NO和氧自由基在心肌缺血再灌注损伤中的协同作用——心肌缺血再灌注损伤产生的NO自由基的ESR研究

用低温电子自旋共振(ESR)技术检测到了大鼠心肌缺血再灌注过程产生的NO自由基与含铁蛋白结合的ESR信号 并且利用这一技术研究了大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中NO和氧自由基的协同作用.结果发现,在缺血再灌注损伤的心肌中可同时检测到氧自由基和与血红蛋白β-亚基铁结合的NO自由基(β-NO复合物).在正常心肌中检测不到这两个信号,即使在灌注液中加入L-精氨酸也检测不到这两个信号.在缺血再灌注损伤的心肌中就可以检测的这两个信号了,而且随着在灌注液中加入L-精氨酸浓度的增加,这一信号也随之增加.在灌注液中加入NO合成酶抑制剂N~G-硝基精氨酸甲脂(NAME),这两个信号受到抑制.在灌注液中检测标志心肌损伤的乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性发现,在灌注液中加入低浓度的L-精氨酸(1mmol/L以下),对缺血再灌注心肌损伤有一定保护作用,但是,若加入高浓度L-精氨酸,则加重缺血再灌注心肌的损伤.加NAME对缺血再灌注心肌有明显保护作用.在灌注液中加入黄嘌吟/黄嘌吟氧化酶(X/XO)或Fe²⁺/H₂O₂,同时增加缺血再灌注心肌中的NO和氧自由基含量,并加重心肌的损伤.在灌注液中加入超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT),同时减少缺血再灌注心肌中NO和氧自由基的含量,并减轻心肌的损伤.     

一组生物学实验

1.测试不同条件下植物吸水速度的实验按下图装置,用以测量在有光的条件下和黑暗条件下,植物吸收水分速度的不同。 (1)在水中剪下一段植物的枝条,同时也在水中用乳胶管将枝条套在充满水的玻璃管中。在水中操作主要是防止木质部进入空气,妨碍水的运输。注射器中也充满水。这时让毛细玻瑞管也充满水,在A的部位留出一小气泡,将毛细玻瑞管和玻璃管用乳胶管相连接,另一     

心脏晶体停搏液和冷血停搏液不同灌注方法对心肌保护的评价

目的：评估二种心脏停搏液不同灌注方法对心肌保护作用。方法：30例双瓣患者随机分为冷晶体停搏液间断灌注组(n=10),冷血停搏液间断灌注组(n=10),冷血停搏液持续灌注组(n=10),观察血浆心肌肌钙蛋白T(CnT)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK—MB)。结果：体外循环后冷晶体停搏液间断灌注组血浆心肌肌钙蛋白T和肌酸激酶、肌酶激酶同工酶较其他2组明显增高;冷血停搏液间断灌注组和冷血停搏液持续灌注组血浆心肌肌钙蛋白T、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶无明显差异。结论：冷血停搏液的心肌保护优于冷晶体停搏液,冷血停搏液间断灌注与持续灌注没有明显差异。     

1997年全国普通高等学校招生统一考试上海生物学试卷(二)

续１９９８年第３３卷第３期第４３页）４９．在Ａ、Ｂ两玻管内盛有稀葡萄糖液２０ｍｌ。在Ａ管内加入一定数目的某种单细胞真核生物，在Ｂ管内加入数目相同的另一种单细胞真核生物，再向两玻管液体内充入空气后，迅速将玻管密封，放置在光照明亮处。实验员每隔一定时间从...     

于铬化及碳蜡包埋后染神经终足及线粒体

(一)固定:猫、兔以加有20—40毫克亚硝酸钠(Sod nitrite)的0.9%氯化钠液50—100毫升灌注(亚硝酸钠作为血管扩张剂):继以含10%蚁醛之0.9%氯化钠液300—500毫升灌注;取其脊髓,继续以上述10%蚁醛液固定,最少两天;置5—10毫米长的脊髓在室温下入下液浸5天。配法:重铬酸钾5克;氟化铬(chromiumfluaride)2克;蒸馏水100毫升,再入5%重铬酸钾于38—40℃下浸2—4星期,此液应换数次。     

