浙江油菜花叶病毒类型研究

浙江各地引起油菜花叶病的病毒类型有芜菁花叶病毒(TpMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、菸花叶病毒(TMV)及芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒的复合病(TpMV+cMV)。芜菁花叶病毒有TpMV98。和TpMV98 两个毒株,主要区别： TpMV98不侵染心叶菸,TpMV58 侵染心叶菸引起的系统性枯斑和系统性环斑能随环境的影响相互转变。黄瓜花叶病毒有CMV69和CMV72 两个毒株,主要区别：CMV69,回接不上本地油菜,CMV72 能回接上本地油菜。菸花叶病毒毒株(TMV45)侵染多种十字花科植物,在胜利油菜上引起系统花叶,在苋桥红萝卜上是无病状带毒,在农特400号菸上引起局部枯斑。TPMV98和CMV69 或CMV72 形成复合病,可以汁液接种分离,再混合再分离。根据采集样品按类型和毒株来看,浙江大田油菜花叶病,绝大多数是芜菁花叶病毒类型中的TpMV98毒株,复合病和黄瓜花叶病毒分布也相当广。辣根(Cochlearia armoracia L.)上所采的四个样品均属芜菩花叶病毒中侵染心叶菸的TpMV58毒株,辣根的宿根可以保存病毒,可能是这一毒株的越夏寄主之一。     

用A蛋白夹层酶联免疫吸附法对黄瓜花叶病毒的血清学鉴定

用A蛋白夹层酶联免疫吸附法(PAS-ELISA)对两个来自日本蓉茄和一个来自中国青椒植物上的黄瓜花叶病毒分离物进行了血清学鉴定和比较。该方法利用A蛋白和酶联A蛋白分别作预包被和检测结合于抗体一抗原一抗体夹层中的抗体,并通过底物反应,间接反应出病毒抗原的量。对经过两次差速离心纯化的病毒进行检测的结果表明,这三种黄瓜花叶病毒(CMV)分离物与黄瓜花叶病毒P、Q两株系同属一个血清型,即可能均属于黄瓜花叶病毒中的ToRS组。讨论了这种间接酶联免疫吸附法检测植物病毒的优越性和几个CMV分离物的提纯、保存方法。     

经济植物无性繁殖讲座(五)——瓜类嫁接

瓜类嫁接,对西瓜、黄瓜、甜瓜等有明显的增产作用。 一、瓜类嫁接的意义 防治枯萎病 西瓜、黄瓜、甜瓜枯萎病又叫蔓割病,如同瓜蔓被割断一样,全株枯萎。西瓜的重茬地上的发病率一般达50%以上,甚至全部受害。以前防上枯萎病主要是进行轮作,种过西瓜之后要隔7—8年才能再种西瓜,限制了西瓜种植,更不利于大棚西瓜的连年种植。     

CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建

从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒(Cucunbermosaicvirus,CMV)分离物。把该分离物接种西葫芦,从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RTPCR扩增获得CMV的外壳蛋白(cp)基因,将其克隆到pUCmT质粒上。经序列测定和分析,结果表明该cp基因由657个核苷酸组成,编码218个氨基酸。其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物有较高的同源性,达92.2%～93.9%,与亚组II的同源性仅为76.8%～77.8%,与我国报道的CMV分离物的cp基因序列比较,除香蕉株系XB外核苷酸序列的同源性达91.8%～93.4%。根据这些分析,该CMV分离物属于亚组I。将cp基因通过中间载体pJIT163定向克隆到植物表达载体pBINPLUS中(重组双元载体质粒命名为pBCP),并经冻融法导入农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入。利用该植物表达载体对西瓜的遗传转化工作目前正在进行中。     

CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建

从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒(Cucunber mosaic virus ,CMV) 分离物.把该分离物接种西葫芦, 从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RT-PCR扩增获得CMV的外壳蛋白(cp)基因,将其克隆到pUCm-T质粒上.经序列测定和分析,结果表明该cp基因由657个核苷酸组成,编码218个氨基酸.其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物有较高的同源性,达92.2%～93.9%,与亚组II的同源性仅为76.8%～77.8%,与我国报道的CMV分离物的cp基因序列比较,除香蕉株系XB外核苷酸序列的同源性达91.8%～93.4%.根据这些分析,该CMV分离物属于亚组I.将cp基因通过中间载体pJIT163定向克隆到植物表达载体pBINPLUS中(重组双元载体质粒命名为pBCP),并经冻融法导入农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入.利用该植物表达载体对西瓜的遗传转化工作目前正在进行中.     

