百日咳毒素单克隆抗体对百日咳杆菌感染后的调节

<正>百日咳毒素(PT)是一种原生型A-B结构毒素,由一酶活性A原体结合一B寡聚物组成。A原体是由单一的亚单位(S_1)组成,以腺苷二磷酸核糖基化鸟嘌呤核苷酸结合调节蛋白(G_1)而起作用,它能去除膜接合腺苷环化酶的抑制作用。B寡聚物是由S_2-S_4和S_3-S_4二聚体和一个S_5连接物组成的五聚体,它的功能是结合于细胞受体并促使A原体接近于它的被作用物。PT正如在动物模型的被动和自动免疫中所显示的,是一种保护性抗原。     

百日咳杆菌69KD外膜蛋白的研究进展

<正>百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病,严重威胁婴幼儿健康,对它的控制迄今主要依赖于菌苗预防。目前认为,百日咳杆菌有许多生活学活性成份,包括白细胞增多促进因子(LPF)[又称百日咳毒素(PT)]、丝状血凝素(FHA)、腺苷酸环化酶(AC)、外膜蛋白、脂多糖、不耐热毒素等。其中LPF、FHA、69KD外膜蛋白作为保护性抗原成份,是目前国内外学者研究的热点。     

抗百日咳毒素单克隆抗体及其应用研究进展

疫苗是预防百日咳(pertussis)的最有效措施,但无细胞百日咳疫苗接种后免疫力的迅速衰退是近年来百日咳发病率上升的原因之一。百日咳毒素(pertussis toxin, PT)是由百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)分泌的主要毒力因子,具有多种生物学活性。在无细胞百日咳疫苗设计初期,为确保疫苗的有效性,抗PT的单克隆抗体(单抗)常被用来检测PT表面重要的抗原表位。研究表明,与天然PT特异性结合的部分单抗无法识别经化学方法脱毒后的PT,提示化学脱毒会改变疫苗中PT的一些抗原表位,进而影响疫苗保护效果。现结合单抗可用来研究抗体干扰PT功能的分子机制,对机体在感染百日咳后的保护性免疫机制进行综述,以期为无细胞百日咳疫苗的进一步改进及开发人源化抗PT单抗治疗百日咳提供科学依据。     

无细胞百日咳菌苗的纯制和特性

<正> 引言 百日咳菌苗传统的形态,由杀死的百日咳杆菌组成,亦即它是全细胞菌苗。这种菌苗包含有对促进保护性应答不需要的成份,而且这些成份可能对副反应起作用。在日本,自1973年一直从事由百日咳杆菌分离其有效因子,并尽可能多的除去不需要的成份。一些保护性抗原已在百日咳杆菌培养物的上清液中被证实,并曾尝试发展一种由一或两种这些抗原组成的菌苗。含有两种主要保护性抗原即由百日咳杆菌培养物上清液中分离出的百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)的精制百日咳菌苗(无细胞百日咳菌苗),自1981年已应用于日本.     

用合成肽标定百日咳杆菌毒素S_1亚单位的抗原位置

<正>最近已报道了百日咳毒素基因的整个序列及氨基末端序列,一级结构的明确使合或携带自然毒素抗原决定簇的肽链成为可能。短肽的抗体与天然蛋白常常结合得很好,因为这种蛋白提供的短肽序列是暴露在分子表面的。百日咳毒素由5个不同的亚单位组成,S_1—S_5。我们和其它学者已经发现,具有酶活性的亚单位S_1是免疫显性的。本研究用接种过全细胞百日咳菌苗或只含百日咳毒素菌苗的人和动物血清,对包含S_1亚单位抗原决定簇的5种多肽序列的鉴定及合成作了阐述。     

重组百日咳毒素Sl亚单位的纯化及免疫原性

将重组百日咳毒素S1亚单位基因的质粒在DH5α和TOPl0两株大肠杆菌中进行表达,并对表达产物进行了初步纯化。粗制的rSl免疫家兔所得血清,用HP—PT及1B7-PT包被的ELISA测定效价,并做被动免疫保护试验。抗PT的抗体滴度为1：32000。该抗rSl血清在小鼠被动免疫保护试验中,对百日咳杆菌18323毒株进行脑腔攻击的被动免疫保护作用达到100％。证明rSl亚单位具有良好的抗原性和免疫原性,并与天然S1具有相同的抗原表位。     

鲍特氏百日咳杆菌纯组分在测试百日咳菌苗毒性的体重增加试验中的作用

<正>大多数通用的百日咳菌苗是灭活的全细胞制剂,这种制剂中的百日咳杆菌已通过加热或用适当的化学试剂处理过。所以这些菌苗含有许多百日咳杆菌的组分,如百日咳毒素(PT)、脂多糖(LPS)和丝状血凝素(FHA)。百日咳毒素是一种具有广泛生物活性的物质,它曾被命以不同的名称:淋巴细胞增多促进因子、胰岛激活蛋白、组氨敏感因子、百日咳原及百日咳毒素。     

