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限制性内切酶缓冲液诱导人和家兔染色体显带的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
用限制性内切酶AluⅠ、缓冲液或空白处理人染色体标本,发现AluⅠ及缓冲液均能诱导出类C和G带,其中缓冲液诱导的类C带频率虽低于酶原液,但明显高于空白对照; 而G带的诱导率无明显差异。此外,用限制性内切酶H ae Ⅲ和 HinfⅠ及其缓冲液处理中国小型白兔外周血染色体标本,也诱导出了相应的类C和G带。
Abstract:C-and G-bands were induced in human chromosome by both AluI and its buffer after treating the samples with AluI,buffer and blank control.The frequence of C-band induced by buffer was lower than that by AluI(P<0.05),but much higher than that by blank control(P<0.001).There was no significant difference among the frequencies of G-band induced by AluI,buffer and blank control(P>0.05).Also HaeIII,and their buffers were capable of inducing C-and G-bands on chromosome of China small-sized domestic rabbits. 相似文献
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目前对那些在原核生物中看来普遍存在的特异位点核酸内切酶的看法,由于探索重组DNA技术学的工具而受到了严重地歪曲。仅分离到了具有识别3—7个特异碱基范围序列的酶。当然这些内切酶在复合组基因的分析、“逆转遗传学”(“reverse genetics”)的兴起以及在真核中基因表达区的最近突破,特别是在了解肿瘤病毒RNA的作用过程中和免疫球蛋白的表达中基因重排等方面的用途上在过去的五年深为分子和细胞生物学家们体会到了。已发现了在识别顺序中有交错、对称、不对称及简并巨大多样性。同时考虑到特异位点重组和(或)DNA降解方面的遗传学资料,说明我们现在所收集的内切酶只能代表一个程度极其复杂的特异性窄谱。这些酶本身也为生物物理学家们和生物化学家们提供了探索DNA—蛋白质相互作用的微妙问题的丰富材料。 相似文献
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柯为 《中国生物工程杂志》1983,3(1):41-44
限制性核酸内切酶(简称限制酶)是遗传工程研究不可缺少的工具酶。曾作过一些介绍,新酶不断地扩大,这里仅就Boehringer Mannheim公司商品化生产的几种限制酶列表做一介绍: 相似文献
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目前对那些在原核生物中看来普遍存在的特异位点核酸内切酶的看法,由于探索重组DNA技术学的工具而受到了严重地歪曲。仅分离到了具有识别3-7个特异碱基范围序列的酶。当然这些内切酶在复合组基因的分析、“逆转遗传学”(“reverse genetics”)的兴起以及在真核中基因表达区的最近突破,特别是在了解肿瘤病毒RNA的作用过程中和免疫球蛋白的表达中基因重排等方面的用途上在过去的五年深为分子和细胞生物学家们体会到了。已发现了在识别顺序中有交错、对称、不对称及简并巨大多样性。同时考虑到特异位点重组和(或)DNA降解方面的遗传学资料,说明我们现在所收集的内切酶只能代表一个程度极其复杂的特异性窄谱。这些酶本身也为生物物理学家们和生物化学家们提供了探索DNA-蛋白质相互作用的微妙问题的丰富材料。 相似文献
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芽孢杆菌中的限制性核酸内切酶 总被引:3,自引:0,他引:3