依达拉奉通过JNK对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究依达拉奉(Edaravone)对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法:将54只SD大鼠随机分为3组,包括对照组(control group),缺血再灌注组(I/R group),依达拉奉组(Ed group).灌注液为K-H液,37℃下建立心肌缺血再灌注模型,预灌注15min,缺血30min,再灌注40 min,分别测量①复灌20和40min时心功能指标:心率(HR)、左室收缩压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心室内压最大变化速率(±dp/dtmax),②复灌20和40 min时肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,③复灌40 min时超氧化物歧化酶(SOD)活性和和丙二醛(MDA)浓度,④复灌40min时心肌梗死面积,⑤复灌40min时心肌组织中JNK的磷酸化水平.结果:①依达拉奉组的±dp/dtmax明显回升(P<0.05),同时LVEDP、LVDP等指标也有明显改善(P<0.05);②再灌注40min时,与缺血再灌注组比,依达拉奉明显降低LDH和CK;③依达拉奉能显著降低MDA浓度,同时提高SOD水平(P<0.05);④依达拉奉组心肌梗死面积小于缺血再灌注组(P<0.05);⑤依达拉奉降低缺血心肌组织中磷酸化JNK的水平(P<0.05).结论:依达拉奉可以改善缺血心肌的血流动力学,增加心肌收缩力,减少心肌梗死面积;能发挥清除氧自由基,扭转氧化与抗氧化平衡系统失调的作用;其对离体心肌缺血再灌注的保护作用可能与JNK途径密切相关.     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离血红蛋白的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,借助圆盘电泳仪的简易装置,对正常血红蛋白及异常血红蛋白(Hb)等进行了分析,获得满意效果。一、方法 1.凝胶制备 40％聚丙烯酰胺液(丙烯酰胺38.4克及甲叉双丙烯酰胺1.6克溶于蒸馏水至100毫升)1份,20％两性载体(Ampholine,国产、pH4—10)0.5份,蒸馏水3份,0.25％过硫酸铵液(临用前配制)2份,混匀,立即分装于内径4毫米,长9厘米的玻管中,胶长6厘米,日光灯下聚胶(约2小时),待胶聚合后,加样     

缺血/再灌注小鼠海马组织cAMP和腺苷环化酶mRNA水平的变化

目的:观测缺血/再灌注小鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)和腺苷环化酶(AC)mRNA水平,探讨缺血/再灌注发病的分子生物学机制.方法:通过双侧颈总动脉线结、连续3次缺血-再灌注,制作缺血/再灌注动物模型,并设立假手术组;术后29 d、30 d分别测试学习和记忆成绩;应用放射免疫法检测小鼠海马组织cAMP水平,应用原位杂交技术检测ACmRNA水平.结果:与假手术组比较,模型组学习和记忆成绩均降低(P＜0.05),且海马组织cAMP水平也降低(P＜0.05),海马CA1区AC mRNA阳性神经元面密度明显降低(P＜0.05).结论:海马组织cAMP和AC mRNA水平降低可能参与了缺血/再灌注后学习和记忆障碍的分子生物学发病机制.     

HTK液与冷血停搏液在心脏瓣膜手术中应用对比：倾向得分匹配分析

目的:比较HTK液与冷血停搏液在心脏瓣膜手术中应用效果,为临床心肌保护灌注策略提供依据。方法:采用单中心数据回顾性分析,选取2015年5月-2018年8月在体外循环下(CPB, Cardiopulmonary Bypass)应用灌注停跳液停跳的瓣膜手术患者529例,分为冷停液组(n=326)及HTK液组(n=203),采用倾向得分匹配方法将上述两组资料进行匹配,确定选取73对可匹配病例进行比较。采集的临床结果主要为CPB时间,阻断时间,ICU停留时间(intensive care unit length of stay,ICU LOS)以及血清钠术中术后浓度变化等参数。其次为,术后呼吸机辅助时间,IABP(Intra aortic ballon pump)的使用及新发透析,30天死亡率与术后主要并发症情况。结果:匹配后两组中冷停液组较HTK液组的主动脉平均阻断时间及CPB时间长,差异具有统计学意义(P0.05),HTK液组存在短暂性低血钠血症(P0.05),ICU LOS以及其余各临床结果无显著差异。结论:心脏瓣膜手术中应用HTK液与冷血停搏液临床早期结果一致,可根据手术操作流程及病人经济水平进行合理选择。     

