海藻糖对香菇多糖代谢及关键酶基因表达的影响

香菇多糖是从香菇中纯化提取出来,具有药用价值的一种高分子葡聚糖。本研究以香菇新808为研究对象,探究不同浓度外源海藻糖处理下的香菇菌丝生长速率、生物量、多糖含量、菌丝胞内外酶的活性及多糖合成关键酶基因表达量的差异。本研究发现在2.5mg/mL浓度海藻糖处理下,香菇菌丝生物量和多糖含量相较于对照组显著提高,菌丝生长速率与对照组间没有显著差异;参与调控菌丝多糖合成的胞外酶(木质素过氧化物酶、漆酶、纤维素酶、锰过氧化物酶和半纤维素酶)及胞内酶(葡萄糖激酶、磷酸葡萄糖变位酶、磷酸葡萄糖异构酶)的活性与对照相比均显著升高;多糖合成关键酶基因LENED＿003770、 LENED＿004424、 LENED＿005589、 LENED＿010922和LENED＿012941的表达量相对于对照组均显著上调,而LENED＿009143基因表达量则明显下调。表明适宜浓度的外源海藻糖能有效提高香菇菌丝多糖合成量,有利于香菇多糖合成积累。     

外源茉莉酸甲酯诱导对香菇多糖代谢及关键酶基因表达的影响

香菇多糖是重要的生物活性成分,其药用价值高,茉莉酸甲酯有助于提高食用菌多糖含量,但关于其对香菇多糖合成的影响尚不清楚。本研究以香菇新808为实验材料,对不同浓度茉莉酸甲酯（MeJA）诱导下香菇菌丝生物量和生长速率、香菇多糖代谢关键酶活性及基因相对表达量、香菇多糖含量进行比较分析。结果表明：10μmol/L的茉莉酸甲酯可显著促进香菇菌丝生长并提高菌丝体生物量,分别是对照的1.14倍、1.2倍;与香菇多糖代谢相关的UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UGPase）、葡萄糖磷酸异构酶（PGI）、α-葡萄糖磷酸变位酶（α-PGM）活性增加,为对照组的1.58、1.13、3.21倍;其基因相对表达量较对照组也显著上调,为对照组的5.73、1.4、1.77倍;香菇多糖合成量显著增加,为对照组1.58倍。10μmol/L的MeJA处理后,香菇多糖代谢关键酶活性及基因相对表达量与多糖含量间存在显著的正相关关系,表明添加适宜浓度的茉莉酸甲酯会影响香菇菌丝的生长及多糖合成。     

硝普钠（SNP）对绿豆下胚轴插条生根的影响

研究了SNP对绿豆下胚轴插条生根的影响.结果表明,SNP促进下胚轴插条生根的最适浓度和最佳时间分别为300μmol*L-1和24 h,最适浓度SNP对6 d龄幼苗下胚轴插条生根促进效果最好,对下胚轴插条的生根促进效应显著大于其余插条.同时就SNP、IBA和NAA对不定根发生的影响进行了比较研究.     

冠状动脉内注射硝普钠对冠状动脉慢血流的影响

目的:观察冠状动脉内注射硝普钠对冠状动脉慢血流(CSF)的影响,为临床治疗CSF提供新方法.方法:将2010年1月至2010年12月,在我院心脏内科住院,伴有胸病症状,经冠脉造影(CAG)诊断为CSF的患者12例,经患者知情同意后,通过冠状动脉造影导管向冠状动脉内注射硝普钠200～400μg后,3～5分钟内观察冠状动脉血流速度的改善情况,对比冠状动脉内注射硝普钠前后冠状动脉血流帧计数,根据CTFC帧计数,评估冠状动脉内注射硝普钠对冠状动脉血流速度的影响.结果:冠状动脉内注射硝普钠200～400μg后患者冠脉血流速度明显改善,冠状动脉血流帧计数较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),治疗改善率达83.3％,且患者治疗过程中无低血压等不良反应发生.结论:冠状动脉注射硝普钠可安全、有效地改善CSF患者冠状动脉慢血流现象.     

硝普钠灌注对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响

目的：探讨外源性一氧化氮（nitricoxide,NO）供体硝普钠（sodiumnitroprusside,SNP）对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响。方法：64只220-300g雄性SD大鼠随机分成3组：A1组（n=8）,仅行剖腹关腹手术;A2组（n=12）：12对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,无SNP干预;A3组（n=16）：16对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,SNP加入灌注液进行供肠灌注。采用前述3。组动物模型再灌注5小时肠造口标本,TUNEL法检测小肠蜡块标本的细胞凋亡情况。结果：与A1组（3．86±4．74％）相比,A2（22．44±10．94％）、A3组（17．12±8．44％）小肠粘膜的细胞凋亡指数均有显著增高（P〈0．05）,A3组较A2组细胞凋亡指数显著降低（P〈0．05）。结论：小肠移植导致小肠粘膜细胞凋亡增加,外源性NO供体SNP灌注能够显著降低植入小肠的细胞凋亡,从而可能减弱粘膜屏障的损伤。     

