。nm23H_1蛋白阳性率在MSI阳性组高于MSI阴性组(P<0.05);而在LOH阳性组nm23H_1蛋白阳性率低于LOH阴性组。BRCAl蛋白阳性率在MSI阳性组高于MSI阴性组(P<0.05)。实验结果提示,MSI和LOH通过不同的途径调控散发性胃癌的发生、转移,MSI可作为胃癌的早期分子指标之一。而nm23H_1蛋白可抑制胃癌转移及恶化,BRCAl蛋白能阻止胃癌向低分化发展,并改善患者预后。     

微卫星不稳定性与脊柱裂发生的关联性研究

目的:通过对脊柱裂(spina bifida)胚胎脑组织中微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)的分析,探讨遗传不稳定性是否为此疾病的特征之一,进而研究错配修复系统(mismatch repair,MMR)与脊柱裂发病的分子机制。方法:19例脊柱裂和19例非神经管畸形对照脑组织中提取DNA;尿素变性凝胶电泳法检测标本中MSI发生情况。结果:在19例脊柱裂脑组织中9例MSI阳性,阳性率47.4%。其中2例为高度微卫星不稳定(high frequency microsatellite instability,MSI-H),7例为低度微卫星不稳定(lowfrequency microsatellite instability,MSI-L),其余10例为微卫星稳定(microsatellite stable,MSS),对照组中未出现MSI。选择的5个微卫星位点MSI的阳性率分别为Bat34C4(10.5%)、Bat26(26.5%)、D2S123(10.5%)、D3S1611(5.3%),D2S119(5.3%)。结论:脊柱裂中存在MSI现象,提示MSI、错配修复系统可能与脊柱裂的发生有一定关系。     

DHPLC检测胃癌微卫星不稳定性

为探讨一种快速、简便、可靠的胃癌微卫星不稳定性（MSI）检测方法,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测28例胃癌12个微卫星位点(D1S548、D1S552、D5S346、TP53、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFßRII(GT)3、TGFßRII(A)10、hMSH3(A)8、hMSH6(G)8、BAX(G)8和Bat26）,DHPLC柱温50℃检测Bat26位点。凝胶电泳发现MSI-H 2例（7.14%）,MSI-L胃癌15例（53.6%）,Bat26+2例均为MSI-H,Bat26改变和MSI-H表型一致（P<0.01,Fisher’s确切概率法）。DHPLC亦证实2例Bat26+胃癌,结果和凝胶电泳完全一致。结果表明,DHPLC检测Bat26位点是研究胃癌MSI-H的较好方法,有一定的临床应用价值。Abstact: To establish a fast, simple and solid method of studying microsatellite instability (MSI) in gastric cancer, a panel of 12 microsatellite sites,D1S548, D1S552, D5S346, TP53, IGFIIR(G)8, IGFIIR(CT)5, TGFßRII(GT)3, TGFßRII(A)10, hMSH3(A)8, hMSH6(G)8, BAX(G)8 and Bat26, were detected by denatured polyacrymide gel electrophoresis-silver stain in 28 gastric cancers. Bat26 was also analyzed by denatured high performance liquid chromatograph (DHPLC) at 50℃ in the DNASep Cartridge. Two MSI-H (7.14%) and 15 MSI-L cancers (53.6%) were identified in 28 gastric cancers. Bat26 was positive only in 2 MSI-H cancers. The alterations of Bat26 and MSI-H status were coincident (P<0.01). The two Bat26+ cancers were also confirmed by DHPLC. Results obtained from DHPLC and gel electrophoresis were completely consistent. Thus, DHPLC analysis of Bat26 site may be a favorable method of detecting MSI-H status in gastric cancer, and be of clinical importance.     

原发性肝癌染色体8p、16q 遗传变异的研究

目的:分析人肝癌(HCC)组织中染色体8p、16q部分基因及染色体片段的遗传变异及与临床病理关系,初步筛选HCC相关的抑癌基因。方法:应用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶-银染法分析45例HCC组织标本中染色体8p和16q的杂合性丢失(LOH)及微卫星不稳定性(MSI)。结果:发生LOH的总频率为68.89%(31/45),其中D16S511位点的发生LOH率最高为53.33%(24/45),其次是D8S261(39.02%,16/41)和D8S499(34.88%,15/43)。MSI出现的总频率为11.11%(5/45),出现在三个微卫星位点(D8S261、D8S499及D16S511)上。结论:染色体16q23、8p22-21.3及8p12区域的LOH发生频率高,其可能存在与HCC发生发展相关的新的抑癌基因,特定位点的遗传变异可能与HBV感染、临床病理恶性程度等预后因素相关。     