“光合作用需要二氧化碳”实验的改进

用无色透明的塑料袋代替锥形瓶，套在实验用的叶片上并抽出其中的空气：用锥形瓶、分液漏斗和橡胶塞等组装成“去除空气中二氧化碳装置”；在装置内用氢氧化钠与二氧化碳反应的方式去除空气中二氧化碳；经分液漏斗向锥形瓶内注水．并将排出的“空气”注入部分套有叶片的塑料袋中，另一部直接注入空气。     

几个初中生物演示实验的改进

九年义务教育 3年制初中生物教材中 ,有几个实验设计我们认为不够完善 ,在教学过程中也多次遇到学生质疑。为此 ,我们将这几个实验略作改进 ,使之更为严密 ,取得了令人满意的教学效果 ,现介绍如下。1　增补对照实验1 .1　第 1册 (上 )关于“种子呼吸时释放ＣＯ2 ”这一演示实验 ,教材中只设计了萌发种子瓶里的气体能使澄清的石灰水变浑浊这一装置 ,有的学生就提出疑问 :空气中也含有ＣＯ2 ,是不是空气中的ＣＯ2 使石灰水变浑浊的 ?为了消除学生的这一疑虑 ,我们将书上的装置设为甲装置 ,另增设乙装置作为对照 (装置如图所示 )。实验结果出现…     

CT灌注评价高碳酸血症模型下正常大鼠脑组织血流动力学变化

目的探讨CT灌注评价高碳酸血症模型下正常大鼠脑组织血流动力学变化的可行性;研究大鼠CT灌注参数变化率与α-SMA表达之间的相关性。方法 10只雄性SD大鼠,体质量250～300g,在吸入空气和吸入高浓度CO2混合气体(10%CO2和90%空气组成)后15min,分别使用GE16层Light Speed CT扫描仪对大鼠脑尾状核层面进行CT灌注扫描,原始图像经GE ADW4.2工作站Perfusion3.0脑部灌注软件处理后产生灌注曲线及伪彩图像,两次扫描前均测定大鼠的血液CO2分压、pH值等血气分析指标。检查结束后24h内,大鼠取脑固定,在尾状核中心层面切片,进行脑组织HE染色及鼠特异性SMA抗体免疫组化染色。应用SPSS11.5统计学软件进行分析:采用配对t检验,比较正常大鼠右侧尾状核在吸入空气和吸入高浓度CO2混合气体后CT灌注参数脑血容量(CBV)、脑血流量(CBF)、血管表面通透性(PS)和平均透过时间(MTT)的变化有无差异;采用Pearson相关分析分别检测大鼠右侧尾状核的SMA阳性血管染色计数与灌注参数CBV和CBF在CO2分压升高前后的变化率相关性。结果所有大鼠在吸入含10%CO2和90%空气的混合气体15min后,动脉血CO2分压均明显升高(t=9.39,P0.001),血浆pH值降低(t=13.49,P0.001)。正常SD大鼠右侧基底节区CBV、CBF、PS每100g组织分别为(10.28±4.01)mL、(304.95±88.77)mL/min、(0.26±0.37)mL/min,MTT值为(1.48±0.07)s;吸入10%CO2和90%空气的混合气体后右侧基底节区CBV、CBF值明显增加,每100g组织分别为(19.25±8.42)mL(t=4.92,P=0.001)和(507.33±167.94)mL/min(t=6.75,P0.001);吸入混合气体前后CBV、CBF增加百分比分别为(87.14±46.45)%、(65.75±22.05)%;PS及MTT变化不显著(P均0.05)。大鼠脑组织α-SMA阳性染色血管计数为(12.7±3.23)条/高倍视野。Pearson相关分析显示,正常脑组织的CBV和CBF变化率与其α-SMA阳性计数之间呈显著相关(r分别为0.652和0.890,P均0.05)。结论 CT灌注技术在改变血液CO2分压的条件下可以反映脑组织血流动力学变化;大鼠正常脑组织高碳酸血症前后CT灌注参数变化率与成熟血管数量相关。     