猪胸膜肺炎放线杆菌溶血毒素的克隆表达及其对小鼠 免疫保护作用

将猪胸膜肺炎放线杆菌血清3型分离株的ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA基因和血清5型分离株的ApxⅠA基因分别克隆到原核表达载体pGEX-5x-3,并在大肠杆菌BL21中进行表达.SDS-PAGE结果表明重组菌表达的最佳条件为诱导时间2小时和IPTG终浓度1mmol/L.通过硫酸铵盐析和Sephadex G-200凝胶过滤层析纯化表达产物.Western blot检测结果显示表达产物具有免疫活性.按照不同组合将表达产物与弗氏佐剂等比例混合,制备3种亚单位疫苗.并在30日龄和45日龄免疫小白鼠,在60日龄分别用血清1、3、5、7和10型胸膜肺炎放线杆菌攻毒.血清1、5和7型胸膜肺炎放线杆菌攻毒后,3种亚单位疫苗分别提供58.4%、66.6%和91.7%的保护率.试验结果表明重组蛋白具有免疫保护作用,且含有四种融合蛋白的亚单位疫苗免疫保护效果最佳.     

百日咳毒素对人亲血色蛋白的亲和性:用于毒素的体外测定

<正>百日咳毒素,由百日咳杆菌产生的一种蛋白质已被采用许多不同的名称而为人们所知道,诸如淋巴细胞增多促进因子(LPF),组织胺敏感因子(HSF),胰岛激活蛋白(LAP)和淋巴细胞增多促进因子——血凝素(LPF—HA)等,每一种都能在体内或体外反映一种特别的生物学反应,从前我     

重组百日咳毒素S1亚单位的纯化及免疫原性

将重组百日咳毒素S1亚单位基因的质粒在DH5α和TOP10两株大肠杆菌中进行表达,并对表达产物进行了初步纯化.粗制的rS1免疫家兔所得血清,用HP-PT及1B7-PT包被的ELISA测定效价,并做被动免疫保护试验.抗PT的抗体滴度为1:32 000.该抗rS1血清在小鼠被动免疫保护试验中,对百日咳杆菌18323毒株进行脑腔攻击的被动免疫保护作用达到100%.证明rS1亚单位具有良好的抗原性和免疫原性,并与天然S1具有相同的抗原表位.     

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达

绿脓杆菌外毒素A(PEA)是绿脓杆菌感染的最主要致病因子,它由3个区域共613个氨基酸组成,分子质量66 ku。在体内,毒素先由Ⅰ区(受体结合亚单位)识别细胞表面受体并与之结合,而后,通过Ⅱ区(跨膜亚单位)将具有ADP-核糖基化活性的毒性单位导入胞浆,使Ⅲ区(毒力亚单位)发挥毒力作用,催化细胞内的延长因子2(EF-2)发生ADP-核糖基化反应,使EF-2灭活,抑制蛋白合成而杀灭细胞。在这种结合、入胞、抑制蛋白合成的三步连续过程     

类甜蛋白的结构特征以及功能研究进展

类甜蛋白是一种具有多种生物学活性及重要功能的植物防御蛋白,属于病程相关蛋白。近年来关于类甜蛋白具有抗真菌活性的研究较多。类甜蛋白具有葡聚糖酶活性,能结合并降解真菌细胞壁的组成成分—β-1,3葡聚糖酶。在三维晶体结构中类甜蛋白表面的一个酸性“V”字形裂缝对其抗真菌活性起着至关重要的作用。对类甜蛋白结构与功能的关系,不同植物中类甜蛋白的生物学特性,以及国内外基因工程中类甜蛋白基因的应用研究进展进行了综述。     

表达百日咳杆菌丝状血凝素的活aroA都柏林沙门氏菌重组菌株的抗体应答

<正>一种已经证实而且并不昂贵的百日咳菌苗是我们最为期望的。特别是对不发达国家。由毒性或潜在性毒性成份诸如内毒素、皮肤坏死毒素、百日咳毒素、腺甙酸环化酶和气管细胞毒素等中分离出具有保护性但无毒性的百日咳菌抗原如象丝状血凝素(FHA),已经使得含有大量脱毒的百日咳毒素和FHA的新型亚单位菌苗有了发展。FHA是百日咳杆菌极大的一种表面蛋白质,它对小鼠鼻腔内攻击具有保护性免疫力。在最近的一次现场试验中,分别     

PT8A的粘膜免疫佐剂活性初步研究

本研究发现位于大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotxin B subunit,LTB)的8肽(octapetptide,PT8A)具有一定的佐剂活性。我们用PT8A联合人手足口病病毒的VP1(EVP1)鼻腔免疫Balb/c小鼠,通过间接ELISA法检测小鼠血清中的特异性EVP1抗体滴度,检测结果显示PT8A+EVP1组相比PBS组和EVP1组有明显佐剂活性,初步验证了PT8A的佐剂活性。对PT8A和LTB蛋白的佐剂活性进行比较研究,结果显示,PT8A的佐剂活性明显弱于LTB,有待进一步提高。通过对PT8A免疫原性进行检测分析发现,PT8A的免疫原性明显减弱,初步确定PT8A在保留佐剂活性的同时自身免疫原性明显减弱,具有进一步开发为粘膜免疫佐剂候选分子的潜力。     

