甲基绿(Methyl green)及焦宁(Pyronin)与DNA的结合作用

(1)小牛胸腺DNA溶液在100℃保温不同时间以后,测定了粘度的变化,同时观察并比较甲基绿与焦宁对于受热变性前后的DNA的结合能力的差异。(2)根据高分子物质与低分子物质结合作用的一般规律,测定了甲基绿对于天然态DNA及数种热变性DNA的结合数据。(3)论证了甲基绿对DNA的结合能力主要是与DNA分子的双螺旋空间构型的完整性有关。(4)对甲基绿与DNA结合的机制作了初步的讨论。(5)从甲基绿与焦宁对DNA的双重结合作用所得结果表明:两种染料能以不同程度同时与DNA结合,但在此两者之间存在着一定程度的竞争作用,以甲基绿占明显的优势。从所得结果以及两种染料的分子结构的差异可猜测,此两种染料对于DNA分子的空间构型的要求程度不同。     

第二章 核酸的化学(提要)

核酸是生物体内普遍存在的一类生物大分子。根据化学组分,核酸可以分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。所有生物细胞内部含有这两类核酸,但在病毒,要么只含DNA,要么只含RNA,没有既含DNA又含RNA的病毒。类病毒只是游离的小分子RNA。核酸的生物功能是多种多样的,但最主要的是它具有贮存和传递遗传信息的功能。DNA在细胞内主要存在于染色体中,是遗传信息的主要载体,通过半保留复制将全部遗传信息传给子细胞。细胞核和细胞质中都有RNA。RNA至少有三种主要类型:(1)核糖体RNA(rRNA),(2)转移RNA(tRNA),(3)信使RNA(mRNA)。它们在蛋白质生物合成     

Ca^2＋在细胞凋亡中的作用

本文探讨了Ca2＋在细胞凋亡中的作用。许多证据表明细胞内Ca2＋浓度的升高或下降都有可能引起细胞凋亡。Ca2＋通过对一些酶和基因的调控来传递死亡信号。细胞核中的Ca2＋一方面能使染色质DNA舒展开来便于核酸内切酶能靠近活动,另一方面Ca2＋依赖的核酸内切酶参与了将DNA降解为DNA片段的过程,从而使细胞呈现细胞凋亡的特征。     

大鼠肝癌变过程与核RNA互补单一顺序DNA复杂性增加和与核RNA互补中度重复顺序DNA复杂性减少

我们曾用固相核酸分子杂交技术,比较喂二乙基亚硝胺的大鼠肝细胞核RNA和细胞质RNA,观察到与DNA重复顺序互补的细胞核RNA有变化。随后,用预饱和竞争抑制实验证实,与DNA重复顺序互补的正常大鼠肝细胞核RNA多于移植性大鼠肝癌细胞核RNA。以标记的正常大鼠肝DNA单一顺序为探针,其与正常大鼠肝细胞核RNA饱和杂交百分数低于移植性大鼠肝癌细胞核RNA。本文则观察到喂二乙基亚硝胺不同时间的大鼠肝细胞核RNA与正常大鼠肝DNA单一顺序互补杂交百分数逐步增加;而与正常大鼠肝DNA中度重复顺序互补杂交百分数逐步减少。     

杜仲胚乳衰退过程中程序性细胞死亡的研究

杜仲胚乳在衰退过程中显示出了程序性细胞死亡的特征：细胞质出现原位自溶,细胞器呈现不同程度的解体;环状片层吞噬并分隔细胞组分;细胞核形态异常,并出现环状核仁和致密型核仁;DNA解体,电泳显示出拖尾状的条带。胚根端和非胚根端胚乳细胞在进入程序性死亡的时间上有先后。     

基于核酸定量的核质分离质控方案

目的:拟建立一种方便快捷、经济有效的细胞核质分离鉴定方法。方法:本研究从DNA水平进行核质分离鉴定,选择GAPDH、ND1分别作为细胞核和细胞质标志基因,并根据GAPDH及ND1序列保守区设计引物,基于荧光定量PCR方法定性检测核质分离的效果。随后将本鉴定方法应用于其他种类细胞(BEAS-2B细胞、GT1-7细胞)及组织(小鼠心脏、肝脏、大脑)的核质分离鉴定。结果:在293T细胞应用该鉴定方法鉴定核质分离效果,结果显示:GAPDH、ND1在核组、质组中的含量存在明显差异,其中核标志基因GAPDH在细胞核中的比例达到了95%以上,质标志基因ND1在细胞质中的比例也达到了90%左右,这与从RNA水平及蛋白水平鉴定核质分离的结果一致。在其他种类的细胞(BEAS-2B细胞、GT1-7细胞)及组织(小鼠心脏、肝脏、大脑)应用该方法结果显示:细胞核组分中质标志基因ND1含量比293T细胞的有所增加,但仍可以实现核质分离鉴定。结论:本研究所建立的核质分离质控方法可以实现从DNA水平进行核质分离的鉴定,该方法更加经济、快捷。     