激光多普勒对糖尿病小鼠微循环自律运动功能的评估

目的:探讨激光多普勒对糖尿病小鼠微循环自律运动功能的评估价值。方法:20只BALB/c小鼠随机分为糖尿病组(n=10)和对照组(n=10)。连续5天腹腔注射40 mg/kg STZ诱导糖尿病模型;应用Moor LDLS检测糖尿病小鼠皮肤微循环血流灌注水平;应用Moor VMS-LDF检测糖尿病小鼠胰腺微循环血流灌注及微血管自律运动功能。结果:糖尿病小鼠皮肤微循环血流灌注显著降低,皮肤总血流灌注量(P=0.009)、胰腺微血管自律运动频率(P0.001)和振幅(P0.001)均显著低于对照组小鼠。结论:联合应用Moor LDLS激光多普勒扫描成像系统及Moor VMS-LDF激光多普勒血流灌注监测系统可作为糖尿病小鼠微循环功能状态的评估手段。     

褪黑素通过激活SIRT1信号通路发挥抗肺缺血再灌注损伤作用

目的:研究褪黑素(Melatonin,Mel)在肺缺血再灌注损伤中的作用,明确沉默信息调控因子1(Silent information regulator 1,SIRT1)信号通路在这一过程中的关键作用。方法:建立大鼠肺缺血再灌注损伤(IR)模型,实验分为Control、IR、IR+10 mg/Kg Mel、IR+20 mg/Kg Mel、IR+30 mg/Kg Mel五组,通过检测支气管肺泡灌洗液中白细胞数目、蛋白含量和肺组织中丙二醛(MDA)水平、干湿重比等指标明确肺组织损伤程度,Western blot检测SIRT1通路相关分子及凋亡相关蛋白的表达水平,研究其作用机制。结果:与IR组相比,Mel处理显著降低了支气管肺泡灌洗液中白细胞数量、蛋白含量和肺组织MDA含量、干湿重比(P0.05);Mel还显著上调了SIRT1表达,降低了Ac-FOXO1表达(P0.05);此外,Mel显著提高了抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调了凋亡蛋白Bax表达(P0.05)。结论:Mel具有明确的抗肺缺血再灌注损伤的作用,SIRT1信号通路在该过程中可能扮演重要角色。     

简易胶原酶灌流法分离培养大鼠肝细胞

目的:对传统的胶原酶灌流法加以改进,以节约分离肝细胞的实验时间和成本。方法:采用离体法,分3次从肝窦灌注含有肝素钠的D-Hanks液共150mL;用30mL终浓度为0.04%的胶原酶液(Ⅰ∶Ⅳ=1∶4)灌洗2min;去除表皮等结缔组织,过筛、离心洗涤即得肝细胞。结果:平均1g大鼠肝脏能获取7×106～8×106个肝细胞,细胞存活率为96.3%。结论:简易胶原酶灌流法的胶原酶用量是Seglen二步灌注法用量的1/16,是半原位的1/4;灌流时间约5min,是Seglen二步灌注法的1/4;半原位法也通常需要6～7min。此法具有装置简单、试剂消耗量小、操作方便快捷、实验成本低的特点,为需要周期性重复建立大鼠肝细胞模型的实验提供了一种简单快速的分离方法。     

del Nido心脏停搏液在主动脉夹层手术中的心肌保护效果

摘要 目的：探讨del Nido心脏停搏液在主动脉夹层手术中的心肌保护效果。方法：2015年2月到2020年6月选择在本院进行急诊手术的Stanford A型主动脉夹层的150例患者,入院后根据术中采用的心脏停搏液的不同分为两组 del Nido组与对照组各75例,所有患者都实施大血管外科手术,由同一组医师团队完成手术。Del Nido组给予del Nido心脏停博液灌注,对照组给予改良St. Thomas液灌注,记录心肌保护效果。结果：所有患者完成手术,两组的体外循环时间、停循环时间、阻断主动脉时间对比差异无统计学意义(P>0.05),del Nido组的灌注次数、总灌注时间、停博液晶体总量与对照组对比,差异有统计学意义(P<0.05)。Del Nido组的机械通气时间、ICU停留时间、术后住院时间短于对照组(P<0.05)。两组术后1 d的血清 cTnⅠ高于术前(P<0.05),del Nido组低于对照组(P<0.05)。两组术后7 d的院内死亡、心律失常、开胸止血、肾功能不全、肝功能不全等发生率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论：del Nido心脏停搏液在主动脉夹层手术中的能更好地发挥心肌保护效果,且不增加术后并发症的发生,减少灌注次数、总灌注时间,有利于促进患者康复。     

一种用于研究骨骼肌缺血/再灌注损伤的细胞模型

目的:复制L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤的细胞模型.方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为2组:①正常对照组(C组),②缺血/再灌注组(I/R组),观测了培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、Ca2 含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;在光镜下观察细胞的形态学改变.结果:与对照组相比,L-6TG大鼠肌母细胞IR 4h后培养上清中LDH、细胞内XOD、Ca2 含量明显增加,细胞内SOD及线粒体呼吸功能明显降低,细胞严重受损,明显圆缩,并有脱落现象.结论:应用模拟缺血液和再灌液可成功复制L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤的细胞模型.     

