多重耐药伤寒沙门菌耐药基因的研究

目的 检测多重耐药伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因定位。方法 随机选取实验室保存的5株耐药菌和1株敏感菌,用纸片扩散法检测对12种抗菌药物的敏感性。用利舍平抑制试验检测菌株是否存在药物外排系统。PCR法检测TEM型β-内酰胺酶基因、aac(6′)-Ⅰb和aac3-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因、qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因、catA和catB氯霉素乙酰基转移酶基因以及cmlA氯霉素外排泵蛋白基因等7种耐药基因。结果 5株多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、复方磺胺甲噁唑及氯霉素等8种抗菌药物全部耐药,对美罗培南、头孢哌酮、头孢吡肟全部敏感;对头孢噻吩中度敏感。1株无质粒pRST98的菌株对上述药物全部敏感。利舍平抑制试验均为阴性。4株耐药菌TEM型β-内酰胺酶基因检测为阳性。全部耐药菌株aac3-Ⅱ、qacEΔ1-sul1、catA基因均为阳性,而aac(6′)-Ⅰb、catB和cmlA基因均为阴性。 结论 多重耐药伤寒沙门菌质粒pRST98上同时存在多种耐药基因, 是导致菌株同时对多种结构各异的抗生素耐药的原因。     

类杆菌耐药基因转移的分子生物学研究进展

类杆菌耐药基因转移的分子生物学研究进展华西医科大学传染病学教研室成都６１００４１包勇范昕建类杆菌是人类肠道中数量最多的条件致病菌,其耐药菌株局部流行提示类杆菌存在耐药因子。７０年代末发现大肠杆菌氨苄青霉素耐药基因可向类杆菌作属间转移,克林霉素、红霉...     

耐药微生物和抗生素耐药基因与全健康

因人类的各种活动,耐药微生物和抗生素耐药基因在“人-动物-环境”界面发生跨物种和跨生境的传播。将人类、动物和环境视作有机整体的“全健康”（One Health）理念有望成为解决这种传播的有效策略。抗生素及其代谢活性产物在环境中富集,再经动物及动物制品传播到人,产生耐药微生物并造成耐药基因的传播。本文综述了人-动物-环境界面耐药菌和抗生素耐药基因传播的流动与循环,总结了我国和其他国家应对抗生素耐药性问题的政策,倡导更多的国家和地区将“全健康”理念和方法用于控制抗生素耐药性传播;通过医疗卫生部门、食品药品监督管理部门、农林渔牧部门与教育、财政等多部门合作来应对抗生素耐药性的全球挑战。     

耐药基因数据库概述

抗生素是人类历史上的革命性发现,其临床应用挽救了无数患者的生命。但是随着抗生素的广泛使用和滥用,越来越多的病原菌产生了耐药性,甚至出现了具有多重耐药性的"超级细菌"。在人类与病原菌斗争的军备竞赛中,人类即将面临无药可用的境地。针对微生物的耐药性、耐药机制及耐药性传播的研究吸引了众多科研工作者的目光,各种耐药基因数据库以及耐药基因分析工具应运而生。文中对目前耐药领域的基因数据库进行收集整理,从数据库类型、数据特征、耐药基因预测模型以及可分析序列的类型等方面对这些数据库进行论述和介绍。此外,文中对抗金属离子和抗杀菌剂的基因数据库也有所涉及,将为如何选择及使用耐药基因数据库提供参考和帮助。     

白色念珠菌氟康唑耐药相关基因研究进展

近 2 0年来由于临床上对癌症患者、器官移植患者大量使用化疗药物、广谱抗生素和免疫抑制剂 ,以及艾滋病 (AIDS)的流行 ,使深部真菌感染的发生率在免疫受损的病人群体中急剧升高。深部真菌感染已日益成为一种常见病、多发病 ,并已逐渐成为这类疾病患者死亡的主要原因之一。深部真菌感染中最常见菌属是念珠菌属 (Candidaspecies) ,其中以白色念珠菌 (Candidaalbicans)为最常见菌种。目前临床上常用的抗真菌药物有两大类 :干扰真菌细胞膜脂质合成的药物(二性霉素B ,唑类药物 )和干扰真菌核酸合成的药物 (5 氟胞嘧啶 )。由于唑类药物中的氟…     

