miR-21在骨关节炎中作用机制的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种好发于老年人的慢性退行性关节疾病。OA的发病机制复杂,目前尚无有效的治疗手段能够完全逆转OA的病程进展。随着老龄化社会的发展,OA患者逐渐增多,给患者家庭和社会带来的经济压力越来越大。因此,深入阐明OA的发病机制,找到有效的早期分子诊断标志物或潜在的治疗靶点意义重大。miRNA(microRNA)是近几年研究较多的一种非编码RNA。大量研究显示,miR-21在OA软骨降解和关节疼痛的发生中均发挥重要作用。因此,该文通过综述miR-21与OA的相关文献,探究lncRNA、MMPs、GDF-5、FGF和TLR7等分子在miR-21调控OA的过程中可能起到的关键作用,总结miR-21对OA的具体调控机制,以期为OA早期分子诊断标志物和潜在治疗靶点的相关研究提供方向和依据。     

miR-21在皮肤相关疾病及创伤愈合中的作用

microRNA-21(miR-21)是一种内源性非编码RNA,在细胞增殖、分化过程中发挥了重要的调控作用。近年来，miR-21作为广泛研究的miRNA,其在皮肤相关疾病及创伤愈合中的作用备受关注。研究表明，miR-21作为一个“广泛因子”,通过抑制不同靶基因(PTEN、TIMP、PDCD4等)的转录翻译过程，影响不同细胞(角质形成细胞、T细胞、纤维细胞等)的增殖、凋亡、迁移和侵袭。同时，还能通过不同信号通路，促进炎症的发生，在皮肤肿瘤、皮肤免疫性疾病、皮肤炎症性疾病、皮肤创伤及瘢痕组织形成中发挥重要作用。本文回顾了miR-21在不同的皮肤疾病(黑色素瘤、皮肤鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、银屑病、硬皮病等)和创伤愈合中的参与机制，旨在深化对miR-21分子在皮肤相关疾病和创伤愈合中的认识，表明miR-21除了有作为皮肤性疾病诊断的生物标志物潜力和评价药物疗效的能力外，更有望成为一种新型的治疗手段，为临床治疗难题提供新方向。     

黄酮类化合物抗类风湿关节炎作用及机制研究进展

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜病变为主要表现,此类不仅疾病影响关节及周围小关节,还容易引发各种并发症。目前还未发现能完全根治此类疾病的药物,发病机制也尚未清楚。近年来黄酮类成分因其高效、安全的特点受到国内外广泛关注。本文对近年来国内外有关抗RA黄酮类成分来源、发病机理及作用机制研究方面进行综述,旨在为更好研究RA及所引发的并发症提供更好的研究思路,并为脂质组学和代谢组学研究提供科学参考。     

胃癌相关miRNA表达的表观遗传学调控机制

胃癌是人类最常见的肿瘤之一,其发病机制尚不完全清楚.微小RNA(microRNA,miRNA)是一组最近发现的长度为22个核苷酸左右的非编码RNA,具有负性调控基因表达的功能.本文对miRNA在胃癌发生中的作用及其表达调控机制进行综述.不断有文献显示,miRNA在多种肿瘤(包括胃癌)的发生过程中发挥着重要作用.作者和其他研究人员发现,miRNA的表达异常(如:miR-421和miR-21的上调或/和miR-31和miR-218的下调等)与胃癌的发生相关,提示miRNA是胃癌发生的重要因素.目前,miRNA表达的分子机制尚未完全明了.最近研究较清楚地显示,miRNA的表达受到DNA甲基化和组蛋白修饰等机制的调控.这说明,胃癌相关miRNA的表达水平受到表观遗传机制的调控。     