卵巢子宫内膜异位症恶变过程中PTEN突变及微卫星不稳定的作用

目的:探讨卵巢子宫内膜异位症恶变过程中PTEN突变及微卫星不稳定的作用.方法:选取子宫内膜异位症相关性卵巢癌(endometriosis associated ovarian cancer,EAOC)26例、不典型子宫内膜异位症(atypical endometriosis,aEMs)7例、典型子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)25例,应用PCR结合单链构象多态性(PCR-SSCP)技术及ABI测序系统对各组中PTEN基因第5和第8外显子突变情况检测,应用PCR-SSCP银染方法对5个微卫星监测点Bat25、Bat26、D2S123、D5S346及D17S250的微卫星不稳定(MSI)进行检测分析.结果:EAOC组、aEMs组及EMT组中PTEN的突变率分别为30.76%,14.29%及8%;MSI发生率分别为46.15%.28.67%及0.EAOC组中PTEN基因突变率和MSI发生率均明显高于aEMs和EMT组(P＜0.05),并且EAOC组中PTEN突变率与MSI发生率呈正相关.(r=0.409,P＜0.05).结论:PTEN突变及MSI可能参与了子宫内膜异位症的恶变过程.     

微卫星不稳定性与脊柱裂发生的关联性研究

目的：通过对脊柱裂（spina bifida）胚胎脑组织中微卫星不稳定性（microsatellite instability,MSI）的分析,探讨遗传不稳定性是否为此疾病的特征之一,进而研究错配修复系统（mismatch repair,MMR）与脊柱裂发病的分子机制。方法：19例脊柱裂和19例非神经管畸形对照脑组织中提取DNA;尿素变性凝胶电泳法检测标本中MSI发生情况。结果：在19例脊柱裂脑组织中9例MSI阳性,阳性率47.4%。其中2例为高度微卫星不稳定（high frequency microsatellite instability,MSI-H）,7例为低度微卫星不稳定（lowfrequency microsatellite instability,MSI-L）,其余10例为微卫星稳定（microsatellite stable,MSS）,对照组中未出现MSI。选择的5个微卫星位点MSI的阳性率分别为Bat34C4（10.5%）、Bat26（26.5%）、D2S123（10.5%）、D3S1611（5.3%）,D2S119（5.3%）。结论：脊柱裂中存在MSI现象,提示MSI、错配修复系统可能与脊柱裂的发生有一定关系。     

结直肠腺瘤中的微卫星不稳定性类型

应用微切割 聚合酶链反应 单链长度多态性 (PCR SSLP)的方法 ,检测 1 6个微卫星位点在 5 9例 6 2个结直肠腺瘤标本的微卫星不稳定性状态 .结果表明 :腺瘤 1 6个位点的总微卫星不稳定性(microsatelliteinstability ,MSI)发生率为 1 4 4 % ,MSI H所占的比率为 9 7% ;在 1 0例可以同时微切割得到腺瘤和癌变成分的病例中 ,腺瘤和癌变成分在每个微卫星位点的改变情况不完全相同 ,并且当在某一位点同时表现为阳性时 ,部分凝胶电泳的图像相同 ,而部分不同 ;在某些位点表现为癌变成分的异常条带泳动速度更快 ,说明序列比腺瘤中更短 ;MSI H与病人的年龄、性别、腺瘤发生部位和病理学亚型之间未见统计学差异 ,但MSI H组的平均年龄 (5 6 5 0± 1 1 38)低于MSI L组 (6 0 36±1 1 34) ,女性所占比率 (5 6 )明显高于男性 ,6例MSI H中无 1例组织学类型为管状腺瘤 ;各位点在MSI H组的MSI改变率明显高于MSI L组 ,在TGFβRⅡ (A) 1 0 、hMSH6、TCF4、BAT2 6等位点有明显差异 (P <0 0 5 ,其中BAT2 6的P <0 0 1 ) .可以推断 :在结直肠癌发生发展的早期即腺瘤阶段即可表现微卫星不稳定性 ;微卫星不稳定性可以随结直肠肿瘤的发展过程而发展 ,并且特定的微卫星位点的改变可能仅发生于肿瘤进程的特定阶段 ;在结直肠癌     