金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因检测

目的 了解温州地区临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)的耐药特点,探讨SA中耐β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类药物耐药基因及耐消毒剂基因(qacA)的存在情况.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)法对SA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、四环素类基因和耐消毒剂基因检测.结果 PCR结果显示94株SA中耐药相关基因检出率mecA 53.2％、aac(6’)/aph(2")68.1％、aph(3’)-Ⅲ 37.2％、tetM 53.2％和qacA 7.4％,其中59株MRSA的耐药相关基因检出率分别为mecA 83.1％、aac(6’)/aph(2")86.4％、aph(3 ′)-Ⅲ 42.4％、tetM 76.4％和qacA 8.5％.结论 多数SA菌株存在耐β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类等多种抗生素耐药基因,具有多重耐药特征,但尚未出现明显耐消毒剂状况.     

结核分枝杆菌的耐药基因及其相关分子机制

结核分枝杆菌原发性和继发性耐药是当前控制和治疗结核病面临的重要问题,随着分子遗传学的发展,已经阐明了结核分枝杆菌耐药的分子基础是染色体的突变,影响了药靶本身或激活了药物前体的细菌酶,造成MTB的耐药。本文主要就MTB对其常用药物的耐药机制展开讨论,以便正确认识MTB对不同药物的耐药机制,建立快速检测耐药结核分枝杆菌基因型的分子生物学方法。     

耐万古霉素肠球菌基因分型及耐药机制的研究进展

近年来肠球菌的耐药性呈上升趋势,已引起越来越多的临床医生和微生物学家的重视。目前,肠球菌对抗生素的敏感性以糖肽类最高,但20世纪90年代以来,国内、外均报道了耐万古霉素的肠球菌。耐药菌株的增多给临床治疗带来了较大困难,因此,对耐万古霉素肠球菌耐药机制的探讨尤为重要。基于对万古霉素和替考拉宁的耐药水平、诱导性及转移性的不同,对糖肽类抗生素耐药的肠球菌已报道5类为获得性耐药肠球菌,1类为固有耐药肠球菌。本文就耐万古霉素肠球菌的基因分型与耐药机制的研究进展作一综述。     

结核分枝杆菌的耐药基因及其相关分子机制

结核分枝杆菌原发性和继发性耐药是当前控帝】和治疗结核病面临的重要问题,随着分子遗传学的发展,已经阐明了结核分枝杆菌耐药的分子基础是染色体的突变,影响了药靶本身或激活了药物前体的细菌酶,造成MTB的耐药。本文主要就MTB对其常用药物的耐药机制展开讨论,以便正确认识MTB对不同药物的耐药机制,建立快速检测耐药结核分枝杆菌基因型的分子生物学方法。     

奶牛源MRSA肠毒素基因、耐药基因及分子分型分析

为了解宁夏地区奶牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的肠毒素基因和耐药基因分布及其分子流行病学特征,本研究通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术对前期分离于宁夏地区的9株奶牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)进行了18种肠毒素基因和16种耐药基因的检测,同时采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)、正向重复序列(direct-repeat unit, dru)和辅助基因调节因子(accessory gene regulator, agr)分子分型技术对MRSA菌株进行分型研究。结果显示所有MRSA菌株均携带经典型肠毒素基因和新型肠毒素基因,共检出12种肠毒素基因,其中selk基因的检出率最高,达到了100%,未检出see、selj、selo、selp、ser和selu基因;11种耐药基因被检出,其中norA、gyrA、grlA和blaZ 4种基因的检出率均达到了100%,未检出tet (O)、optrA、Lin (A)、fexA和cfr基因。PFGE分型结果显示受试菌株间亲缘关系较近;dru分型检出dt11v和dt10a两种型,其中以dt11v(77.8%, 7/9)为主;agr分型主要为agr-Ⅰ型(88.9%, 8/9),agr-Ⅱ型仅有1株。研究表明宁夏地区奶牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的肠毒素基因和耐药基因分布广泛,菌株间亲缘关系较近,agr-Ⅰ-dt11v为MRSA菌株中的流行基因型。这为以后宁夏地区奶牛源MRSA的产毒性、耐药性和分子流行病学特征的进一步研究提供理论依据。     

禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药基因检测及分子分型

【背景】金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,在动物和人身上能引起一系列疾病。【目的】了解安徽省不同地区禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药性的情况及基因分型特征。【方法】以安徽不同地区的病禽肝脏作为标本,分离鉴定得到103株多重耐药金黄色葡萄球菌,并进行耐药基因型检测和ERIC-PCR分子分型。【结果】耐药菌株从三重到八重耐药均有分布,主要集中在五重(43/103)、四重(21/103)和六重耐药(22/103)。药敏结果显示,β-内酰胺类的耐药率最高(79.6%),氨基糖苷类次之(71.8%)。耐药基因检出率由高到低分别为mec A(92.2%)、aac(6′)/aph(2″)(76.7%)、ermC(37.9%)、ermA(13.6%)和fem A(3.9%)。ERIC-PCR分子分型获得6种不同类群,优势流行菌群为类群Ⅱ(38/103)。【结论】安徽地区金黄色葡萄球菌存在较严重的耐药性,氨基糖苷类、β-内酰胺类和大环内酯类抗生素的耐药基因携带率较高。分型结果表明安徽部分区域耐药金黄色葡萄球菌具有遗传多样性,但耐药谱与ERIC-PCR分子分型无明显关联。     

基因逆转肿瘤多药耐药的研究进展

化疗在恶性肿瘤的综合治疗中占有非常重要的地位,而耐药性是严重影响肿瘤病人化疗效果及生存的主要原因之一,其中多药耐药(multi-drug resistance,MDR)最具临床意义。多药耐药是指肿瘤细胞对某一化疗药物产生耐药性后,对其他化学结构及机理不同的化疗药物也产生交叉耐药性。研究表明MDR是一个多阶段发展、多因素参与的复杂事件。逆转肿瘤多药耐药是目前肿瘤化疗的研究热点之一。近年随着基础科学研究的不断深入,基因逆转肿瘤多药耐药的研究已从分子水平上,定点、多位点阻断多药耐药基因的表达,已取得一些显著的进展。本文对肿瘤多药耐药机制以及逆转肿瘤多药耐药性的相关基因做一简要综述。     

多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及其耐药基因分析

目的:探讨多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Ab)的耐药性及其耐药基因,为临床合理选择抗菌药物提供依据。方法:回顾性分析2018年1月至2018年12月鲍曼不动杆菌感染的住院患者信息。使用VITEK-32微生物分析仪/梅里埃药敏卡片GN13鉴定MDR-Ab 95株。采用聚合酶链式反应(多重PCR)检测MDR-Ab携带相关耐药基因。结果:95株MDR-Ab对头孢类抗菌药物耐药率为100%。对氨苄西林-舒巴坦和头孢哌酮-舒巴坦耐药率分别为95.79%和81.05%,对美罗培南和亚胺培南耐药率分别为56.84%和57.89%,对庆大霉素和阿米卡星耐药率均为88.42%,对环丙沙星和左氧氟沙星耐药率分别为100%和88.42%,对四环素、米诺环素、替加环素耐药率分别为87.37%、16.84%和9.47%,对多粘菌素B耐药率为1.05%。95株MDR-Ab中携带β-内酰胺酶中A类酶耐药基因TEM、PER分别95株和25株,D类酶耐药基因OXA-51、carO和adeB各95株,OXA-23基因90株。携带消毒剂耐药基因qacE 60株。携带16S r RNA甲基化酶耐药基因armA 75株。每株MDR-Ab除携带TEM+carO+adeB+OXA-51四种基因外,另同时携带四种基因20株(21.05%),三种基因38株(40.00%)。结论:MDR-Ab对多种抗菌药物的耐药率较高,携带的耐药基因型主要为TEM、carO、adeB及OXA-51。携带多种耐药基因是MDR-Ab耐药重要原因。加强医院感染防控、合理应用抗菌药物对于延缓泛鲍曼不动杆菌耐药性发展具有重要的临床意义。     

