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《生物技术通报》1990,(5)
卿1135利用甲醉的Aeetobaeter啡山a.uC.MB 58的启动子探针载体的构建咦1/sehroeder,R·…11 Actaaiotcchnol一1 989,9(3)一219一225降自DBA,1989,8(]9),89一11145〕 载体质粒pRsZ由于广寄主范围复制子质粒RSF 1010的存在,因而可用在上述醋杆菌或大肠杆菌,它提供启动子克隆的单一限制性位点及选择转化体的抗性标记.该载体是把质粒pUC19的EcoRI一sall多聚接头插人到用&oRI/sa江消化的质粒pMK一6中构建得到的.产生的抗卡那霉素质粒pRsl被克隆到质粒RSF!010的EcoRI位点上,并用来转化大瓜扦菌C 600.含杂交质粒克隆的选择在含Km和S… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
920410可在蓝燕株系PCC7120中分析启动子的载体〔英〕/Tang,J.D.…了J.Baeteriol一1901,i了3 (s)一2729~2731〔译自DBA,1991,10(12),91一06654〕 构建了启动子探测载体pJL3,它含有一个多克隆位点、cat基因(不带启动子)以及转录终止子。经接合将其从大肠杆菌转移至Aoaba‘。a“P.PCC7iZo中。新质粒的成分来源于:质粒pRL25C (含大肠杆菌和兰藻复制子)、新霉素杭性标记、bom接合转移区、质粒pDUI(从丝态兰细菌分离到)以及pBR322的序列。描述了该载体质粒的详细构建过程。Aoaba。:a psbB基因编码光合系统n中的一种分子量47000的叶绿… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
923833 新的启动子区ONA序列〔专,日〕/Kaji,A./J0 3250一855:30.03.90一JP一081030(li.rZ。91)30.03.90 as 081030.92、一035929/05(4页)〔译自 DBA,1992,11(8),92一04290〕 新序列含启动子区,在一35区有TTACCC碱基序列,在一35区与一10区之间有15一20碱基的间隔 区。一10区为TATACT,间隔区以 GTAATATGTTTAATCAGGGC为主。将此启动子序列整合到表达栽体(如pKK系列)中,产生强启动效应。例如,将含有质粒pLC6一32的大肠杆菌培养于含大肠杆菌素的L培养基中,直至静止期。抽提质粒,用Eo0RI及Smal处理,在NaOAc存在下乙醇沉淀… 相似文献
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用体内激活的启动子调控HCV核心抗原表达可增强重组鼠伤寒沙门氏菌的免疫原性 总被引：3，自引：0，他引：3
为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答 ,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子 ,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒 ,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中。体外培养时 ,Mg2 能够剂量依赖性抑制该重组菌表达HCV核心抗原。将该重组菌和组成性表达的重组菌分别口服接种BALB/c小鼠 ,观察质粒的稳定性和小鼠的免疫应答。结果表明 ,体内激活的pagC基因启动子能明显提高质粒在重组鼠伤寒沙门氏菌中的稳定性和增强重组菌诱导的体液和细胞免疫应答 ,这为发展高效免疫、成本低廉的口服丙肝疫苗提供了一个新思路 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
921489单子叶植物LHCp启动子在转基因水稻中的表达〔英〕/Tada,Y.…2 EMBOJ一1991,10(7)一1803~1808〔译自DBA,1991,10(18),91-10498〕 通过电激将与编码水稻(Or夕za夕at苏公a)捕光叶绿素a/b光系统一n(LHCPll)结合蛋白启动子相连的户葡糖昔酸酶(GUS)基因(位于质粒PLHC4.4中)导入水稻。转化原生质体和愈伤培养物中由LHCP启动子控制的GUS基因表达远低于由花椰菜花叶病毒(CaMV)355启动子控制的,而在绿色器官中,LHCP启动子启动的LHCP-GUS活性比CaMV35S启动子启动尸的高10倍。在叶、茎和花组织中检测到LHCP一GUS基因的表… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(9)