GPCR在类风湿关节炎中的作用机制研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以滑膜炎为特征的自身免疫性疾病,伴有异常免疫反应。G蛋白偶联受体(G protein coupled receptor, GPCR)是人体最大的跨膜受体家族,介导RA的发生发展过程,其相关信号通路在RA炎症和免疫应答过程中发挥重要作用。研究发现,GPCR/AC/cAMP相关通路,如β2-ARs/AC/cAMP、EP2/4/AC/cAMP和CXCR/AC/cAMP等信号通路,以及相关调节蛋白,如GRK和β-arrestins等,可能参与RA的淋巴细胞功能异常、血管生成及关节破坏等病理过程。由此,β2-ARs等受体以及GRK等调节蛋白可能作为RA的潜在治疗靶标。现通过简要阐述GPCR相关通路及其调节蛋白的特点,以期加深对GPCR参与RA调控的认识,为类风湿关节炎药物的开发提供新的思路。     

miR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控胶质瘤细胞的增殖

探讨miR-21对胶质瘤细胞U87中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路相关影响作用研究。脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 inhibitor和miR-21 NC转入U87细胞中,48 h后,RT-PCR检测miR-21表达,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PTEN/PI3K/AKT激活情况及程序性细胞死亡因子4(PDCD4),Bax及Bcl-2的表达。与miR-21 NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达量显著降低,U87细胞活力下降,细胞凋亡率提高,PI3K、Bcl-2及p-AKT表达量下调,PTEN、PDCD4及Bax表达量上调,差异均具有统计学意义(p0.01)。miR-21inhibitor能显著的抑制U87细胞的增殖,与PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。     

缺血性心肌病患者血浆microRNA-21的表达及作用机制研究

目的:探讨缺血性心肌病(ICM)患者血浆microRNA-21(miR-21)的表达及作用机制。方法:选取我院2010年2月-2016年3月收治的54例ICM患者为观察组,选取同期58例健康体检者为对照组,运用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)测定两组血浆miR-21表达水平,比较两组受试者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、左心室射血分数(LVEF)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、N末端B型脑钠肽原(NT-proBNP)的变化,分析血浆miR-21水平与以上各项临床指标的相关性,评估miR-21在ICM诊治中的价值。结果:观察组LDL-C、HDL-C、LVEF水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),血浆miR-21、TG、NT-proBNP及LVEDV水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。经Pearson相关分析显示,观察组血浆miR-21水平与NT-proBNP和LVEDV呈正相关(P0.05),而血浆miR-21水平与LVEF、LDL-C、HDL-C、TG、TC无相关性(P0.05)。结论:ICM患者血浆miR-21表达明显升高,并且其表达与NT-proBNP及LVEDV呈正相关,通过参与ICM患者心室重构发挥作用,可作为ICM诊治的新靶点及风险评估的新生物学标志物。     

类风湿关节炎患者血清血红素加氧酶-1水平与间质性肺疾病的关系

为了研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中血清血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的水平及其与RA继发性间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)之间的关系,探讨RA的发病机制及RA继发ILD的相关因素,我们选择了64例RA患者,其中单纯的RA患者36例,RA并发性ILD患者28例;健康对照者32例。我们利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹法(immunoblotting,IB)检测了各组患者血清中HO-1的含量,同时,通过对各组患者免疫学指标(包括免疫球蛋白IgG,IgA,IgM,α2-球蛋白以及γ球蛋白的差异)、各组临床相关指标(包括C反应蛋白(C-reactive protein,CRP);类风湿因子(rheumatoid factor,RF);晨僵时间,关节肿痛数,抗环胍氨酸蛋白抗体(cyclic peptide containing citrulline,CCP)阳性率、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR))以及疾病活动度评分(disease activity score 28,DAS28)的差异进行了比较和相关性分析,我们发现,总RA组患者血清HO-1含量((6.34±0.71)ng/L)显著性高于健康对照组((0.53±0.17)ng/L)(p0.05),且RA并发性ILD组患者血清HO-1的含量为(9.52±1.14)ng/L显著性高于单纯RA组((3.92±0.24)ng/L)(p0.05),表明HO-1可能参与RA的发病,并且在RA继发ILD的发生发展中发挥一定作用。我们的研究为类风湿关节炎及其继发性间质性肺疾病的发病机制的研究及临床治疗提供了新的理论依据。     