硝普钠灌注对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性一氧化氮(nitric oxide,NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响。方法:64只220～300g雄性SD大鼠随机分成3组:A1组(n=8),仅行剖腹关腹手术;A2组(n=12):12对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,无SNP干预;A3组(n=16):16对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,SNP加入灌注液进行供肠灌注。采用前述3组动物模型再灌注5小时肠造口标本,TUNEL法检测小肠蜡块标本的细胞凋亡情况。结果:与A1组(3.86±4.74%)相比,A2(22.44±10.94%)、A3组(17.12±8.44%)小肠粘膜的细胞凋亡指数均有显著增高(P<0.05),A3组较A2组细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。结论:小肠移植导致小肠粘膜细胞凋亡增加,外源性NO供体SNP灌注能够显著降低植入小肠的细胞凋亡,从而可能减弱粘膜屏障的损伤。     

外源-氧化氮供体硝普钠对黑麦草幼苗耐碱性的影响

采用营养液砂培方法,研究外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对NaHCO3胁迫下黑麦草幼苗生长、活性氧代谢和渗透溶质积累的影响.结果表明:60 μmol·L-1 SNP能够缓解100 mmol·L-1NaHCO3胁迫对黑麦草幼苗生长的抑制作用,减缓NaHCO3胁迫导致的叶片O2产生速率、H2O2和丙二醛(MDA)含量的增加,提高NaHCO3胁迫下幼苗叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、质膜H+-ATP酶的活性和谷胱甘肽(GSH)、可溶性糖、可溶性蛋白质和脯氨酸的含量及K+/Na+比,降低过氧化氢酶(CAT)活性和抗坏血酸(AsA)含量,对游离氨基酸含量影响不大.上述结果表明,NO可能通过激活抗氧化系统活性、促进渗透溶质积累和改善Na+、K+平衡等缓解碱胁迫对幼苗的伤害,从而提高黑麦草的耐碱性.     

水杨酸和硝普钠对NaCl胁迫下番茄幼苗生长及生理特性的影响

以番茄品种‘秦丰保冠’为试材,采用营养液培养法,研究单独和复配施用外源水杨酸(SA)、一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对100 mmol·L-1 NaCl胁迫下番茄幼苗生长及生理特性的影响.结果显示:SA、SNP、SA+SNP处理均能显著提高盐胁迫下番茄幼苗叶片保护酶(SOD、POD、CAT)活性、脯氨酸和叶绿素含量、幼苗根系活力,并显著降低叶片电解质渗漏率及丙二醛(MDA)含量,有效减轻盐胁迫对幼苗造成的伤害,促进幼苗的生长发育,其中SA+SNP复配处理效果最好.研究表明,外源SA和SNP处理均能通过提高番茄幼苗保护酶活性和脯氨酸含量来有效缓解盐胁迫伤害,且SA+SNP复配处理在提高番茄幼苗耐盐性方面具有协同增效作用.     

一氧化氮释放体硝普钠对水稻根系的影响

实验材料为粳稻（Oryza sativa ssp．japonica）品种‘秀水ll号’、籼稻（O．sativa．ssp．indica）品种‘湘晚籼11号’。     

家兔硝普钠降压反应模型的辨识

本文辨识了家兔对硝普钠降血压反应的控制用数学模型。实验对象是10只雄性家兔,以TP-801单板计算机驱动输液泵精确地产生一定方式和一定注射率的硝普钠输入。对硝普钠的阶跃、PRBS两种输入方式,分别用图解、解析和递推最小二乘方法,根据血压变化,辨识了家兔硝普钠降压反应的传递函数及ARMAX模型。结果表明家兔硝普钠降压反应的传递函数是一阶纯滞后惯性环节:G(S)=-1.02e~(-26.26S)/(1+56.50S),ARMAX模型是:Y-t=a_1y_(t-i)+b_0u_(t_m)+b_1u_(t-m-1)+y_d。模型的线性范围是0-30μg/kg.min。这些模型的参数值与国外对人硝普钠降压反应的辨识结果相一致。     

Effect of cereal brans on Lentinula edodes growth and enzyme activities during cultivation on forestry waste