黄瓜花叶病毒及抗病转基因烟草研究进展

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是世界上分布最广的植物病毒之一,其株系繁多,给烟草生产造成很大的损失。近些年来,各国学者对CMV开展了大量研究。该文主要介绍了黄瓜花叶病毒的基因组结构、亚组以及抗CMV的烟草基因工程的研究进展。     

感染南瓜花叶病毒的哈密瓜种子的ELZSA检测和热处理

在新疆危害哈密瓜的病毒主要有西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、黄瓜花叶病毒(CMV)和南瓜花叶病毒(SqMV)。其中SqMV是通过种子传染影响哈密瓜生产的重要因素之一。据1981—1982年调查,SqMV在鄯善、吐鲁番、阿克苏、喀什、安宁渠和五家渠的发病率分别为45—61%,36—64%,50%,58%,42—82%和6—16%。大多数是与其它病毒共同引起的复     

莴苣病毒病病毒的分离及鉴定

从陕西省关中地区春季和秋季自然发病的109个莴苣病株上分离到3种不同的病毒。经寄主范围与症状反应、抗性测定、传播途径、血清学反应以及电镜观察等鉴定表明,侵染莴苣的3种病毒是莴苣花叶病毒(LMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)及蒲公英黄色花叶病毒(D YMV),其中DYMV在我国是首次报道。     

西瓜花叶病毒中国分离株全基因组核苷酸序列测定

西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)成员,主要危害西瓜和甜瓜,引起花叶病。在田间,该病害主要由蚜虫以非持久性方式传播。西瓜和甜瓜花叶病在国内陕西、山东、云南、辽宁、山西、新疆、河南和黑龙江等地广泛发生[1-6]。从20世纪80年代中期开始发生,逐渐上升为普遍发生的主要病害。我国大部分地区因西瓜和甜瓜病毒病造成的损失为30%~50%,甚至会绝产,西瓜花叶病毒已经成为制约西瓜和甜瓜高产稳产最主要的因素之一[7]。到目前为止,多数工作集中在对西瓜和甜瓜病毒病的鉴定,在分子生物学上仅限于对CP基因…     

不同生物型棉蚜对夏寄主葫芦科作物的选择

于2008、2009年连续两年采用模拟田间自然扩散法,系统地研究了棉花型棉蚜和甜瓜型棉蚜有翅蚜对11种夏寄主的选择性.结果表明,棉花型棉蚜对杂交葫芦、小西葫芦表现出强选择性及适应性,而对香瓜、黄瓜、西瓜及甜瓜均不选择,或即使选择其若蚜在其上也不能存活;甜瓜型棉蚜对甜瓜、香瓜、南瓜、黄西葫芦、大西葫芦、杂交葫芦等均表现较强选择性,而对棉花及小西葫芦表现不选择.但是,甜瓜型棉蚜在小西葫芦上也能产若蚜并存活.从而证明小西葫芦是两种寄主型棉蚜的共同寄主,有可能成为两者相互转换的桥梁寄主.     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

西葫芦黄化皱缩病CMV毒株的提纯及其理化性质的研究

西安西葫芦黄化皱缩病的黄瓜花叶病毒(CMV)毒株,以普通烟为繁殖寄主,将病叶组织经柠檬酸缓冲液匀浆抽提,PEG沉淀,三次差速离心循环,可成功地得到病毒提纯制备物,每公斤病叶组织的病毒产量为300—800 mg。电镜观察到直径约30nm的等轴病毒颗粒,病毒的沉降常数So20w=98,外壳蛋白亚基分子量为2．62×104道尔顿。     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

黄瓜花叶病毒侵染源的研究

试验证明黄瓜花叶病毒(CMV)可经黄瓜种子传播,传毒率为0.20％,传毒部位为种皮和种胚。经ELISA检测和枯斑反应,7种一年生和12种两年或多年生杂草感染CMV,其中刺儿菜、苦菜、还阳参、黄花蒿、伏委陵菜、鼠掌草和本氏蓼是CMV野生寄主新种,苍耳、柱腺独行菜、凤花菜、益母草和酸浆5种杂草作为CMV野生寄主,属国内首次报道。另外,4种观赏植物和2种树木也感染CMV,变该病毒的防治提供了依据。     