银染PCR—SSCP方法检测胃癌微小卫星DNA不稳定性

应用银染PCR-SSCP方法检测30例常规石蜡包埋胃癌组织第2、5、17号染色体4个位点的微小卫星DNA不稳定性(MIN)。结果发现11例阳性病例(36.7％),其中出现4、3、2个及单个位点异常分别为1(3％)、2(6％)、5(16.7％)和3例(10％)。4个位点中,以D5S107发生率最高(33.3％),其次为D2S123(30％)、D17S250(16.7％)、D2S119(12％)。提示MIN是胃癌病变中常见的分子遗传学事件,MIN的出现可能是胃癌发生的又一重要机制。银染PCR-SSCP是一简便、快速、灵敏、有效的检测MIN的方法。     

中国人胃癌KAI1基因表达及遗传不稳定性

采用Envision免疫组织化学,Leica-Qwin计算机图像分析,石蜡包埋组织抽提DNA,PCR-单链构象多态性(SSCP)和常规银染等方法,对56例石蜡包埋胃癌标本及其相应的正常组织,进行KAI1蛋白表达水平的研究和D1S1344、D11S1326位点微卫星不稳定(MSI)、杂合性缺失(LOH)的检测,为揭示KAI1基因作用机制和肿瘤转移机制提供实验依据。实验中,胃癌KAI1蛋白阳性检出率为55.4%(31/56):随着癌组织浸润程度的进展,其阳性率呈降低趋势(P<0.01);在无淋巴结转移的肿瘤组织KAI1蛋白表达率为83.9%,显著高于淋巴结转移肿瘤组织的20.0%;在肿瘤结节转移(tumor node metastasis,TNM)Ⅰ Ⅱ期,KAI1蛋白阳性率为82.8%,明显高于TNMⅢ Ⅳ期的25.9%(P<0.01)。56例胃癌D11S1326、D11S1344位点的SSCP分析中,均未出现MSI或LOH。实验结果提示,KAI1蛋白表达与胃癌组织浸润、淋巴结转移及恶性进展密切相关。在胃癌的发生发展中,KAI1基因未见遗传不稳定性改变。     

原发性肝癌染色体8p、16q遗传变异的研究

目的：分析人肝癌（HCC）组织中染色体8p、16q部分基因及染色体片段的遗传变异及与临床病理关系,初步筛选HCC相关的抑癌基因。方法：应用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶-银染法分析45例HCC组织标本中染色体8p和16q的杂合性丢失（LOH）及微卫星不稳定性（MSI）。结果：发生LOH的总频率为68.89%（31/45）,其中D16S511位点的发生LOH率最高为53.33%（24/45）,其次是D8S261（39.02%,16/41）和D8S499（34.88%,15/43）。MSI出现的总频率为11.11%（5/45）,出现在三个微卫星位点（D8S261、D8S499及D16S511）上。结论：染色体16q23、8p22-21.3及8p12区域的LOH发生频率高,其可能存在与HCC发生发展相关的新的抑癌基因,特定位点的遗传变异可能与HBV感染、临床病理恶性程度等预后因素相关。     

食管鳞癌MLH1基因改变及其与微卫星不稳定的关系

MLH1是位于3p21．3上的一个DNA错配修复基因,其异常与多种肿瘤相关。为探索食管鳞癌中MLH1基因改变及其与微卫星不稳定(MSI)的关联情况,采用微卫星分析和RT—PCR方法检测了14个微卫星标志在食管癌中的状况及MLH1转录水平的表达,发现35％的食管癌出现至少一个微卫星的不稳定,66．7％的肿瘤在MLH1基因内标志D3S1611位点表现为杂合性丢失,但是MLH1没有明显的mRNA表达下调。MSI与食管癌分期、分级、淋巴结转移、患者年龄和性别等参数及MLH1基因杂合性丢失(LOH)之间无统计学意义的相关性。这些结果表明：食管癌中MLH1存在较高频率的等位基因丢失,但其mRNA表达水平并无明显异常;所测微卫星标志的不稳定是食管癌的频发事件,与MLH1基因LOH不存在必然联系。     