MiR-21靶基因预测和生物信息学分析

为了利用生物信息学方法预测miR-21的靶基因及其功能,为后续研究miR-21及其靶基因在结肠癌发生中的作用机制奠定基础。研究通过miRBase获取并分析多个物种的miR-21的序列特征;应用Target Scan、Pic Tar,miRanda及miRecords 4种在线工具预测miR-21的靶基因,结合已证实的靶基因,对靶基因进行功能注释和信号通路富集分析;通过查找文献,综述miR-21的功能,结合功能注释和信号通路富集分析为进一步研究mir-21在结肠癌发生中的作用提供理论基础。     

circGFRA1靶向miR-642a-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

该研究探讨了circGFRA1对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。收集了39例RA患者的滑膜组织和39例膝关节创伤且无其他关节异常病史患者的滑膜组织(正常滑膜组织),qRT-PCR法检测组织中circGFRA1和miR-642a-5p表达情况。体外分离培养RASFs,分别转染circGFRA1小干扰RNA、miR-642a-5p模拟物,或共转染circGFRA1小干扰RNA与miR-642a-5p抑制剂后,CCK-8法、划痕实验、Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞中Ki-67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证circGFRA1和miR-642a-5p的调控关系。结果显示,RA患者滑膜组织中circGFRA1表达水平较正常滑膜组织显著升高(P<0.05),miR-642a-5p较正常滑膜组织显著降低(P<0.05);下调circGFRA1或上调miR-642a-5p后,RASFs细胞D值、划痕愈合率、侵袭数及细胞中Ki-67、N-cadherin蛋...     

食管癌组织miR-21、miR-182表达与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨食管癌组织微小RNA-21(miR-21)、微小RNA-182(miR-182)表达与临床病理特征及预后的关系。方法:选择2010年10月至2014年2月期间在我院治疗的120例食管癌患者为研究对象,采集患者的食管癌组织及癌旁组织,采用荧光定量PCR检测组织中miR-21、miR-182表达量,采用Kaplan-Meier法分析患者生存情况。结果:与癌旁组织相比,食管癌组织中miR-21、miR-182表达量明显升高(P<0.05)。食管癌组织中miR-21、miR-182表达均与TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。miR-21低表达患者的5年生存率明显高于高表达患者(P<0.05),miR-182低表达患者的5年生存率明显高于高表达患者(P<0.05)。结论:miR-21、miR-182表达量在食管癌中上调,与食管癌TNM分期和淋巴结转移相关。miR-21高表达以及miR-182高表达患者5年生存率下降,检测miR-21、miR-182表达量在食管癌患者预后预测中具有一定临床意义。     

心肌阳离子通道与再灌注性心律失常

通过溶栓和血管成形术可以恢复阻塞动脉的血流,使心肌免于最终坏死,但再灌注常诱发危及生命的心律失常,严重威胁患者的预后和健康。因此,如何有效减少心肌缺血再灌注性心律失常(reperfusion arrhythmia, RA)已成为现阶段科研和临床医生研究的热点。大量研究表明,分布于心肌细胞膜和相关细胞器的一些阳离通道参与了RA的相关病理生理过程:早期研究发现主要有NMDAR、Na⁺、Ca²⁺和K⁺通道参与了RA过程。然而,研究发现,瞬时受体电位(transient receptor potential, TRP)也参与了RA过程,并可能成为RA新的药物干预靶点。因此,明确NMDAR、Na⁺、Ca²⁺和K⁺及TRP等阳离子通道在RA中的病理作用能够更好地了解RA的发病机制,为其未来的临床解释、诊断及治疗提供重要的依据。     

MicroRNA-21 介导非对称性二甲基精氨酸诱导的内皮细胞衰老

目的:观察非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对内皮细胞中microRNA-21(miR-21)表达的影响,探讨microRNA-21在ADMA诱导的内皮细胞衰老中的作用。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与10 uM的ADMA孵育48小时后收集细胞提取总RNA及蛋白,荧光定量实时RT-PCR检测miR-21表达,Western blot检测超氧化物歧化酶2(SOD2)表达,衰老相关半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色鉴定衰老的内皮细胞;然后HUVEC与miR-21抑制剂转染6小时后继续与10 uM的ADMA孵育48小时留取细胞按上述方法检测相关指标。结果:HUVEC与ADMA孵育后miR-21表达量明显增加(P<0.01),同时衰老的内皮细胞数量增多(P<0.05),而SOD2表达减少(P<0.01);MiR-21抑制剂转染HUVEC后ADMA诱导的miR-21表达明显减少,同时衰老的内皮细胞减少,而SOD2表达明显增加(所有P<0.01)。结论:ADMA诱导了HUVEC中miR-21表达及细胞衰老,miR-21介导了ADMA诱导的内皮细胞衰老作用,其机制可能与其抑制SOD2表达有关。     