AIMS: To develop strategies for increasing the growth of Lentinula edodes in eucalyptus residues. To this end, we have examined the effects of cereal brans additions on production of mycelial biomass and enzymes. METHODS AND RESULTS: Three isolates of the mushroom shiitake, L. edodes (Berk. Pegler), were evaluated for enzyme and ergosterol production on eucalyptus residue supplemented with 5, 10, 15 and 20% (w/w) of soya, wheat or rice brans. Nitrogen imput on eucalyptus residues accelerated mycelial growth by supplying the L. edodes with this limiting nutrient. High levels of enzymes activities were produced in eucalyptus residues supplemented by soya bran. Comparison of cellulose and xylanase production with manganese peroxidase (MnP) at 20% soya bran indicated that hydrolytic enzymes, but oxidative enzymes were reduced. CONCLUSIONS: Mycelial growth measurements revealed that eucalyptus residues supplemented with cereal brans supported fast growth of L. edodes, indicating that mycelium extension is related to the bioavailability of nitrogen. The type and concentration of nutrient supplement has a considerable effect both on substrate colonization and on the type of hydrolytic and oxidative enzymes produced. These characteristics may be useful for mushroom growing. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Lentinula edodes is commercially important for edible mushroom production and supplements which enhance growth and enzymes production might also be beneficial for mushroom yields.     

Heterologous expression of the Pleurotus ostreatus MnP3 gene by the laccase gene promoter in Lentinula edodes

Lentinula edodes (shiitake), which have a powerful ligninolytic system, is one of the most important edible mushrooms in Asia. In this study, we introduced the manganese peroxidase (MnP, EC 1.11.1.13) gene from Pleurotus ostreatus driven by L. edodes laccase 1 gene promoter into L. edodes for expression. The resulting transformant expressed the recombinant gene and showed a higher level of MnP activity than that of the wild-type strain.     

Mitochondrial Effects on the Physiological Characteristics of Lentinula edodes

In the mating of filamentous basidiomycetes, dikaryotic mycelia are generated through the reciprocal movement of nuclei to a monokaryotic cytoplasm where a nucleus of compatible mating type resides, resulting in the establishment of two different dikaryotic strains having the same nuclei but different mitochondria. To better understand the role of mitochondria in mushrooms, we created four sets of dikaryotic strains of Lentinula edodes, including B2 × E13 (B2 side) and B2 × E13 (E13 side), B5 × E13 (B5 side) and B5 × E13 (E13 side), E8 × H3 (E8 side) and E8 × H3 (H3 side), and K3 × H3 (K3 side) and K3 × H3 (H3 side). The karyotypes and mitochondrial types of the dikaryotic strains were successfully identified by the A mating type markers and the mitochondrial variable length tandem repeat markers, respectively. Comparative analyses of the dikaryotic strains on the mycelial growth, substrate browning, fruiting characteristics, and mitochondrial gene expression revealed that certain mitochondria are more effective in the mycelial growth and the production of fruiting body, possibly through the activated energy metabolism. Our findings indicate that mitochondria affect the physiology of dikaryotic strains having the same nuclear information and therefore a selection strategy aimed at mitochondrial function is needed in the development of new mushroom strain.     

香菇不同发育阶段子实体多糖的理化性质及体外免疫活性研究

香菇多糖是从香菇菌丝体或子实体中提取纯化得到的高分子葡聚糖,作为香菇主要的生物活性物质,具有提高免疫力、抗病毒、抗氧化和抗真菌等生物活性。本研究对幼菇期、菌褶期、采收期、成熟期和开伞期5个不同发育阶段香菇粗多糖含量、理化性质和体外免疫活性进行比较分析。结果表明,其粗多糖含量、理化性质和体外免疫活性具有明显差异。粗多糖得率呈现先增加后降低的趋势,菌褶期得率最高;粗多糖含量也呈现先增加后降低的趋势,成熟期含量最高;多糖的分子量因发育期不同而有较大差异,发育后期所得粗多糖分子量千万级以上组分的比例增加,分子量百万级和十万级的多糖组分比例降低;不同发育阶段香菇子实体多糖的单糖组成均包含果糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖4种单糖,且都以葡萄糖为主;5个阶段的多糖组分均有较好的体外免疫活性,其中幼菇期粗多糖在浓度500μg/mL时表现出最高的体外免疫活性。本研究探讨了香菇不同发育阶段子实体多糖的理化性质及体外免疫活性,为香菇采收期的确定及香菇多糖的制备与利用提供理论依据。     

