筑波市民向法院投诉要求理化学研究所停止P_4级实验

日本理化学研究所生命科学筑波研究中心附近的5名居民(其中有筑波市市议会议员、社会党成员东乡正孝4月28月向水户地方法院土浦支部提出诉讼,要求该中心停止 P_4级实验。原告的诉讼代理人是久保谦治律师。被告是理化学研究所(简称理研)及其理事长小田稔。这是日本第一次在法庭上争讼基因重组实验的安全性。理研的 P_4实验计划已批准的有两个课题,即《向人细胞导入基因的逆转录病毒载体系统的安全性评价研究》之一和之二。研究目的是肯定对人和小鼠都能感染的逆转录病毒在作     

日立销售生物技术洗衣机

日本日立制作所1989年春开始销售全自动洗衣机“静御前(静夫人)FOR BIO”,到5月1日已出4个型号。先于日立制作所的夏普公司,在1988年11月领先销售了内部装有加热器的“生物技术洗衣机ES-V458”,销售势头一直很好,预期月销一万台的计划已突破2成。位居第二的大洗衣机制造厂日立制作所1989年春季对自己的新产品品名冠以“生物技术”字样,看起来在家用电器中也在兴起生物技术热。     

体细胞核移植生产绵羊转hALR基因囊胚

扩增人肝细胞再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,ALR)基因,利用质粒pIRES2-EGFP 构建新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)双标记基因且EGFP和ALR基因为双顺反子的真核表达载体.LipofectAMINETM介导其转染体外培养的绵羊胎儿成纤维细胞(sheep fetal fibroblast cells,sFFCs);经G418筛选转基因细胞;激光共聚焦显微镜挑选绿色荧光单克隆细胞.PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法进一步检测ALR基因及其表达;稳定表达外源基因的sFFCs作供体,移入去核的绵羊卵母细胞中,进行体细胞核移植.通过激光共聚焦显微镜和ALR抗体检测EGFP、ALR基因在胚胎水平上的表达,其结果表明:由IRES连接的EGFP和ALR基因可在绵羊胎儿成纤维细胞内同时表达,由此细胞核移植产生的转基因胚胎在发育的各阶段均可见绿色荧光;囊胚中所有细胞表达EGFP基因;发绿色荧光的胚胎中ALR基因同时存在.因此,由IRES连接标记基因和目的基因,以标记基因指示目的基因的表达,可简化检测目的基因的繁琐手段;用筛选的转基因早期胚胎进行移植,可提高制备转基因动物的效率.     

奶山羊转基因供核细胞的再饥饿对核移植胚胎发育的影响

为提高转基因奶山羊体细胞核移植胚胎早期发育率,将经转染外源基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿培养(含0.5?S的DMEM)5天后分成两部分:第一部分细胞-80℃或液氮冻存,试验前复苏后直接用作供核细胞(试验组Ⅰ),或复苏后恢复培养(含10% FCS的DMEM)2-5天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅱ);第二部分细胞作传代培养(含10% FCS的DMEM)2天后再饥饿5 天用作供核细胞(试验组Ⅲ)。将上述不同处理的供核细胞进行细胞周期与存活率的检测,并将该供核细胞移入去除遗传物质的山羊MⅡ期卵母细胞的卵周隙内,经电融合、化学激活后,将核移植(NT)胚胎经0.8%琼脂糖包理后移入临时寄母输卵管内,培养6天后回收并观察NT胚胎的早期发育。结果,试验组Ⅱ所用供核细胞中G_0/G_1期细胞所占比例及其存活率分别为95.68%、99.9%,均显著地高于试验组Ⅰ(88.66%、80%);试验组Ⅱ的桑椹及囊胚期NT胚胎的发育率(66.09%)显著地高于试验组Ⅰ(22.00%)与试验组Ⅲ(50.51%)。将以上发育的NT胚胎分别移入同步发情的受体后,35 天作B超妊娠诊断,试验组Ⅱ的受体妊娠率为45.83%,显著地高于试验组Ⅰ(20.00%)与试验组Ⅲ(9.58%)。流式细胞仪分析结果表明,饥饿后的供核细胞经冷冻,复苏后恢复培养2-5天,再经饥饿处理,能显著地提高G_0/G_1期细胞的比例及细胞存活率;应用该细胞所组建的NT胚不仅具有较高的桑椹与囊胚期发育率,而且具有较高的受体妊娠率。     

用激光微束法将外源基因导人水稻细胞的研究

将外源基因导入植物细胞是植物基因工程的关键步骤之一。用激光微束技术转化动物细胞已经取得了成功,并证明外源基因已整合到细胞染色体上。最近又证明激光微束可穿透植物细胞壁和细胞膜,将pBR322DNA导入植物细胞和细胞器。本实验在利用激光微束技术将外源基因导入水稻培养细胞上进行了探索。 所用外源DNA是pBI121质粒,该质粒带有CaMV35启动子和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,用     

