鞣酸处理大米草电镜样品的初步观察

1971年,Mizuhira和Futaesaku在研究电镜放射自显影时,发现鞣酸对微管的亚单位结构有良好的固定作用。此后,一些作者在进行生物超微结构的电镜研究时,都曾使用鞣酸处理样品,并对其作用机制进行了探讨。作者们认为鞣酸具有固定、正染、负染和媒染的作用。目前在透射电镜术中制备动物样品时,鞣酸已得到相当广泛的使用,但关于处理植物样品的研究报道极少。植物样品的制备一般比动物样品困难,其细微结构不易     

块染技术在生物样品超微结构三维重构中的应用

该文主要探究生物大分子和各种细胞器的空间位置、相互作用的细节信息,对解析生命过程至关重要。因此,通过体电子显微学技术,实现大尺度生物样品的超微结构的三维重构,对促进细胞生物学、神经生物学等的研究具有重要意义。然而,生物样品本身只能提供微弱的电子反差,电镜成像后样品的细节结构不清晰。染色技术可以有效地增大样品的电子散射差异,提高样品超微结构的电镜图像质量。近年来,已有大量研究使用块染技术实现了大尺度样品的超微结构成像,该文通过概述电镜样品的制备过程、染色方法和染色原理,比较了在块染过程中不同的桥联剂和块染剂的特点,以期为促进块染技术的应用和发展提供有效思路。     

丙型肝炎病毒免疫电镜的初步研究

采用组织匀浆免疫沉淀后负染、免疫组化块染后包埋、原位包埋等免疫电镜技术,研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）。组织匀浆、免疫沉定、负染后在电镜下观察到与ＨＣＶ相关的类病毒颗粒,形态与披膜病毒相似,大小多在５５～６５ｎｍ,圆形,有包膜,边缘略有突起或比较平滑,有胶体金结合在此种颗粒上及其周围。无关单抗阴性对照无类似颗粒及胶体金。免疫酶染电镜下还见到成堆可疑颗粒。此外,ＨＣＶ－Ｅ区抗原染色后原位包埋,尚发现胶体金大多结合于大小５０ｎｍ左右圆形结构的内部,表明Ｅ区单抗针对的特异性抗原位点位于这种结构的内侧。     

支原体膜的结构与功能——Ⅱ、鸡败血症支原体细胞及细胞膜超精细结构

用负染、投影、超薄切片电镜技术研究鸡败血症支原体S_6细胞及细胞膜的超精细结构。结果表明,鸡败血症支原体S_6和其它类型支原体一样,具有多形态特征。细胞直径约为0.6微米。鸡败血症支原体细胞一端有小疱结构,此为其独特形态。用低渗法破碎鸡败血症支原体S_6细胞分离细胞膜,当细胞培养时间为36小时,可获较纯净的膜制品。分离出的膜结构为空囊状,有时在膜囊一端可见小疱状结构。用戊二醛与四氧化锇先后固定膜和四氧化锇单固定法进行比较,发现四氧化锇单固定可获更清楚的三层膜结构。     

电镜样品变形原因分析及预防

电子显微镜被广泛地应用于生物医学界的各个方面,尤其已成为病毒学研究不可缺少的手段。病毒颗粒在电镜下能否呈现出明亮清晰的结构,除与纯化有关外,与承载样品的支持膜的好坏有直接关系。我们在ＨＢｓＡｇ样品的电镜观察中发现：由于承载样品的支持膜制备异常,使得Ｈ...     

蛋白负染方法在蛋白质组学中的应用评价

为评价蛋白质负染方法在蛋白质组学分析中的应用,采用负染和考马斯亮蓝染色两种方法对同一样品的双向电泳胶进行染色,取相对应的8对蛋白点,并进行胶内酶解及MALDI-TOF/TOF分析,比较两种方法与质谱的兼容性。图像分析显示,负染方法展示出的蛋白点更多,但三维峰图不如考染明晰;质谱结果显示,8个负染蛋白点中有7个鉴定结果有效,8个考染蛋白点鉴定结果均有效。因此可以得出以下结论:负染的灵敏度高于考染,与质谱的兼容性良好,适用于建立双向电泳参考图谱的研究;但负染后的胶图不适于进行蛋白点丰度对比分析。     