过表达miR-498通过下调STAT3抑制类风湿性关节炎患者Th17细胞分化

本文旨在探讨微小RNA-498(miR-498)影响类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th17细胞分化的作用机制。从50例RA患者和50例对照人群中分别收集外周血,分离PBMCs。流式细胞术检测CD4~+IL-17~+T(Th17)细胞或者CD4~+FOXP3~+T(Treg)细胞比例,并分析Th17/Treg比值。Real-time PCR检测细胞中miR-498和STAT3基因表达,Western blot检测STAT3的蛋白表达,ELISA检测外周血血清或细胞上清中IL-17的浓度。荧光素酶报告基因实验验证miR-498靶向结合STAT3的3’非翻译(3’untranslated region,3’UTR)。miR-498 mimic或/和pc DNA-STAT3瞬时转染CD4~+T细胞,进一步考察miR-498影响Th17细胞分化的机制。结果显示,RA患者的PBMCs中,Th17细胞比例显著高于对照,且Th17/Treg比值也显著高于对照(P0.05)。miR-498低表达而STAT3高表达于RA患者的PBMCs中,且RA患者血清中的IL-17浓度显著高于对照(P0.05)。在转染野生型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor后,荧光酶活性、STAT3的基因和蛋白表达均明显改变(P0.05),但是在转染突变型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor,上述指标没有显著变化(P0.05)。此外,miR-498 mimic转染CD4~+T细胞后,显著降低Th17细胞比例,且细胞分泌IL-17的水平减少(P0.05),而与pcDNA-STAT3共转CD4~+T细胞后,Th17细胞比例明显提高,细胞分泌IL-17的水平增加(P0.05)。以上结果提示,在RA患者CD4~+T细胞中,过表达miR-498靶向下调STAT3,进而抑制Th17细胞分化。     

miR-21对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响

目的:观察miR-21在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮间质转分化(EMT)中的作用,并探讨miR-21参与调控HK-2细胞EMT的可能靶点。方法:体外培养的HK-2细胞分为6组:正常对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)模型组、miR-21 mimic阴性组、miR-21 mimic组、miR-21 inhibitor阴性组和miR-21 inhibitor组。细胞经4 ng/ml TGF-β1处理建立EMT模型,检测miR-21和EMT相关指标的表达变化,利用基因转染技术,将miR-21 mimic质粒或miR-21 inhibitor质粒转染经TGF-β1处理的HK-2细胞,使细胞过表达或抑制表达miR-21,在此基础上观察细胞EMT相关指标的变化以及磷酸酯酶(PTEN)基因的影响。结果:(1)与正常组相比,模型组的miR-21含量显著升高(P0.05),上皮表型标志物E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01),间质表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白水平也显著升高(P0.05,P0.01);(2)转染miR-21 mimic后,与miR-21 mimic阴性对照组相比,miR-21含量显著升高(P0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白水平显著降低(P0.05,P0.01),α-SMA mRNA和蛋白水平显著升高(P0.05,P0.01);转染miR-21 inhibitor后,与miR-21 inhibitor阴性对照组相比,miR-21含量显著降低(P0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白含量显著升高(P0.05,P0.01),α-SMA mRNA、蛋白水平显著降低(P0.05,P0.01)。结论:miR-21在TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT发生中具有重要作用,并且可能通过靶基因PTEN参与EMT相关分子的表达调控。     

miR-203a靶向及其靶基因对乳腺癌淋巴结转移的影响*

目的:探讨miR-203a靶向及其靶基因ATM在乳腺癌组织中的表达及相关性,为乳腺癌的发病机制尤其是淋巴结转移机制提供理论依据。方法:收集30例配对的乳腺癌和癌旁正常组织,对两组标本采用RT-qPCR检测miR-203a及ATM的相对表达量,对miR-203a和ATM进行相关分析,并对其与临床病理特征进行相关分析,比较miR-203a和ATM的表达在淋巴结转移和未转移之间是否有统计学差异。结果:与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-203a的表达显著升高(P＜0.01),ATM的表达显著降低(P＜0.01),二者呈显著负相关(r=-0.847,P＜ 0.01);miR-203a和ATM的表达均与淋巴结是否转移与不同临床分期显著相关(P＜0.05);miR-203a在淋巴结已转移组中的表达显著低于未转移组(P＜0.05),ATM在淋巴结已转移组中的表达显著高于未转移组(P＜0.01)。结论:乳腺癌早期miR-203a过表达抑制其靶基因ATM的表达很可能是一种调节肿瘤细胞增殖、转移和侵袭性的保护机制,到中晚期下调miR-203a上调ATM基因,可能参与淋巴结转移。     