鱼“循环系统”教具的制作

制作和组装取长60厘米、宽40厘米纤维板,上面糊一层图画纸,画出鱼的轮廓图,并确定A、B、C、D为玻管通过孔。用虚线表示的为纤维板后面的实验装置,①—⑧号为长颈漏斗安装孔。最后把纤维板安放在木架上。取两根细玻璃管(內径2—3毫米)在酒精灯上分别加热,将一根玻管依次揻成出鳃毛细血管(一部分)、动脉、心室、心房、静脉、体毛细血管(一部分),并通过     

实验室感染的预防(续二)

<正> 五、排气保护橱 这种装置也称为“微生物学安全橱”、“接种罩”或简称为“罩”。在美国则称为“生物学安全橱”。我们不赞成“安全橱”这个词,因为它意味着任何时候都能提供安全工作的条件(错觉)。事实上不可能;如果安装欠妥,维修不善或使用不当,则不可能完全“安全”。使用“排气保护橱”这词较为正确。这表明了它的基本功能:控制并排除在某种实验室驿作过程中释放出的气溶胶和空气传播性传染微粒,以及保护实验室工作人员免于由吸入而可能导致的感染。 这种排气保护橱起不了向工作面输送过滤空气装置的作用;它的设计在于保护无菌操作者(如膜滤空气无菌橱)。而应把它视为无菌操作橱。     

缺血预处理合并低温及晶体停搏液对兔未成熟心肌的保护作用

本文拟探讨缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)合并低温及晶体停搏液对幼兔的离体心脏是否具有心肌保护作用.采用Langendorff离体心脏灌注模型,灌注液为Krebs-Henseleit液(K-H液).取3～4周龄幼兔心脏,在第一部分实验中分为Con、IP1、IP2、IP3组(n=6),分别给予0、1、2、3次IP,其后各组心脏均在20℃低温下停灌2 h,37℃常温下再灌注30 min.在第二部分实验中分为SConI、SCon2、SCon3、SIPl、SIP2、SIP3组(n=8),其中SIPl、SIP2、SIP3组给予2次IP后灌注St.Tho-mas Ⅱ晶体停搏液(CCS)使心脏停搏,然后分别使心脏在32℃、25℃、20℃下停灌30、90和120min,其后各组均在37℃再灌注30 min.SConl,SCon2,SCon3三组则不给予IP,继续灌注20min后灌注CCS使心脏停搏,然后分别在32℃、25℃、20℃下停灌30、90和120 min,其后各组均在37℃再灌注30 min.以Maclab/4 s生理实验系统记录平衡末、缺血前、再灌注后1、3、5、10、20、30 min时心率(HR)、左心室发展压(LVDP)以及左心室内压上升及下降最大速率(±dp/dtmax),测定再灌注末心肌组织中ATP和丙二醛(MDA)的含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性.在20℃低温停灌且停灌期间不给予CCS时,再灌注末IP2组LVDP×HR、+dp/dtmax和-dp/dtmax的恢复率分别为96%±21%、101%±19%和84%±15%,显著高于Con组和IP3组(P＜0.01,P＜0.05);心肌组织的ATP含量亦高于Con组(P＜0.01).在不同低温停灌且停灌期间给予CCS时,再灌注末SIP1、SIP2组的LVDP×HR、+dp/dtmax分别恢复到87%±14%、99%±26%(P＜0.05,vs SConl group)和87%±16%、102%±20%(P＜0.05,vs SCon2 group);心肌组织的ATP含量均分别显著高于SCon1组和SCon2组(P＜0.05),心肌组织MDA含量亦分别低于SCon1组和SCon2组(P＜0.05).上述结果提示,IP对在20℃低温停灌的兔未成熟心脏具有一定的心肌保护作用,2次IP的保护效应优于1次或3次IP.在停灌期间应用CCS,IP的心肌保护作用随停灌期间低温程度的升高而减弱.