以抑制消减杂交法筛选肿瘤耐药相关基因

避开化疗诱导多药耐药性的常规方法,建立烷基磷脂类化合物（十六烷基磷酸胆碱,HePC)诱导人上皮性肿瘤细胞系产生交叉耐药。旨在以新的角度认识肿瘤多药耐药性,揭示新的调控机制。利用抑制消减杂交技术,对库进行克隆分析,在获得的可分析的78个克隆中,27%没有同源基因片段或同源性很低,暂定为“新基因”;14%具有染色体明确定位,认为是化疗敏感肿瘤KB细胞所特有的cDNA片段;19%在人类EST库库MGC和CGAP中出现,可能是肿瘤细胞特有基因;发现与耐药相关的巳知功能基因高达40%。     

基于基因组数据分析的细菌耐药基因识别与表型预测

利用基因组数据和生物信息学分析方法,快速鉴定耐药基因并预测耐药表型,为细菌耐药状况监测提供了有力辅助手段。目前,已有的数十个耐药数据库及其相关分析工具这些资源为细菌耐药基因的识别以及耐药表型的预测提供了数据信息和技术手段。随着细菌基因组数据的持续增加以及耐药表型数据的不断积累,大数据和机器学习能够更好地建立耐药表型与基因组信息之间的相关性,因此,构建高效的耐药表型预测模型成为研究热点。本文围绕细菌耐药基因的识别和耐药表型的预测,针对耐药相关数据库、耐药特征识别理论与方法、耐药数据的机器学习与表型预测等方面展开讨论,以期为细菌耐药的相关研究提供手段和思路。     

肠球菌中糖肽类耐药基因及其调控

肠球菌对糖肽类耐药表分ＶａｎＡ，ＶａｎＢ和ＶａｎＣ３种，ＶａｎＡ型最常见，耐药质粒携带转座子Ｔｎ１５４６，Ｔｎ１５４６带有一系列耐药基因，它们的基因产物共同作用，导致菌株对糖肽类药物耐药。其中连接酶（ＶａｎＡ）和脱氢酶（ＶａｎＨ）催化合成Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌａｃ，替代Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ连接入肽聚糖前体，阻止了糖肽与细胞壁的结合，Ｄ，Ｄ－二肽酶（ＶａｎＸ）通过水解Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ而抑制正常肽     

链霉素耐药结核分支杆菌rpsL基因分析

结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis.TB)的rpsL基因突变往往与链霉素（Streptomycin.SM)耐药变异有关。选择了77例TB临床分离株,应用BACTEC460快速培养系统进行常规药敏实验,同时针对rpsL基因进行聚合酶链反应（PCR）,对PCR产物进行单链构型多态性（SSCP）分析,MboⅡ酶切后的限制性片段长度分析（RFLP）和序列测定分析。常规药敏实验显示：有20株为SM敏感,57株为耐药。SSCP显示：34株的rpsL基因为野生型,43株为突变型。与常规药敏相比SSCP的特异性与阳性预期值分别为95％和98％。RFLP显示：81.4%的突变类型使其失去MboⅡ酶切位点。序列测定显示：失去MboⅡ酶切位点的突变为rpsL基因43位密码子存有单碱基突变（AAG→AGG）。实验结果表明,TB对SM耐药变异与rpsL基因突变相关,其中第43位密码子的突变是最常见的原因。     