香菇菌丝后熟转色的转录组分析

香菇是世界第二大栽培食用菌,其菌丝后熟转色是其特有的栽培过程,并对其产量和品质至关重要。为了进一步了解香菇后熟转色形成的机制,本研究利用Illumina二代高通量测序平台,对初始未转色菌丝(LE118)、光照下转色菌丝(LE313C)、黑暗下未转色菌丝(LE313W)进行转录组测序,以香菇单核体W1-26基因组为参考基因组进行转录组有参分析,共鉴定出2 215个差异表达基因,LE313C比LE118、LE313C比LE313W、LE313W比LE118中分别有1 216、1 507、1 054个基因差异表达。GO富集分析表明,差异表达基因显著富集碳水化合物代谢过程、氧化还原酶活性、水解酶活性、过氧化物酶活性等。KEGG分析发现芳香族化合物的降解在LE313C比LE313W中被显著富集。在LE313C比LE118即香菇菌丝后熟转色发育过程中,筛选出关键差异表达基因包括糖苷酶、疏水蛋白、P450、漆酶、谷氨酸脱氢酶等,表明这些差异基因在香菇菌丝的后熟转色中可能行使重要的生物功能。本研究为进一步研究香菇菌丝后熟及转色形成的机理提供了重要依据。     

复合酶法水解香菇工艺的研究

【目的】高效提取香菇中的功能性成分,进一步开发利用香菇的食用价值。【方法】以香菇为原料,在单因素试验和正交试验的基础上,研究了复合酶法(纤维素酶、木瓜蛋白酶和5-磷酸二酯酶)水解香菇的工艺条件。【结果】第一步为纤维素酶和木瓜蛋白酶共同水解,加酶量分别为0.2%和0.4%,水解温度55°C,水解时间3 h,初始pH 5.5;第二步为5-磷酸二酯酶水解,加酶量为0.2%,水解温度70°C,水解时间2 h,初始pH 7.0。用此法得到的香菇水解液水解度为39.48%,游离氨基酸得率10.25%,5-核苷酸得率0.768%,多糖得率8.67%。【结论】此香菇水解液富含呈鲜味物质和其它营养物质,可进一步深加工为香菇调味品。     

木屑马铃薯培养基促进香菇单核体菌丝体生长的表达谱分析

香菇单核体菌株在传统PDA培养基上生长时具有生长缓慢、容易老化等问题,本研究以1株香菇双核体Y0040以及相对应的2株单核体(Y0040-1和Y0040-3)为研究材料,通过添加不同比例木屑粉的PDA培养基筛选适合香菇单核体生长的配比,结果表明添加木屑能够显著促进单核体菌丝的生长,最适添加比例为2%。将Y0040-1和Y0040-3在PDA和2%木屑PDA上培养后进行转录组表达谱差异分析,结果显示Y0040-1和Y0040-3两个单核菌株在木屑-PDA培养基上生长有1066个共有的差异表达基因,进一步对其注释发现,这些差异基因在细胞结构合成以及碳水化合物代谢等途径上得到富集。同时1066个共有的差异基因中有113个共上调,富集于氧化还原反应,267个共下调主要富集于蛋白质折叠和去折叠等途径。进一步对1066个差异基因进行CAZYmes家族和木质纤维素酶分析,发现有36个家族基因差异表达,包括了4个多铜氧化酶、6个β-葡萄糖苷酶和2个内β-1,4-葡聚糖酶,其中多铜氧化酶基因表达在木屑培养基上都显著上升。木质纤维素降解酶基于氧化还原反应等将木质素降解为菌丝体生长发育所必需的小分子单糖,可...     

香菇Latcripin-8蛋白的表达、纯化及抗肿瘤活性

目的通过生物信息学方法分析Latcripin-8的基因序列、功能域片段,构建重组质粒,表达含Pkinase结构域基因的目的蛋白并研究重组蛋白的抗肿瘤活性。方法从香菇C91-3菌丝体中提取总RNA,经反转录成cDNA文库。高通量测序获得转录组mRNA,经对比获得目的序列后以RACE技术扩增。经Pfam数据库比对可知其具有Pkinase结构域。设计引物,PCR扩增并与原核表达载体pET32a(+)进行连接,转至E.coli Rosetta-gami(DE3)中进行蛋白诱导表达,经纯化、复性后获得目的蛋白并鉴定。CCK8法检测其对人肺腺癌A549细胞、人胃癌SGC-7901细胞、人肝癌HepG2细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率。结果蛋白诱导成功且该蛋白对不同种类的肿瘤细胞抑制效果不同,其中对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制程度最为明显,并表现出时间和浓度依赖性。结论经Latcripin-8基因诱导表达出的蛋白具有抗肿瘤功效,为进一步深入研究抗肿瘤方面的活性提供了初步条件,有助于肿瘤治疗作用的研究。     

利用加权基因共表达网络分析方法挖掘香菇发育不同阶段的关键基因

香菇是世界产量第二大食用菌,栽培历史悠久.在木屑袋料栽培模式下,香菇发育可以分为菌丝生长期(G)、菌丝褐化期(B)、原基形成期(P)以及出菇期(FB)4个阶段.褐化期和原基形成期是香菇从营养生长期到生殖生长两个关键发育阶段,对香菇子实体产量和质量至关重要.本研究以3种不同栽培材料为重复,对香菇发育的前3个阶段进行了转录...