应用负染色技术电镜观察快速检测植物病毒粒子的研究

应用负染色技术电镜观察,对感染病毒的叶片,进行简便、快速的检测,对供试的几种病毒样本,均获得较为理想的效果。初步认为,此法采用了磷钨酸负染,不但适于线状和杆状病毒粒体的观察,亦对一些球状颗粒的植物病毒有效。采用本文所述的负染色技术,对于某些植物病毒进行快速鉴定和判断植株叶内有无病毒等,其效应还是较好的。     

利用白树脂进行植物电镜制样

电子显微镜的分辨率在实际应用中。一方面取决于电镜本身的分辨率,同时还取决于标本的结构和反差。标本的结构在很大程度上受标本制备技术的影响,标本制备工作是电镜工作中最繁重最艰难的工作,同时又是重要的环节。目前,我们在电镜制样中,多用环氧树脂618,Epon812和Spurr为渗透包埋剂。由于这三种包埋剂粘度较高,并需同其它药剂配合使用,因此,在电镜样品制     

电镜上的生物样品制备技术

电子显微镜为我们提供了很高的分辨本领,使我们能观察到生物样品的超微结构,丰富了人们对微观世界的认识,推动了生物学从细胞水平发展到分子水平。生物超微结构研究的新成就,是跟样品制备技术的不断提高和逐步完善分不开的。但目前已有的样品制备技术还远不能充分利用电镜本身的巨大发展,例如,目前用超薄切片法只能     

应用于电镜生物制样的几项技术

随着电镜技术的不断发展,生物制样方法也日益丰富,虽然透射电镜超薄切片样品制备、扫描电镜常规及“O-D-O”冷冻断裂样品制备等方法已成为规范的手段,并被广为应用,但广大生物工作者对这些规范方法中的个别处理步骤,仍在探索用新的处理技术取代、完善或丰富它们。笔者基于自己工作实践并综合有关文献,对以下几项技术作些介绍。     

用冷冻复型法制备生物样品

冷冻复型法作为电镜的样品制备方法及研究膜结构的手段目前已经有许多单位在开展,但是,操作进程中许多小问题掌握不好都影响成功率。根据我们的经验,认为有如下几个问题:     

脂蛋白电子显微结构研究的优化负染方法

人类心血管等疾病与胆固醇含量的高低有着十分密切的关系．人体内胆固醇主要通过血液中的脂蛋白来调节和运载．因此,新一代调节胆固醇的药物设计迫切地需要揭示脂蛋白分子结构与功能之间的关系．由于脂蛋白分子的成分高度复杂、结构特征灵活、尺寸微小,传统的蛋白质结构标定技术,如X射线衍射、核磁共振谱、质谱和冷冻电子显微镜等手段都面临着巨大的困难．针对这一问题,任罡小组最近提出一种优化的电镜负染制备方法,可以观测到单个脂蛋白分子的空间结构．此方法应用的成功,使得对单个脂蛋白分子的结构研究成为可能．同时也证明该负染色技术作为一种普遍的实验手段,可以用于对蛋白质小分子的结构研究,从而将促进新一代蛋白质分子药物的研发．     

三维电子显微镜方法进展

从生物样品（细胞或大分子）的电镜图象重组其三维结构的方法近年取得了重大进展,这是冷冻电镜样品制备、电镜设备、图象处理和分析方法等几方面进步的综合结果。三维电镜方法的进步和完善,使细胞和学家得以了解在复杂的细胞过程中各种相关细胞器之间的空间关系,而使分子生物学家不仅可以研究那些能够形成二维结晶的样品,并为分析具有重要生物功能但不能形成二维结晶的大分子或分子聚休物的结构提供了一种强大的手段。     

低温电镜技术及其在植物（动物）材料研究中的应用

通过一些实例介绍了高压冷冻,冷冻置换和冷冻超薄切片等低温电镜样品制备技术,并且与传统方法对照,说明低温电镜技术的优越性,其中,发菜（Nostoc flagelliforme)营养细胞的冷冻超薄切片（未经化学固定,脱水）所显示的超微结构更客观地反映了生物样品的自然生理状态。此外,应用高压冷冻和冷冻置换的免疫标记电镜技术,首次对发菜营养细胞中的DNA进行定位,明确了核区的位置及范围。     