奶山羊转基因供核细胞的再饥饿对核移植胚胎发育的影响

为提高转基因奶山羊体细胞核移植胚胎早期发育率,将经转染外源基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿培养(含0．5％FCS的DMEM)5天后分成两部分：第一部分细胞-80℃或液氮冻存,试验前复苏后直接用作供核细胞(试验组Ⅰ),或复苏后恢复培养(含10％FCS的DMEM)2-5天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅱ);第二部分细胞作传代培养(含10％FCS的DMEM)2天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅲ)。将上述不同处理的供核细胞进行细胞周期与存活率的检测,并将该供核细胞移入去除遗传物质的山羊MⅡ期卵母细胞的卵周隙内,经电融合、化学激活后,将核移植(NT)胚胎经0．8％琼脂糖包理后移入临时寄母输卵管内,培养6天后回收并观察NT胚胎的早期发育。结果,试验组Ⅱ所用供核细胞中G0／G1期细胞所占比例及其存活率分别为95．68％、99．9％,均显著地高于试验组Ⅰ(88、66％、80％);试验组Ⅱ的桑椹及囊胚期NT胚胎的发育率(66．09％)显著地高于试验组Ⅰ(22．00％)与试验组Ⅲ(50．5l％)。将以上发育的NT胚胎分别移入同步发情的受体后,35天作B超妊娠诊断,试验组Ⅱ的受体妊娠率为45．83％,显著地高于试验组Ⅰ(20．00％)与试验组Ⅲ(29．58％)。流式细胞仪分析结果表明,饥饿后的供核细胞经冷冻,复苏后恢复培养2-5天,再经饥饿处理,能显著地提高G0／G1期细胞的比例及细胞存活率;应用该细胞所组建的NT胚不仅具有较高的桑椹与囊胚期发育率,而且具有较高的受体妊娠率。     

癌特异性新抗原

比利时路德维希癌研所的Thierry Boon及其同事声称,已在人黑素瘤细胞中分离到3种未曾见于正常细胞中的相关基因。特别是其中一种基因的蛋白产物能诱导一种细胞毒性T细胞的抗肿瘤反应。这一发现一旦被证实,将找到第一种认定为只特异于癌细胞的抗原,今后亦将有希望用它作为疫苗来诱导免疫系统破坏肿瘤。 Boon氏是在本月初一次由通用汽车公司发起的会议上介绍其研究结果的。他所发现的抗原看来是由上述三种相关基因(Boon氏称之为Mage)的一个表达出来的。研究者宣称该抗原(Mage-1基因的产物)能激活杀伤性T细胞,这种细胞负责催毁肿瘤组织。对皮肤、肝脏、肺和其它正常人组织进行检测,未能     

小鼠肝核仁体外转录的研究

真核细胞基因的表达及其调控是当前分子 生物学领域中极为重要的研究课题之一,尤其 是特定基因的表达与调控更加引人注意。真核 细胞的核仁是核搪体装配的场所,它含有多拷 贝的特定基因— 核糖体RNA基因（rDNA) 和专门负责转录rDNA的RNA聚合酶I,唯 一的基因产物是rRNA。因此,核仁及其染色 质是研究特定基因转录及其调节控制的一个理 想系统。Busch 等〔141于1964年第一次证明离 体核仁能在体外系统中合成rRNA。其后,不少 工作者分别用鼠肝细胞^[7,15]、蛙卵母细胞^[8] 、四 膜虫细胞^[5],以及多种人工培养细胞(Novikoff 肝癌细胞、Hela细胞、Ehrlich 腹水癌细胞 等^[1][2]的核仁及其染色质对rRNA的体外合 成进行了研究。我们以小鼠肝核仁为材料,研 究核仁染色质的结构与功能,试图寻找与rRNA 体外合成有关的某种调控蛋白,以便阐明真核 细胞核糖体基因表达的调控机理。     

基因替换遏制了结肠癌的离体生长

约翰·霍普金斯癌研中心(Baltimore,MD)的研究人员将肿瘤抑制基因p53插入于结肠癌细胞中,成功地阻止了癌细胞的生长.在许多类型的固态恶性肿瘤(包括脑、骨、乳腺及肾等处的癌)中,两拷贝p53基因均缺失或突变.结肠癌每年夺走6万名美国人的生命,这个数目仅次于肺癌.     