利用洋葱鳞叶表皮细胞观察植物细胞结构实验的改进

以洋葱表皮细胞为研究材料,通过中性红液泡染色和质壁分离实验相结合,将能更清晰地观察到细胞壁,细胞质膜,细胞质,液泡膜,液泡,细胞核,核仁等结构,达到光学显微镜下观察植物细胞基本结构的教学目的。改进后的实验大大提高了利用洋葱表皮细胞观察植物细胞结构实验的教学效果,同时可以通过观察不同部位液泡体积变化,了解植物细胞的动态发育,使学生掌握了更多的知识点。     

大鼠肝和移植性大鼠肝癌BERH-2细胞核DNA的比较

在我们已发表和待发表的工作中观察到,大鼠肝癌细胞中能与正常大鼠肝细胞核DNA重复顺序互补的细胞核RNA,比正常大鼠肝细胞核RNA少;而能与正常大鼠肝细胞核DNA单一顺序互补的细胞核RNA,比正常大鼠肝细胞核RNA有所增加。此外,细胞核RNA由细胞核向细胞质内的运转,肝癌细胞也比正常肝细胞有增加。因此,提出一个问题即,在正常大鼠肝和大鼠肝癌细胞核RNA间所观察到的差异,是反映转录水平的变化,或是反映转录后水平的变化,抑     

DNA流式细胞术在植物遗传及育种中的应用

DNA流式细胞术是一种分析和测定分离细胞核DNA含量的方法。该方法的关键技术包括制备完整细胞核悬浮液、核酸荧光染料染色、根据相对荧光密度(DNA含量)对细胞核进行分类。由于样品制备及分析方便快捷,该技术已成为植物倍性鉴定、基因组大小测定、生殖途径鉴定等研究的重要工具。该文在对DNA流式细胞术基本原理简要介绍的基础上,对其在植物遗传和育种中的应用进行了综述。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”的实验教学组织

对“观察DNA和RNA在细胞中的分布”这个实验中的试剂配制及实验步骤做了适当的改进,并分析了该实验的教学组织过程.实验结果表明:细胞核能很好地被染成绿色,细胞质被染成淡红色,改进后的方法使实验操作更简单,实验效果更明显.     

恙虫病立克次氏体引起宿主细胞的组织化学改变

本文叙述应用RNA及DNA染色方法,观察恙虫病立克次氏体感染兔睾丸单层细胞后的核酸染色改变。随着感染后日数的增加,在胞浆内细胞核旁可见有规律地出现堆状排列的鲜红色RNA小颗粒,这些颗粒与恙虫病立克次氏体的排列位置一致,出现时间亦与立克次氏体的繁殖曲线平行;同时感染后的细胞浆RNA染色往往也较对照深。此外,感染后的_细胞核及核仁有时亦可见到一些不规律的改变。     

红豆草根瘤侵染细胞核在细胞凋亡中的超微结构变化

用透射电镜观察红豆草根瘤侵染细胞核在细胞凋亡过程中的超微结构,以探讨红豆草根瘤侵染细胞核在发育过程中的超微结构变化及其与细胞凋亡的关系.结果表明,红豆草根瘤侵染细胞核的超微结构随细胞发育程度不同而不同.在幼龄侵染细胞中,细胞核体积较大,近似圆形.在即将成熟和成熟的侵染细胞中,细胞核膜有内陷现象,其核仁常具有核仁泡和核仁联合体.在早期凋亡的侵染细胞中,细胞核体积减小,形状变得不规则,核膜出现大量内陷,在其表面形成许多大的突起和深的沟槽,有时还有内质网、线粒体、小液泡和细菌等位于核膜的内陷处,而且核仁也开始裂解.在后期凋亡的侵染细胞中,除细菌解体外,还出现核仁消失,核膜破裂,核质外流,并在细胞质中形成一些电子密度很高,无一定形状的团块状物质.     