我们从66株国内收集的芽孢杆菌中筛选出10株菌株,它们含有限制性核酸内切酶活力。这些酶已经分别部分纯化并鉴定了其专一性。Bsp211Ⅰ、Bsp226Ⅰ及Bce71Ⅰ是HaeⅢ的异源同功酶,识别顺序是■,Bsp211Ⅰ的切点如箭头所示。Bsp105Ⅰ、Bsp67Ⅰ、Bsp64Ⅰ、Bsp74Ⅰ及Bsp76Ⅰ和MboⅠ有相同的识别顺序:■。此顺序中腺嘌呤被甲基化后,Bsp105Ⅰ与MboⅠ一样不能切割,而Bsp67Ⅰ不论此顺序中腺嘌呤是否甲基化均能识别并切断,它们的切点如箭头所示。Bsp63Ⅰ及Bsp78Ⅰ是PstⅠ的异源同功酶,识别顺序是:■,Bsp63Ⅰ的切点如箭头所示。 相似文献
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目前有关限制性内切酶Not I的性质特征及功能机制等方面的研究日渐增多,但商品化Not Ⅰ及某些限制性内切酶的价格依然居高不下,其主要原因在于表达量低、提纯程序繁琐、得率低等问题的存在.为探索限制性内切酶Not Ⅰ提纯的新工艺,从豚鼠耳炎诺卡菌(Nocardia otitidiscaviarum)中克隆出限制性内切酶Not Ⅰ的基因并使之在大肠杆菌中高效表达.首先将由成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)中克隆所得甲基化酶Eag I M(Eag I methylase gene)基因连接到pBR322载体上,转化大肠杆菌ER2566,将豚鼠耳炎诺卡菌中克隆所得的限制性内切酶Not IR(Not I restriction endonuclease gene)基因连接到表达载体pACYC184-PT7上,将此重组质粒转化到上述已转入甲基化重组质粒pBR322-Eag I M的ER2566中,构建成Not I蛋白表达菌ER2566[pBR322-Eag I M,pACYC184-PT7-Not I R].重组工程菌经IPTG诱导可表达限制性内切酶Not Ⅰ,并对诱导条件进行优化使之以可溶形式高效表达.应用(A)KTA purifier 100蛋白纯化系统,对纯化工艺进行创新,通过DEAE Sephrose FF离子交换层析、phenyl HP疏水层析和Superdex 75 10/300GL分子筛层析对蛋白进行提纯.纯化后Not Ⅰ经酶活力及纯度鉴定,其比活力为1.37 × 10(6)U/mg,提纯35倍,得率为17.8%,产量达9.8×10(6)Units /g wet cell,提纯时间缩减为原来的1/10,在产量和效率上较以前报道均有很大提高.该纯化工艺的新方法,为实验室制备及工业化生产Ⅱ型限制性内切酶提供了进一步的借鉴.且该酶的成功获得为后续研究提供了材料,为更多新发现内切酶的成功克隆提供了参考. 相似文献
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利用基因重组技术的研究以及产品的制造得到广泛普及,其中的有功之臣就是限制性核酸内切酶。具有识别特定的碱基序列并加以切割的功能。日本东京大学的小宫山真教授为我们就其有关机理及应用用研究进行阐述。[编者按] 相似文献
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英国剑桥的Qnadrant分绍了他们的第一批产品,一系列稳定的分子生物学试剂。这些稳定的限制性内切酶不需经冷冻、冷藏或冰冻干燥,在室温下即可保持完全的活性,利于在实验室中贮存。同时解决了酶的运输问题,酶可以无水构型保留全部活性到达使用者的实验室,勿需用冰或干冰进行复杂而昂贵的包装。将限制性内切酶预首分成合适的等分,以缩短准备时间并减少浪费,同时排除了交叉感染的可能性。而且可选择最适的酶活性进行克隆、少量制备和基因组DNA消化。 Quadrant提供的限制性内切酶有2种类型:微离心管和96孔微量培养板。对于高容量基因定位者来说,微量培养板独具优点,提高了生产能力并节省了时间,在两次使用之间能够贮存培养板。单一等分试 相似文献
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MspI内切酶是Ⅱ型限制内切酶。该酶首先是由R. J. Roberts从Moraxella species中提纯出来的,但有关该酶的纯化方法目前在国内外尚无报道。我们参照Roberts等人提取其它内切酶的方法,经过适当改进,从克隆MspI基因的大肠杆菌中分离、纯化了MspI。 相似文献