漂浮基因有助于哺乳类动物的细胞培养

宾西法尼亚州的Donald Bryant和巴斯德学院(巴黎,法国)的Tandeau de Mafsac克隆了引起蓝藻漂浮的基因并将其表达在大肠杆菌里。还没有产生大量的基因产物。但已初步显示出大肠杆菌能漂浮——而不以生物体通常沉降的方式而沉降。把漂浮基因移入哺乳类动物细胞内可以简化基因在发酵桶内的生长过程。哺乳类动物的细胞往往沉降到发酵桶底。它们较脆弱,为保持其悬浮而进行的猛烈摇动会损坏细胞。而漂浮细胞只需极轻微的摇动。漂浮还有助于收获重组体微生物。有可能用一种化合物来控制漂浮基因,该化合物可在微生物体收获前加入发酵桶内。这些实验中克隆的基因来自眉藻属(Calothrix)的种。漂浮基因编码形成气液泡膜的多肽。气体可以进入液泡,但水却不能。三个有关基因中的两个已被克隆。它们产生相似的蛋     

向合成细胞迈进：细胞与计算机的复制过程中的遗传问题

对生命机制的理解预示着人类总有一天能重建细胞。对于生命表征的深入分析显示, 细胞的分裂、繁殖与计算机间的复制非常相似。这要求我们在亚细胞水平上进行分析比较。首先, 细胞必须被看作是一个独立于其遗传物质的机器。在此意义上, 遗传物质在数代间复制, 而机器也可以再生。繁殖是一个可以在子代间累积有用信息的过程, 从大量无用的信息海洋中提取有用信息是一个依赖能量的过程, 并借助能量阻止功能性实体的降解。细菌基因组的分析显示, 核心基因( 即维持必需功能的基因) 负责执行这种类似于棘齿运行的信息累积过程。本文提出, 磷酸化矿物盐类可能是广泛的能量来源。     

玉米原生质体经工程操作转移基因后成株

据报道,培育重组体作物又取得一个重大突破。美国山道士作物保护公司(加州帕洛阿尔托)的研究人员成功地把一个外源基因转移入玉米原生质体,并将此原生质体培育成完整植株。他们是用电击穿孔法把一抗卡那霉素基因插入玉米原生质体,转化效率为典型性的0.5～1％。关键步骤是将经转化的原生质体培养在一层“饲喂者”细胞上,使之长成愈伤组织。这些饲喂者细胞是一种液体悬浮液中的黑色墨西哥甜玉米(Black Mexican Swe-     

利用氩离子激光微束照射研究微核仁的形成

为探讨微核仁的形成机理,对组织培养的雄性长鼻鼷(Potorous tridacylis)肾脏上皮细胞株(PTK_2)间期细胞的核仁及早前期细胞的核仁进行了氩离子激光微束照射。结果表明,激光微束照射有丝分裂前30小时的间期细胞的核仁以及早前期细胞的核仁之届,细胞都能正常地进行有丝分裂。但子细胞不能形成正常核仁,却形成了数个微核仁,而且二者所形成的微核仁数目及大小基本上是一致的。初步证明存在核仁组织区以外的“候补”核仁组织区,形成微核仁的RNA可能是“候补”核仁组织区基因转录的产物。     

向合成细胞迈进：细胞与计算机复制过程中的遗传问题

对生命机制的理解预示着人类总有一天能重建细胞.对于生命表征的深入分析显示,细胞的分裂、繁殖与计算机间的复制非常相似.这要求我们在亚细胞水平上进行分析比较.首先,细胞必须被看作是一个独立于其遗传物质的机器.在此意义上,遗传物质在数代间复制,而机器也可以再生.繁殖是一个可以在子代间累积有用信息的过程,从大量无用的信息海洋中提取有用信息是一个依赖能量的过程,并借助能量阻止功能性实体的降解.细菌基因组的分析显示,核心基因(即维持必需功能的基因)负责执行这种类似于棘齿运行的信息累积过程.本文提出,磷酸化矿物盐类可能是广泛的能量来源.     

小鼠囊胚与黑色素瘤细胞共培养模型优化

采用基因转染的方法,将EGFP(增强型绿色荧光蛋白)基因导入B16黑色素瘤细胞中,筛选出稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-B16细胞株,利用RT-PCR法检测细胞中EGFP基因的mRNA表达,流式细胞仪分析荧光细胞阳性率。利用EGFP-B16细胞与C57BL/6小鼠囊胚共培养,在激光共聚焦荧光显微镜下观察,比在普通倒置显微镜下观察B16细胞与C57BL/6小鼠囊胚共培养的模型能更加直观的表达胚胎与肿瘤的相互作用关系。     

定量PCR产物的“QPCR Systems 5000”

日本支杆生物技术系统(A.B.J)公司销售了可定量PCR(聚合酶链反应)产物的“QPCRSystem 5000”。于12月16日在千叶县召开的第16届日本分子生物学会年会的学术讨论会上发表详细情况。日本是第一次售销定量PCR产物的机器。PCR产物定量期望能在病毒和疾病有关基因定量、药物和对变异原物质DNA影响的控制等领域广泛应用。     