鲍曼不动杆菌的耐药性检测及泛耐药菌株的耐药基因研究

目的考察临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性并对泛耐药菌株的耐药基因进行检测。方法用纸片扩散法对60株临床分离鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,并用PCR法检测8株泛耐药菌株携带7种耐药基因OXA-51、OXA-23、OXA-24、OXA-58、aac(3)-Ⅰ、gyr A、abe M的情况。结果所分离的鲍曼不动杆菌对临床常用的β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、四环素类抗生素、磺胺类抗菌药及喹诺酮类抗菌药均产生耐药性;在8株泛耐药鲍曼不动杆菌中OXA-51、OXA-23、OXA-58、gyr A、abe M基因检测均全部呈阳性;OXA-24基因检测均呈阴性;aac(3)-I基因检测有5株呈阳性,3株呈阴性。结论鲍曼不动杆菌耐药情况严重,其耐药机制与多种耐药基因密切相关。     

氨基糖苷类高水平耐药肠球菌耐药基因的检测与研究

目的 研究氨基糖苷类高水平耐药(high-level aminoglycoside-resistant,HLAR)肠球菌临床株表面蛋白基因(esp)、Ⅰ类整合酶基因(IntI1)、耐氯霉素肠球菌乙酰转移酶基因(cat)等三种耐药基因的流行情况及肠球菌对常见抗菌药物的耐药情况.方法 对53株肠球菌进行菌株鉴定和药敏试验,用PCR法扩增肠球菌esp基因、IntI1基因和cat基因,阳性产物送测序并对序列进行分析.结果 53株HLAR肠球菌中,esp基因阳性率为28.3％,Ⅰ类整合酶基因阳性率为49.1％,没有检测到cat基因.菌株对多种抗菌药物的耐药率为:氨苄西林62.3％、环丙沙星75.5％、红霉素94.3％、高水平庆大霉素75.5％、高水平链霉素73.6％、喹努普汀/达福普汀32.1％、四环素66.0％、万占霉素1.9％、利奈唑胺0.结论 肠球菌对常见抗菌药物存在不同程度的耐药,esp基因和IntI1基因与肠球菌耐药性密切相关.     

多耐药肺炎克雷伯菌获得性耐药基因检测及指标聚类分析

目的调查多耐药肺炎克雷伯菌中65种获得性耐药基因和7种可移动遗传元件遗传标记基因的存在状况,以及获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记基因的相关性。方法收集绍兴地区六家医院分离的肺炎克雷伯菌共20株,采用PCR的方法分析65种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药基因和7种转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因,并用指标聚类分析(SPSS法)分析β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类获得性耐药基因与整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因的相关性。结果 20株肺炎克雷伯菌共检测到14种获得性耐药基因(包括6种β-酰胺类获得性耐药基因、6种氨基糖苷类获得性耐药基因、2种喹诺酮类获得性耐药基因)和6种可移动遗传元件遗传标记基因(包括1种整合子遗传标记基因、3种转座子和插入序列基因遗传标记基因、2种接合性质粒遗传标记基因),其余52种基因均未检测到。SPSS法将上述阳性检出基因分成两大簇群。结论绍兴地区六家医院的多耐药肺炎克雷伯菌菌株对抗菌药物的耐药表型与获得性耐药基因相关,且可移动遗传元件的水平转移使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。获得性耐药基因与可移动遗传元件遗传标记基因的指标聚类分析显示:OXA-1、aac(6’)-Ⅰb、qnrB、IMP、aadA5、VEB、KPC、qnrS等基因与接合性质粒遗传标记traA相关,提示这些基因在F接合性质粒上;DHA、aph(3′)-Ⅰ等基因与转座子遗传标记tnpU、tnp513相关,提示它们位于转座子上;TEM-1、aac(3)-Ⅱ、qacE△1与接合性质粒遗传标记trbC相关,提示TEM-1、aac(3)-Ⅱ等基因和Ⅰ类整合子可能位于宽范围接合性质粒上;ant(3″)-Ⅰ、rmtB等基因与ISEcp1较为相关,提示这些基因位于插入序列上。