923449重组体葡聚糖水解啤酒酵母菌株的构迷与分析〔英〕/Suihko,M.L.…了Appl.Mierobiol一B 1 oteehnol一1991,35(6)一751~757〔译自DBA,1992,11(5),92一02748〕 构建了4种不同类型的具纤维素酶活性底面发酵酿酒酵母(Saecha,o仍鲜ees ee:e‘s￡ae),方法为利用共转化和基因置换,使里氏木霉(T八-“hoder,a俨eese￡)vTT一D一50133的纤维素酶egll基因整合到酿酒酵母VTT一A一63015(A15)的PGKI或ADHI位点。用质粒pMA91和质粒pAAHS构建分别在PGKI和ADHI启动子和终止子之间携带egn基因的质粒pMN20和质粒pMN200。构建的单拷贝整合… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922913指导甲状旁膝素类似物(8一84)在大肠杆菌内表达的内核钻体结合位点〔英〕/song,W.L一ZBi。-ehem。BioPhys.Res。Commun。一1991,151 (i)一451~455〔译自DBA,1902,11(3)奋92一01358〕 设计了12种合成基因,通过用简并密码子置换 (多肤序列无突变),使每个合成基因在甲状旁腺素(PTH)一(1一5)区内含或不含内核糖体结合位点样序列(iRBS)。将12种合适的编码PTH-一(1~28)的寡核普酸擂入前体质粒pPTH一(29-84)一Ec。产生具不同编码PTH一(1一5)结构域核酸序列的质粒。此新质粒在大肠杆菌中表达(在lac启动子和操纵子控制下)产生胞内蛋… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
920526在大肠杆菌中表达鸡生长激素及其缺失变体〔俄〕/Gorbulev,V.G.…了Biotekhnologiya一19ox,i一20~25仁译自DBA,1991,10(12),91一06760〕 介绍了重组质粒的构建,该质粒在trp启动子调控下编码全长鸡生长激素(CGH,家禽生长激素)及其缺失变体的生物合成。同时介绍了用大肠杆菌DH一1生产上述蛋白。以质粒pCGHex为基础,构建了含CGH cDNA的质粒PtrpCGH、ptrp CGH一乙一3和ptrp CGH一乙一7,它们分别编码全长CGH、去掉N一端最初3个氨基酸的CGH和去掉N一端最初7个氨基酸的CGH。在基本培养基中加入户引噪丙烯酸进行诱导,转化的… 相似文献
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为构建质粒稳定型山羊痘DNA疫苗,采用PCR与限制性酶切技术去除真核表达质粒pcDNA3.1(+)的氨苄抗性bla基因启动子序列,构建改良质粒pmcDNA3.1(+),然后插入山羊痘病毒P32基因,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-P32,通过TSS法将其转化至减毒沙门氏菌中,构建成功携带山羊痘DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-P32);体内和体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-P32在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-P32。这为下一步减毒沙门氏菌介导的山羊痘DNA免疫研究奠定了基础。 相似文献
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小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的.以2235A-1质粒为模板,通过PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子/增强子基因片段,用小鼠白蛋白启动子/增强子基因片段取代pHCV-neo4质粒(含HCV5＇NCR调控荧光素酶基因)的CMV启动子,构建了一种白蛋白启动子启动转录的HCV5＇NCR调控荧光素酶表达质粒(pA1b-HCV).该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高,表明成功地构建了肝特异性表达的HCv5＇NCR调控荧光素酶表达质粒.该研究为建立肝特异性表达的HCV5＇NCR转基因小鼠模型奠定了基础,对评价HCV特异性反义药物及肝靶向性运载系统的作用具有重要的实际意义. 相似文献
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《生物技术通报》1992,(10)
923619乙型肝炎表面抗原在乳酸克会维醉母中的克隆和表达〔英〕/Martinez,E.…2 Bioteehnol.Lett一1092,14(2)。一53~56〔译自DBA,1992,11 (7),92一03754〕 为了用乳酸克鲁维酵母生产乙肝病毒表面抗原,构建了含lac4基因启动子(来自质粒BSLAC4)、表面抗原基因(来自质粒pHBI)、LAC4终止区及其后的URA3基因(来自酿酒酵母)和LAC4基因的3‘非编码区(来自质粒pJAAS12)的质粒pDLHZ。用含表达盒区的pDLHZ转化乳酸克鲁维酵母VDI,转化子于1%酵母粉、2%蛋白膝和2%葡萄糖的培界基中进行摇瓶培养(21摇瓶装40001培养基,于50℃、25orPm培养… 相似文献
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924384在解淀粉芽抱杆菌中克隆和表达低妥白酶活性的人胰岛案漂甚因〔俄〕/Selivanova,G.N.…IB iotekhnologiya一1992,i一9~13[译自DBA,1992,11(11),92一06143〕 通过连续UV诱变,分离出缺失外蛋白酶活性的解淀粉芽抱杆菌A50的突变株。突变株的蛋白酶活性仅是A50的1八00和1/10。。。突变株GT32和GT74映乏中性和碱性主要蛋白酶,只能生产少量次要蛋白酶。用载体质粒pBA13。转化这些突变株,并在该菌a一淀粉酶基因的启动子、核糖体结合位点和信号肤的调控下表达。质粒pBA130由解淀粉芽抱杆菌载体质粒pBA91和pBINSI构建而成,含有人胰… 相似文献