大麦黄矮病毒GAV株系ORF4基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及亚细胞定位

根据已报道的大麦黄矮病毒GAV株系(BYDV-GAV)相关基因序列,利用RT-PCR方法获得ORF4基因。在杆状病毒-昆虫细胞系统中,成功表达了ORF4和GFP(绿色荧光蛋白)的融合蛋白(GFP:ORF4),Western blot检测到目的蛋白的表达。利用激光共聚焦显微镜观察其在细胞中的积累和亚细胞分布,发现ORF4基因编码的17kD蛋白(P4)能进入细胞核,并在细胞核膜上聚集。通过对ORF4基因编码的P4蛋白的N端和C端缺失突变结合蛋白质的结构预测分析,鉴定出N端α螺旋结构对于P4蛋白的核膜定位是必需的。这些结果为进一步研究ORF4基因在黄矮病毒GAV系统侵染中的生物学功能奠定了基础。     

He-Ne激光抗衰老效应的初步探讨

目的:探讨氦氖激光对人胚肺二倍体成纤维细胞(Human fetal lung diploid fibroblasts,2BS)对细胞衰老的影响。方法:采用低功率氦氖激光(λ=632.8nm,p=5mW)对年轻2BS细胞进行照射处理,用实时荧光定量PCR( Fluorescence Real time Quantitative PCR,q-PCR)方法检测细胞端粒DNA相对长度的变化来反映细胞的衰老情况。结果:经激光照射后生长到老年的细胞端粒长度较未经激光照射而生长到老年的细胞端粒长度长。结论:经适当的激光照射后,细胞端粒D N A因衰老而变短的趋势得到减缓。从而为从基因水平上探讨低功率激光延缓细胞衰老的激光生物学效应提供实验依据。     

人生长激素慢病毒载体的构建及其在鼠骨骼肌成肌细胞中的表达

构建能表达人生长激素(hGH)的pLentivirus6/V5-hGH载体,并实现hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达。体外培养SD鼠骨骼肌成肌细胞,并通过免疫组织化学方法鉴定所得细胞、用台酚兰染色确定培养细胞的活性并绘制生长曲线。将目的基因hGH亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO载体上,构建重组质粒pLentivirus6/V5-hGH。将pLenti6/V5-hGH及阳性对照质粒pLenti6/V5-EGFP分别用Lipofectamin2000介导转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞。在激光共聚焦扫描显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异源生长激素(GH)的成肌细胞。收集转染及筛选后的细胞培养基,用放射免疫分析法(RIA)检测重组人生长激素(rhGH)的表达水平。聚合酶链式反应法(PCR)及DNA测序显示hGH基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO载体中;阳性对照质粒转染细胞24h后,在激光共聚焦显微镜下观察,其转染效率达40%以上。检测收集的上清,与对照组相比,有极显著差异(P<0.01),观察至第8周,rhGH仍持续稳定表达。通过检测培养的chang-liver肝细胞上清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的水平,验证了rhGH的生物学活性。实验通过培养高纯度的成肌细胞,构建了能在真核细胞内表达hGH的重组质粒pLenti6/V5-hGH,实现了hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达,并且获得的rhGH具有较强的促进肝细胞分泌IGF-1的能力。     

LIGHT及IFN-γ对MIN6细胞凋亡和Bax表达的影响

目的研究细胞因子LIGHT及IFN-γ对小鼠胰岛素瘤细胞株MIN6细胞凋亡及促凋亡基因Bax蛋白表达的影响。方法体外培养MIN6细胞,将细胞分为4组:(1)未处理组(细胞对照组);(2)LIGHT组;(3)IFN-γ组;(4)LIGHT+IFN-γ组,用LIGHT与IFN-γ分别单独或联合刺激MIN6细胞24 h。采用MTT法检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察MIN6细胞核形态,流式细胞仪测定细胞凋亡率。利用Western blot分析基因Bax蛋白表达变化,将Bax(siRNA)转染入MIN6细胞,用LIGHT和IFN-γ刺激24 h,Western blot检测Bax蛋白表达,MTT法检测细胞存活率变化。结果 LIGHT或IFN-γ单独刺激仅能引起MIN6细胞存活率轻微下降,但LIGHT与IFN-γ联合刺激能显著降低细胞存活率(P0.05),细胞核可见凋亡小体,细胞凋亡率(28.80%)明显高于LIGHT或IFN-γ组(4.42%和6.70%),且Bax蛋白含量增加。Bax siRNA降低了MIN6细胞Bax基因的表达,Bax siRNA+LIGHT+IFN-γ组的细胞存活率显著高于LIGHT+IFN-γ组和阴性对照siRNA+LIGHT+IFN-γ组(P0.05)。结论 LIGHT与IFN-γ联合刺激能促进MIN6细胞凋亡,且与促凋亡基因Bax表达上调有关。