肿瘤坏死因子的研究进展

<正>肿瘤坏死因子(TNF或TNF-α)的研究进展日新月异,与数年前相比可谓面目一新,当初仅了解TNF的抗肿瘤活性,但后来发现TNF对多种正常细胞具有广泛的生物学活性。其生物学活性不仅与结构类似,结合同一种受体的淋巴毒素(LT或TNF-β)相近,且与结构迥异、结合不同细胞受体的白细胞介素1(IL-1)具有广泛的功能重叠性。 TNF及其分泌调节 TNF由分子量17kd的亚单位构成,依动物种类及分离方法的不同,可为2聚体,3聚体或4聚体,还不清楚多聚体是否为体现生物学活性所必需。人TNF为非糖基化蛋白,而几乎所有动物的TNF都为糖蛋白。 小鼠TNF分子由156个氨酸残基构成。家兔TNF在N端缺2残基,为154个残基。而人TNF由于在第73位插入一组氨酸,由157个氨酸残基构成。     

叉头框(Fox)转录因子家族的结构与功能

叉头框(forkheadbox,Fox)蛋白家族是一类DNA结合区具有翼状螺旋结构的转录因子,目前已有17个亚族。Fox蛋白不仅能作为典型的转录因子通过招募共激活因子等调节基因转录,有些还能直接同凝聚染色质结合参与其重构,协同其他转录因子参与转录调节。PI3K-Akt/PKB、TGFβ-Smad和MAPKinase等多条信号通路都可以影响Fox蛋白的磷酸化水平,从而调节其活性。Fox蛋白在胚胎发育、细胞周期调控、糖类和脂类代谢、生物老化和免疫调节等多种生物学过程中发挥作用。     

炭疽杆菌的特性和主要毒力因子

炭疽是由炭疽杆菌芽胞引起的疾病,炭疽杆菌的主要毒力因子在毒力质粒上编码pXO1和pXO2,pXO1184.5kbp大小,编码分泌外毒素的基因,此二个外毒素为二亚单位毒素,二个A蛋白,致死因子（LF,83kD)和水肿因子（EF,89kD);一个B蛋白,保护因子（PA,85kD);分别由pXO1上的独立基因,Lef,Cya和Pag编码;pXO2为95.3kbp大小的小质粒,携带三个基因,CapB,CapC和CapA,与聚-γ-D谷氨酸构成的荚膜合成有关。     

抗百日咳毒素单克隆抗体与毒素活性的关系

<正> 用骨髓瘤SP 2/0与主要亚单位S_(234)复合物免疫的BALB/C 小鼠脾细胞杂交的杂交株产生了两种不同的单克隆抗体,抗百日咳毒素S_2亚单位抗体命名为 9G8,抗S_2和S_3亚单位抗体命名为11E6。 11E 6对S_2和S_3都能结合,可能表示在S_2和S_3之间存在着共同抗原性。1B7和3F10能中和百日咳毒素的 ADP-核糖转化活性或S1,而9 G 8和11E 6不能中和。 1B7表现出对百日咳毒素的白细胞促进活性、胰岛激活性、渗透性活性及CHO细胞凝集性有很有效的中和作用,而 3 F10不能中和,虽然两种抗体抗ADP-核糖转移活性的活性相同。 11E6有中和白细胞促进活性、胰岛素活性、CHO凝集活性和血凝活性的活性,而无中和渗透性活性的作用。9G8有轻微的中和白细胞促进活性和CHO细胞凝集活性的作用。     

无细胞百日咳菌苗的效力试验

<正>近十年来,已研究开发了若干种无细胞百日咳菌苗,并有望取代当今使用中的全细胞菌苗。百日咳菌苗有多种抗原,如百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、菌毛混合物(Fim2+3)及69KDa外膜蛋白是无细胞菌苗之所需组分。最近在美国开展了旨在比较全细胞和13种无细胞菌苗免疫原性和反应原生力2期临床试验。这些无细胞菌苗或只含有PT,或由PT与上述的1种或1种以上的抗原组合而成,并已通过化学处理或对其菌体作遗传学修饰消除了毒注。进入2期临床试验的无细胞菌苗,不     

霍乱肠毒素A2亚单位15肽(10一24)的合成及其有关生物活性初步测定

本文根据Merrifleld固相方法,人工合成了霍乱肠毒素A2亚单位第10—24位氨基酸序列。合成中采用树脂一氯甲烷为载体,双环己基碳化二亚胺(D．C．C．I)作为连结剂。最终合成产物经过高压液相氨基酸分析证实：含有A。亚单位第10—24位十五个氨基酸组成成分,经初步活性测定证实有抗原性;能激发家兔产生特异性抗体,在琼脂双扩散试验中能产生抗原抗体特异性沉淀反应。它不具有改变血管通透性的毒性活力,小鼠皮肤反应阴性。肠袢结扎试验显示：不引起肠液贮留;当与B亚单位结合后,在肠内可抑制霍乱毒素的作用。