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我们从66株国内收集的芽孢杆菌中筛选出10株菌株,它们含有限制性核酸内切酶活力。这些酶已经分别部分纯化并鉴定了其专一性。Bsp211Ⅰ、Bsp226Ⅰ及Bce71Ⅰ是Hae Ⅲ的异源同功酶,识别顺序是,Bsp211Ⅰ的切点如箭头所示。Bsp105Ⅰ、Bsp67Ⅰ、Bsp64Ⅰ、Bsp74Ⅰ及Bsp76Ⅰ和MboⅠ有相同的识别顺序:此顺序中腺嘌呤被甲基化后,Bsp105Ⅰ与MboⅠ一样不能切割,而Bsp67Ⅰ不论此顺序中腺嘌呤是否甲基化均能识别并切断,它们的切点如箭头所示。Bsp63Ⅰ及Bsp78Ⅰ是PstⅠ的异源同功酶,识别顺序是:Bsp63Ⅰ的切点如箭头所示。 相似文献
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目前有关限制性内切酶NotⅠ的性质特征及功能机制等方面的研究日渐增多,但商品化NotⅠ及某些限制性内切酶的价格依然居高不下,其主要原因在于表达量低、提纯程序繁琐、得率低等问题的存在。为探索限制性内切酶NotⅠ提纯的新工艺,从豚鼠耳炎诺卡菌(Nocardia otitidis-caviarum)中克隆出限制性内切酶NotⅠ的基因并使之在大肠杆菌中高效表达。首先将由成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)中克隆所得甲基化酶EagⅠM(EagⅠ methylase gene)基因连接到pBR322载体上,转化大肠杆菌ER2566,将豚鼠耳炎诺卡菌中克隆所得的限制性内切酶NotⅠR(NotⅠrestriction endonuclease gene)基因连接到表达载体pACYC184-PT7上,将此重组质粒转化到上述已转入甲基化重组质粒pBR322-EagⅠM的ER2566中,构建成NotⅠ蛋白表达菌ER2566 。重组工程菌经IPTG诱导可表达限制性内切酶NotⅠ,并对诱导条件进行优化使之以可溶形式高效表达。应用KTA purifier 100蛋白纯化系统,对纯化工艺进行创新,通过DEAE Sephrose FF离子交换层析、phenyl HP疏水层析和Superdex 75 10/300 GL分子筛层析对蛋白进行提纯。纯化后NotⅠ经酶活力及纯度鉴定,其比活力为1.37×106U/mg,提纯35倍,得率为17.8%,产量达9.8×106 Units /g wet cell,提纯时间缩减为原来的1/10,在产量和效率上较以前报道均有很大提高。该纯化工艺的新方法,为实验室制备及工业化生产Ⅱ型限制性内切酶提供了进一步的借鉴。且该酶的成功获得为后续研究提供了材料,为更多新发现内切酶的成功克隆提供了参考。 相似文献
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限制性核酸内切酶与DNA相互作用研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白质对DNA识别的模体中,除了锌指结构、螺旋—转角—螺旋、亮氨酸拉链和β带外,近年来发现,Ⅱ型限制性内切酶与DNA作用的模体有许多特别之处。通过对EcoRI、BamHI、EcoRV等与DNA复合物的空间构象、一级结构分析,发现酶分子存在催化性裂缝,并且氨基端形成臂结构包绕DNA;同时DNA发生构象变化、螺旋扭结。这些有趣的结构有利于酶对底物的特异性结合和催化作用。 相似文献
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东北梅花鹿染色体限制性内切酶显带 总被引:2,自引:0,他引:2
采用限制性内切酶Hae Ⅲ、Hind Ⅲ分别处理梅花鹿中期染色体标本,发现HaeⅢ处理标本21h左右,显出类似G带、C带带型,第1、4、11、18、27、28、31对染色体的结构异染色质区对HaeⅢ敏感而浅染,而HindⅢ处理标本18h左右能诱导梅花鹿中期染色体显出类似G带、C带,第2、6、15、18、29、32对染色体的结构异染色质区对HindⅢ较敏感而浅染,性染色体Y对HaeⅢ敏感呈浅染,性染色体X对HindⅢ敏感呈浅染。表明东北梅花鹿12对常染色体和两条性染色体结构异染色质在这两种酶处理时表现出异质性。 相似文献