“观察DNA和RNA在口腔上皮细胞中的分布”实验的改进和探究

探究并验证盐酸水解步骤在以人的口腔上皮细胞为材料,进行"DNA和RNA在细胞中的分布"实验中导致失败的原因,验证取消盐酸水解步骤后,实验能否达到预期效果,并提出教材中实验步骤的改进方案。利用卡诺氏固定液对染色质进行固定,采用变量控制法设置不同的实验组进行对比实验。导致实验失败的主要原因是盐酸水解使DNA解聚,残留在细胞质中的盐酸改变了染液的pH。实验证明取消盐酸水解步骤后的实验效果更加理想,该方法操作简单,效果明显,可应用于实际教学。     

肽酰精氨酸的翻译后修饰

肽酰精氨酸残基甲基化作用是细胞质与细胞核内蛋白质翻译后修饰的普遍方式。精氨酸残基甲基化蛋白质与许多细胞生物学过程有关,包括转录调节、RNA代谢和DNA损伤修复等。生物体内精氨酸N-甲基转移酶类、肽酰精氨酸脱亚氨酶类与JMJD6等催化肽酰精氨酸残基进行甲基化、瓜氨酸化和去甲基化的动态修饰。这种动态修饰对细胞生物学功能有重要调节作用。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验方法改进

在"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验中,通过改良实验材料、改进实验药品,简化实验步骤,突破甲基绿和吡罗红对DNA和RNA染色效果在实际操作中没有区分度这一广泛存在的实验问题,取得更好的观察效果。学生通过直观的实验观察,构建"结构与功能相适应"生命观念。     

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血细胞染色方法的研究

甲壳类血细胞的形态和分类是甲壳类免疫学研究的基础.本文选择三种甲壳类血细胞的常用染料:瑞氏染液、姬姆萨染液和瑞氏-姬姆萨混合染液,研究它们对于克氏原螯虾血细胞的染色效果.通过改变染色时间、染色温度、分色方式以及分色时间等染色条件,观察、比较不同染色条件下血细胞内的颗粒、细胞核和细胞质的着色情况,以及细胞整体轮廓清晰程度,确定适用于克氏原螯虾血细胞染色的理想染色方法,并建立相应的操作程序.     

RBPMS不同剪接体的真核表达和亚细胞定位

目的：构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白（RBPMS）基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达,确定不同形式的RBPMS在细胞中的定位。方法：采用PCR技术从人卵巢cDNA文库中扩增RBPMS基因的几种完整编码序列（命名为RBPl～RBP4）,克隆到带绿色荧光蛋白标签的pEGFP-C1表达载体上,转染人胚肾细胞293T,Western印迹鉴定RBPMS的表达,并利用激光共聚焦显微镜观察RBPMS不同剪接体在细胞中的定位。结果：限制性内切酶分析和DNA序列测定表明构建的重组表达载体正确,Western印迹实验证明RBP1～RBP4表达成功。通过激光共聚焦显微镜观察,RBP1／4围绕胞核在核膜的周围呈聚集状分布;RBP2则在细胞质和细胞核中均有分布,但会出现斑点状聚集;RBP3呈半月状紧密分布在细胞核周围;RBPMS中的RNA识别基序缺失后,这种现象消失,与空载体对照类似,在细胞核和细胞质中均有分布。结论：构建并表达了RBPMS基因的真核表达载体,RBPMS不同剪接体及RNA识别基序缺失后具有不同的亚细胞分布模式,提示具有不同的功能。     

关于"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验的改进建议

人教版高中新课标教材“分子与细胞”中“观察 DNA和RNA在细胞中的分布”这一实验效果不理想, 即细胞核内的DNA很难被染料染成实验预期中的绿色。笔者反复重做该实验后得出以下结论:实验失败的关键在于实验前的酸处理对染色效果的影响以及酸对DNA的结构的影响。     

一种新的LncRNA——linc00324在乳腺癌细胞中的定位和表达分析

本研究旨在探究linc00324在侵袭能力不同的乳腺癌细胞中的表达情况及其作为乳腺癌诊断与预后判断的标志物的可能性。本研究首先通过核质分离得到MDA-MB-231细胞核中和细胞质中RNA,利用荧光定量PCR技术探究linc00324在细胞核和细胞质中的表达情况;其次提取了侵袭能力不同的MCF-7和MDA-MB-231两种细胞中的RNA,逆转录后进行荧光定量PCR,探究linc00324在两种细胞中的表达量。分析结果表明,linc00324主要表达于细胞质中,并且在侵袭能力较强的MDA-MB-231细胞中表达量较低,在侵袭能力较低的MCF-7细胞中表达量较高。本研究结果提示linc00324可能与乳腺癌发展和乳腺癌细胞侵袭转移存在关系,可作为乳腺癌预后判断的潜在标志物。     

蚕豆根端细胞核中微核仁的研究

以蚕豆(Vicia faba)根端分生组织细胞为材料研究了微核仁的超微结构和细胞化学特点。结果表明;微核仁是直径0.3—0.5μm 的卵圆形或球形结构。常规染色时,微核仁与集缩染色质的电子密度相仿,但两者之间在结构上没有任何联系。细胞化学研究指出,微核仁含有 RNA 和蛋白质,其结构成分主要是与核仁颗粒组分十分相似的 RNP 颗粒。报道了植物细胞核中微核仁发生于核仁的过程并对微核仁的本质和功能进行了讨论。