非小细胞肺癌6号染色体长臂的杂合性缺失的微卫星扫描分析

为探讨6号染色体长臂上与非小细胞肺癌发生相关的微卫星位点,应用多重PCR对41例非小细胞肺癌中6号染色体长臂上的36个微卫星位点进行扩增。PCR产物应用聚丙烯酰胶凝胶电泳分离,电泳结果用GeneScan^TM、Genotyper^TM软件进行分析。结果发现各个位点有明显不同的LOH频率,除D6S1579在41例非小细胞肺癌中未发现杂合性缺失外,其余35个位点均有至少一个位点发生突变,LOH频率从3.57%到75%不等,总LOH频率为78%（32/41）,其中D6S302位点的LOH频率最高（75%）。LOH频率超过20%的位点共有14个,主要分布在2个区域。其中有6个位点：D6S458（21.43%)、D6S1694（26.92%）、D6S1717（35.71%）、D6S1565（40%）、D6S302（75%）、D6S1706（36.36%）分布在6q21附近,具体区域是6q16.3-q21;有5个位点：D6S1550（38.4%）、D6S264（20%）、DS1585（25%）、D6S446（33.3%）、D6S281（30.77%）分布在6q27附近,具体区域是6q26-q27。因此6q21、q27附近可能存在与非小细胞肺癌发生相关的巳知或未知肿瘤抑制基因。     

黑头酸臭蚁微卫星标记的分离与开发(英文)

【目的】本研究旨在分离黑头酸臭蚁Tapinoma melanocephalum基因组微卫星标记,确定这些微卫星位点的多态性。【方法】使用454 GS-FLX焦磷酸测序技术开发来自中国华南陆地和岛屿的11个黑头酸臭蚁地理种群基因组微卫星位点。从随机设计的100对微卫星引物中筛选出10对引物,用于确定黑头酸臭蚁4个地理种群［东澳岛(DAD)、荷包岛(HBD)、梅州(MZ)和山咀(SJ)］10个微卫星位点的多态性,分析种群遗传多样性和种群分化。【结果】从11个黑头酸臭蚁地理种群基因组中成功开发和分离10对微卫星引物。在DAD, HBD, MZ和SJ 4个地理种群中,10个微卫星位点中7个有高多态性,这10个位点均显著偏离Hardy-Weinberg平衡;每个位点的等位基因数量(A)是3.50~9.00个,每个地理种群每个位点等位基因丰富度(A_R)在1.992~12.938之间。岛屿地理种群(DAD和HBD)的AR和预期杂合度(H_E)与大陆地理种群(MZ和SJ)的相比差异不显著。4个地理种群均显示高水平遗传分化(F_ST=0.15969);HBD和MZ种群与其他配对地理种群相比,遗传分化较高(F_ST=0.185),基因流较低,说明这两个种群基因流被限制。此外,遗传变异来自种群内个体之间。【结论】筛选新的微卫星位点能够为研究黑头酸臭蚁种群结构和繁殖结构提供有效工具,以深入了解其传播机制。     

小鼠39个微卫星的PCR条件及其运用

目的探索小鼠基因组39个微卫星的PCR条件,评价微卫星在小鼠遗传检测中的运用.方法采用梯度法探索39个微卫星的PCR条件;选择本中心不同来源及引种时间的C57BL/6、BALB/c、DBA/2J、CBA/N、FVB/NJ、ICR共6个品系(8个组)小鼠,每组采用10只个体的鼠尾,提取DNA并混合成DNA池,用39个微卫星扩增后电泳观察、比较种系纯度.结果小鼠微卫星的PCR条件差异较大,Mg2+浓度多数在1.5 mmol/L左右,退火温度多数在59℃左右.在6个品系小鼠的39个微卫星位点中,C57BL/6、BALB/c、DBA/2J都是纯合的; 其余品系有1～3个杂合位点. BALB/c在D5Mitl68、D8Mit320、D13Mit262三个位点,DBA/2J在D14Mit205位点与数据库记录有差异.结论本研究为小鼠39个微卫星提供了候选的PCR条件,并对6个品系小鼠的微卫星概貌及微卫星的运用价值进行了探讨.     

东平湖麦穗鱼群体遗传结构的微卫星标记分析

利用微卫星标记技术,采用26对鲤微卫星引物对山东东平湖麦穗鱼进行全基因组扫描.结果表明,有13对引物能获得稳定的特异性条带(占总数的50%),其中有6个微卫星位点具有多态性(占总数的23.1%).6个多态位点共检测到22个等位基因,每个位点的等位基因数从2个到7个不等,大小在80～406bp之间;平均多态信息含量(PIC)为0.5115,平均观测杂合度(H0)为0.6812,平均期望杂合度(HE)为0.5775.研究结果表明,东平湖麦穗鱼群体遗传多样性较丰富,种群结构合理,种质资源处于安全状态.     