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小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调控荧光素酶基因 )的 CMV启动子 ,构建了一种白蛋白启动子启动转录的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 (p A1 b- HCV) .该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高 ,表明成功地构建了肝特异性表达的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 .该研究为建立肝特异性表达的 HCV5′NCR转基因小鼠模型奠定了基础 ,对评价 HCV特异性反义药物及肝靶向性运载系统的作用具有重要的实际意义 相似文献
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小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调控荧光素酶基因 )的 CMV启动子 ,构建了一种白蛋白启动子启动转录的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 (p A1 b- HCV) .该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高 ,表明成功地构建了肝特异性表达的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 .该研究为建立肝特异性表达的 HCV5′NCR转基因小鼠模型奠定了基础 ,对评价 HCV特异性反义药物及肝靶向性运载系统的作用具有重要的实际意义 相似文献
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《生物技术通报》1992,(5)
921607应用乳酸乳球菌的lacG基因构建乳酸菌的启动子探测毅体〔会,英〕/SimonS,G.“·,Dev.Ind.Mierobiol一i。。o,31一31一39〔译自DBA,1991,10(21),91一12056〕 用乳酸乳球菌(Laetococe。。laet名s)NCDO712的6一磷谓一D一半乳糖昔酶(lacG)的无启动子基因,构建了启动子探测载体pNZ336。将一个含多个限制位点及3个读码框终止密码子的DNA片段插入laeG基因的Shine一Dalgarno序列上游。作为选择标记,该载体含有金黄色葡萄球菌质粒pC194和pUBllo的氯霉素抗性及卡那霉素抗性基一23一因,二者在革兰氏阳性、阴性菌中均有功能。该载体还… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(5)
921940大鼠生长激紊基因微注射到斑马鱼卵里以生产转基因斑马鱼〔英〕/Pandian,T.J.…泌Curr.Sei一1991,60一9~10〔译自DBA,1991,10(22),91一13024〕 将质粒pMGH(15ng DNA/时)(含有与大鼠生长激素基因融合的小鼠金属硫因启动子)微注射到斑马鱼尚未分裂的受精卵(1266个)里。注射一天后胚胎平均存活率为46%,但变动范围为16~72%。利用标记质粒作探针通过Slot一blot和Sou-thern印迹杂交分析了从推定转基因鱼提取出的基因组DNA。杂交图谱显示发生了基因组、染色体外、以及嵌合整合。继续存在于Fl和FZ代里的染色体外DNA浓度逐步降低。F… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(12)
.,J一,J沪.J”‘舌尹.刁7.’试J、~宁.护理J.合忠‘J产奋「下,924392用杆状病毒表达载体生产分离的异型户半乳箱普酶多肚仁英〕/Lieari,P.…/Biotechnol.B ioeng一1092,39(9)一932~944〔译自DBA,1992,11(11),92一06397〕 在草地夜蛾连续细胞系IPL一Sfg中表达首藉银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV),生产分离的异型户半乳糖普酶蛋白。在pol了hedrin启动子调控下,重组AeMNPV编码 polyhedrin一BG的融合蛋白。该启动子由转移载体质粒pAo36。和设计的360-lac构建。病毒侵染细胞后培养96小时,培养物经BG免疫沉淀放射自显影显示,有几条比B… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920889在发醉杂件下乳抽对tac启动子的诱导〔英刀Neu-bauer,P.…j Aeta Bioteehnol一1091,11(一)一23~2。〔译自DBA,i,。i,10(15),91-08级38〕 发展了一种用乳糖代替昂贵的TPTG诱导tac启动子的表达系统。采用大肠杆菌JC53的R100质粒协助质粒诱动,用平板结合法将大肠杆菌JM109的F,质粒(Lelq、pro AB)转入受体菌NK5525(lae‘、pro)。得到的原养型CW3oll超量表达lae阻遏物基因,并以乳糖为能源和碳源生长。质粒pOFI.o转化的菌株CW3oll含控制lae操纵子(I-acZ和lacy)片段的 tac启动子和氨节青霉素抗性基因。摇瓶和发酵罐实验结果表明… 相似文献