艰难梭菌的超微结构观察

本文用扫描、负染、超薄切片等电镜技术对三株国外引进的艰难梭菌参考菌株作了超微结构的观察。在电镜下，艰难梭菌表现为长短不．的粗大杆菌，表面平整，未见鞭毛和菌毛。菌细胞壁两侧平行，有两个电子致密层和中间透明区结构，与细胞膜之间呈典型的双层单位膜。胞质中充满核糖体和散在的核区，并可见到与细胞膜相连的侧中膜小体。此外还观察到典型的芽胞以及存在于细胞壁外的荚膜结构。本实险结果为深入研究艰难梭菌的结构和功能提供了参考资料。     

改良快速骨组织脱钙法在透射电镜样品制备中的应用

目的 探讨改良快速骨组织脱钙法在透射电镜样品制备中的应用效果。方法 使用JYBL-Ⅱ组织脱钙液,加入电镜专用戊二醛固定液,并对渗透压等影响因素进行了有效控制,与传统脱钙法处理电镜样品后进行比较。结果 改良快速骨组织脱钙法使脱钙时间由传统的2～4周缩短至24 h,电镜观察骨组织超微结构完整性更好,结构更清晰。结论 改良快速骨组织脱钙法在透射电镜样品制备中具有较高的应用价值,值得推广。     

关于孢子虫类透射电镜样品包埋方法的改进

国内曾有人以二次包埋法用于补救由于脱水不完全的透射电镜样品的报道1。寄生于鱼类鳃、皮肤、肌肉、肾脏等组织中的孢子虫,有较厚的孢囊,坚固的孢壁和电子致密的结构等,在制备这类透射电镜样品的过程中不易脱干水分,树脂浸透不良是制备电镜样品失败的主要原因。作者在工作中摸索出用两次甚至三次重浸透包埋法,基本解决了孢子虫类样品制备中浸透不良现象,获得了较好的观察效果。       

自然流产胚胎组织解脲脲原体检测分析

初步探讨解脲脲原体（Uu）感染与自然流产的相关性。对82例自然流产,44例人工流产（对照组）的胚胎组织进行Uu的人工分离培养,并对部分组织的超薄切片及培养物负染片置电镜下观察。结果显示,自然流产胚胎组织Uu的检出率为64．6％（53．82）,与对照组相比6．8％（3／44）,具有显著性差异（P＜0．001）;电镜下观察,Uu检出阳性标本中合体滋养细胞和细胞滋养细胞膜表面见大量的Uu颗粒,与阳性培养物经负染后了颗粒相似,而Uu阴性对照标本中未见此颗粒,提示：Uu可引起宫内感染,损伤绒毛膜滋养细胞,是导致自然流产的重要病原体之一。     

国内信息

犬瘟热和犬冠状病毒联合RT PCR检测方法的应用塔里木农垦大学乔军、解放军大学夏咸柱、东北农业大学何宠彬等对此课题进行了研究。他们利用犬瘟热(CDV)和犬冠状病毒(CCV)牧异性引物对同一样品中CDV和CCV的RNA模板进行联合RT PCR扩增,并优化其扩增条件,得到两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。其敏感性试验表明:该联合PCR能检测出104倍稀释的CDV模板(106.6TCID50/0.1mL)。对7份临床发病犬病科检测,其阳性检出率可高于电镜负染检查。这表明此法有高度敏感…     

科学出版社新书

病毒的电子显微学技术张景强著主要介绍研究病毒的各种电子显微学方法以及最新进展和取得的成果,内容包括:病毒样品的超薄切片技术,病毒的分离、纯化和病毒样颗粒的组装,病毒免疫电镜技术,生物材料的高分辨率电子显微技术,冷冻电镜单颗粒技术和冷冻电镜电子断层成像技术等。理论介绍尽量做到浅显易懂,书中示例也取自经典的或者最近几年的科研成果。此外,在绪论中简