国家种质库保存大豆和菜豆种质的种传病毒检测

以国家种质中期库提供的300份大豆、100份菜豆种质为材料,分别采用血清学和分子生物学方法,对种传病毒的种类进行了检测。结果表明:在大豆种质中检测出大豆花叶病毒(SMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、苜蓿花叶病毒(AMV)3种病毒,阳性检出率分别为25.33%(76份)、13.67%(41份)和4.67%(14份)。大豆种质中还存在大豆花叶病毒与黄瓜花叶病毒、大豆花叶病毒与苜蓿花叶病毒的复合侵染。在菜豆种质中检测出菜豆普通花叶病毒(BCMV)阳性材料92份,种质带毒率高达92%。这些信息将会对今后采取相关措施提高国家种质库保存的豆类种质的质量提供帮助。     

侵染天南星科植物病毒的分子鉴定及其生态学研究

通过病毒粒子部分提纯和形态学观察,发现侵染我国南方天南星科植物的病毒主要有线状和球状两种形态．经病毒基因组序列分析确定线状病毒为芋花叶病毒(DsMV);经血清学反应和序列分析确定球状病毒为黄瓜花叶病毒(CMV)．CMV CP基因序列同源性分析的结果表明,侵染天南星科的CMV是相对独立的种内变异类型,归属于亚组L同时,CMV存在对天南星科植物的适应性变异．对采自我国海南、湖南、浙江、上海等地的126个天南星科植物样品进行RNA核酸斑点杂交检测,获得病毒检测结果。海南省样品DsMV的检出率为73．3％,CMV的检出率为46．7％;湖南省样品DsMV的检出率为100％,CMV的检出率为38.5％;浙江省样品DsMV的检出率为93．0％,CMV的检出率为7．0％;上海市样品DsMV的检出率为100％,尚没有检测到CMV,首次证实了自然条件下CMV作为天南星科植物主要病毒的存在,在我国南方地区,该病毒对天南星科植物的自然侵染受到气候、季节和寄主等生态因子的影响。DsMV则在天南星科植物上普遍存在。     

籽瓜种子蛋白组分和生化特性的研究(简报)

籽瓜是西瓜的变种,其种子板大、味香,是人们喜爱的食品。籽瓜种子蛋白质含量约为38%,其中78%是球蛋白。Blagrove(1980)报道。南瓜、西瓜、甜瓜及黄瓜等瓜类种子球蛋     

抗黄瓜花叶病毒单克隆抗体细胞株的建立及其抗体鉴定

用黄瓜花叶病毒(CMV)免疫的BALB／C小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14,经5次细胞融合,6次有限稀释,获得1株6个稳定分泌cMV单克隆抗体的杂交瘤细胞培养物,所分泌的单克隆抗体均属IgM亚类。试验结果证明,6个单克隆抗体对cMV是特异的,对CMV-Q、CMV—P和cMv—B呈阳性反应,对cMV一6和番茄不孕病毒(TAV)呈阴性反应,对所用的其他8种植物病毒：南瓜花叶病毒(0qMV)、绒毛烟斑驳病毒(VT№V)、大毒条纹花叶病毒(BsMv)、马铃薯病毒x(PVx)、马铃薯病毒Y(PVY)、玉米矮箍花叶病毒(MDMV)、大豆花叶 病毒(sMV)和烟草花叶病毒(TMV)均无交叉反应。     

病毒弱毒株的事业化及3种混合接种效果的确认

京都府农业综合研究所和滝井种苗公司、微生物化学研究所从11月开始混合接种“弱毒化病毒”防治黄瓜病毒的事业化。将京都府农业综合研究所开发的弱毒化病毒混合法和滝井种苗公司的种苗与微生物化学研究所的疫苗制造技术结合在一起,进行弱毒病毒混合接种苗的事业化。黄瓜花叶病毒(CMV)等已得到抑制,比未使用的增产40～50％。番茄的CMV弱毒化株的实用化也有实例,目前以黄瓜为对象开始事业化。其特点是3种弱毒株混合使用。     

几种葫芦科蔬菜病毒病的鉴定及药剂防治研究

分别在甘肃酒泉、陕西户县及临潼3地区蔬菜大田采集黄瓜、西葫芦、南瓜3种蔬菜上表现病毒病症状的毒原标样135个,采用鉴别寄主的生物学反应和双抗夹心ELISA法鉴定,结果表明引起上述地区黄瓜、西葫芦、南瓜3种蔬菜病毒病的毒原主要是黄瓜花叶病毒。3．95％“病毒必克”可湿性粉剂防治3种蔬菜病毒病的结果表明,300倍、500倍的病毒必克预防效果可达到75％～78％,且治疗效果明显,药效持久。因此,认为病毒必克是目前理想的植物病毒抑制剂。