中国人结肠癌nm23H1基因遗传不稳定性的研究

采用石蜡包埋组织抽提DNA、PCR-单链构象多态性(SSCP)、常规银染、Envision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析等方法,研究中国人17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性和杂合性缺失,对nm23H_1基因表达的影响,阐明nm23H_1基因遗传不稳定性与结肠癌进展的关系,为临床治疗提供实验依据。实验中,30例结肠癌D17S396位点MSI、LOH检出率和nm23H_1蛋白阳性率分别为26.67%、20.00%和53.33%。在肿瘤TNM分期中,Ⅰ+Ⅱ期的MSI检出率和nm23H_1蛋白阳性率分别为43.75%和81.25%,高于Ⅲ+Ⅳ期的7.14%(MSI,p<0.05)和21.43%(nm23H_1,p<0.01)。而LOH检出率在Ⅲ+Ⅳ期35.71%高于Ⅰ+Ⅱ期6.25%(p<0.05)。随着结肠癌病理Duke’s分期的升高,LOH检出率呈现增加趋势。nm23H_1蛋白阳性率在管状腺癌组为60.00%,明显高于粘液腺癌组的20.00%(p<0.01)。随着管状腺癌分化程度的升高,其阳性率呈增高趋势。此外,nm23H_1蛋白阳性率在MSI阳性组为75%,也高于MSI阴性组的45.45%(p<0.05)。计算机图像定量分析显示,nm23H_1蛋白在各临床病理参数影响下的表达强度没有差异。实验结果提示MSI和LOH通过相互独立的途径调控散发性结肠癌的进展。LOH多发生于散发性结肠癌的晚期阶段并赋予散发性结肠癌细胞高侵袭、低预后的表型。相反,MSI是散发性结肠癌的早期分子标志,提高结肠癌局部nm23H_1蛋白表达量可有效抑制结肠癌转移并改善散发性结肠癌患者预后。     

结直肠腺瘤的微卫星不稳定状态与相关基因表达的研究

应用微切割-聚合酶链反应-单链长度多态性（PCR-SSLP）的方法,检测59例62个结直肠腺瘤,包括散发性腺瘤及家族性腺瘤性息肉病（FAP）腺瘤在BAT26等16个微卫星基因座在结直肠腺瘤标本的微卫星不稳定性（MSI）状态;并应用免疫组织化学SP法检测β-连接素（β-catenin）、TP53、BAX等的表达情况,初步探讨错配修复（MMR）基因在结直肠癌发生的早期即腺瘤阶段的作用及其意义。结果显示：(1)腺瘤16个基因座的总MSI发生率为14.4%;同一病人的不同腺瘤在某些相同的基因座表现出不同的MSI状态;(2)5例FAP病人均表现为MSI-L,其中有3例在hMSH3基因座表现为MSI阳性;(3)β-连接素在腺瘤和腺癌细胞膜阳性率分别为42.9%和11.4%,表达差异有显著统计学意义（P＜0.001）;(4)TP53、D5S346、TCF4(A)9、TGFβRⅡ(GT)3、TGFβRⅡ(A)10等微卫星基因座的MSI改变与相应的免疫组织化学指标TP53、β-连接素、TGFβRⅡ等在腺瘤及腺癌中的阳性表达有密切关系。可以推断：(1)在结直肠癌发生发展的早期即腺瘤阶段即可表现微卫星不稳定性,腺瘤中存在1p染色体的改变、APC基因的改变及TGFβ信号转导途径的异常;(2)随着腺瘤向腺癌的进展,β-连接素的阳性着色由细胞膜转移至细胞内,而且胞浆阳性强度增加;可以推断腺瘤中APC-β-联蛋白-TCF4信号转导途径的异常。 Abstract:In order to understand the role of mismatch repair (MMR) gene in colorectal carcinogenesis,microsatellite instability (MSI) status of 16 microsatellite loci of 62 adenomas from 59 patients,including sporadic and familial adeonmatous polyposis (FAP) adenomas were detected by microdissection-PCR-SSLP,and protein expressions of β -catenin,P53,and BAX,etc.were assayed by immunohistochemistry.Results were as following:(1)The overall MSI alteration rate of the 16 loci was 14.4%.Different adenomas from the same patient showed different microsatellite alterations at the same loci;(2)All of the five FAP patients were MSI-L,three of which showed MSI at the locus of hMSH3;(3)The membrane expression rate of β-catenin in adenomas and accompanied carcinomas was 42.9% and 11.4%,respectively (P＜0.001);⑷Microsatellite alterations of the microsatellite loci of TP53,D5S346,TCF4(A)9,TGFβRⅡ(GT)3 and TGFβRⅡ(A)10 were associated with the changes of their protein expressions.It could be concluded the following:(1)Microsatellite instability existed even in the early stage (adenomas) of colorectal tumorigenesis.The alterations of chromosome 1p,APC genes,and the TGFβ signal transduction pathway could also be deduced;(2)In the progression of adenoma to carcinoma,the staining of β-catenin would be transferred from membrane to cytoplasm and then nucleus,and the cytoplasm stain was stronger in carcinoma than that in adenomas.The abnormality of the signal transduction pathway of APC-β-catenin-TCF4 could be concluded.     