细胞因子与类风湿关节炎的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种慢性、多系统的以关节的炎症损害为主要特点的自身免疫性疾病。其发病过程与多种细胞因子有关,包括TNF-α、IL-1、MMPS、IL-6、IL-17、IL-18等,这些细胞因子在RA的发病进程中起了很重要的作用,可作为治疗RA的新靶点。     

MicroRNA-21靶向调控β-catenin促进骨肉瘤细胞U2OS的增殖与侵袭

目的:研究微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对骨肉瘤细胞U2OS增殖与侵袭的影响及其可能机制。方法:采用Real-time PCR (RT-PCR)检测miR-21在骨肉瘤和临近正常骨组织中的表达差异。通过脂质体转染法将miR-21模拟物(microRNA-21mimics,即mimics组)及microRNA无关序列(microRNA-NC,即NC组)转染入骨肉瘤细胞U2OS,real-time PCR(RT-PCR)检测miR-21和β-catenin m RNA在U2OS细胞中的表达,Western blot检测β-catenin蛋白在U2OS细胞中的表达,并通过双荧光素酶报告基因验证miR-21与β-catenin基因3'-非编码区(3'-untranslated region,3'-UTR)的特异性结合作用。MTT法检测U2OS细胞体外增殖能力;Transwell侵袭模型探查U2OS细胞侵袭潜能。结果:骨肉瘤组织中miR-21水平显著高于正常骨组织(P0.05)。过表达miR-21能够增强细胞增殖与侵袭,上调U2OS细胞β-catenin m RNA和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因结果表明miR-21可与β-catenin基因3'-UTR结合,从而对β-catenin的表达起调控作用。结论:miR-21可能通过调节β-catenin的表达促进骨肉瘤细胞U2OS的增殖与侵袭。     

microRNA-21在大鼠心肌缺氧复氧损伤中的作用及其对细胞自噬的影响

本文应用大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,探讨microRNA-21(miR-21)在大鼠心肌缺氧复氧损伤中的作用及其对细胞自噬的影响.缺氧复氧后,RT-PCR检测发现心肌miR-21表达上调(P0.05),流式细胞术检测表明细胞凋亡增加,RT-PCR及蛋白质印迹(Western blot)检测发现p62显著下调而beclin-1显著上调(P0.05),提示缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和自噬异常.脂质体转染miR-21 mimic后,细胞凋亡显著增加(P0.05),p62显著上调而beclin-1显著下调(P0.05),而转染miR-21抑制剂引起相反结果,提示miR-21在心肌缺氧复氧损伤中具有促进细胞凋亡、抑制细胞自噬的作用.生物信息学预测显示,Rab11a的3′-UTR含有miR-21的结合位点,双荧光素酶基因报告系统及Rab11a过表达实验表明Rab11a是miR-21的靶基因之一.心肌过表达Rab11a能减少缺氧复氧后miR-21介导的细胞凋亡及自噬.由此表明,在大鼠心肌缺氧复氧损伤中,miR-21可能通过负调控Rab11a促进心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞自噬.本研究可能为预防和治疗心肌缺血再灌注损伤提供新策略.     

MiRNA在特发性肺纤维化中的作用

近年来研究发现微RNA（microRNA,miRNA）与机体人部分生理、病理过程均有密切关系,如：组织的发育和分化、组织再生、病毒防御以及细胞增殖与凋亡等。miRNA在特发性肺纤维化（IPF）中的作用也日渐为研究者所重视,在IPF中有些miRNA上调（如miR-155、miR-21）,有些下调（如let-7、miR-29、miR-200）。这一发现为寻找IPF治疗方法提供了一个新的突破口。本文对近年来miRNA在IPF中作用的研究进展进行了综述,并对miRNA-21、let-7d、miRNA-155、miRNA-29以及miRNA-200在肺纤维化中的作用分别进行了阐述,为研究miRNA征IPF中的作用及机制提供一定参考。