中国人原发性胆囊肿瘤nm23H1基因遗传不稳定性的研究

采用石蜡包埋组织抽提DNA,PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP),常规银染,Envision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析等方法,研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性(microsatelliteinstablility,MSI)和杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH),对胆囊肿瘤nm23H1蛋白表达的影响,阐明nm23H1基因遗传不稳定性与胆囊肿瘤进展的关系,为揭示nm23H1基因与肿瘤发生和转移机理提供实验依据。在本实验中,原发性胆囊癌D17S396位点遗传不稳定发生率为42.55%,明显高于良性胆囊肿瘤的13.04%,而在胆囊炎组织中,未见该位点遗传不稳定的发生;其中,LOH的发生率随组织恶性程度的增高而增加(P<0.05)。在胆囊癌中,LOH和MSI发生率与肿瘤组织分化程度具有显著差异(P<0.05);LOH的发生率,在肝脏浸润和淋巴转移组高于无肝脏浸润和无淋巴转移组,在NevinⅣ Ⅴ期高于Ⅰ Ⅱ Ⅲ期(P<0.01);而MSI发生率则相反。nm23H1蛋白阳性率在胆囊癌、胆囊良性肿瘤和炎症组织中差异显著(P<0.05);在胆囊癌中,淋巴转移组低于无淋巴转移组(P<0.01);NevinⅣ Ⅴ期低于Ⅰ Ⅱ Ⅲ期(P<0.05)。此外,计算机图像定量分析显示,在各临床病理参数影响下,nm23H1蛋白的表达强度没有差异。在胆囊癌中,LOH阳性组中nm23H1蛋白阳性率显著低于LOH阴性组,两者差异显著(P<0.05)。实验结果提示,nm23H1基因的遗传不稳定性可能是胆囊肿瘤发生、发展的一个重要机制。nm23H1基因的MSI和LOH,通过相互独立的途径调控胆囊癌的发生和转移,MSI是胆囊癌早期分子指标,LOH可作为胆囊组织恶变的判断指标,可抑制胆囊癌局部nm23H1蛋白的表达,并赋予胆囊癌高淋巴结转移、低预后的特性。提高胆囊癌局部nm23H1蛋白的表达,可减缓肿瘤的浸润转移并提高预后率。     

内蒙古大兴安岭南麓山区绵羊胰阔盘吸虫及中华双腔吸虫流行病学的调查

本调查研究发现在内蒙古大兴安岭南麓山区中亦普遍存在胰阔盘吸虫(Eurytrema pancreaticum)和中华双腔吸虫(Dicrocoelium chinensis)二病原。调查了共 11地点的羊队,此二吸虫的感染情况如下:浩特饲羊场:胰阔盘吸虫32％(16/50),中华双腔吸虫8％(4/50);扎旗种畜场:40％(6/15)、66.7％(10/15);突泉保石乡羊队:51.4％(19/37)、21.6％(8/37);中旗杜尔基苏木牧场:10％(1/10),30％(3/10);中旗杜尔基西里花牧场:50％(4/8),62.5％(5/8);前旗绿水种畜场:0(0/20),0(0/20);索伦马场公羊群:40％(2/5),60％(3/5);索伦马场三队:43.8％(7/16),25％(4/16);索伦马场二队:80％