虎纹蛙促性腺激素释放激素分泌调节的离体研究

利用离体静态孵育系统和放射免疫测定法,研究了性成熟的虎纹蛙雌蛙离体的视前－下丘脑－正中隆起（P－H－ME）片段促性腺激素释放激素（GnRH)的分泌调节。结果表明：γ－氨基丁酸（GABA）对成熟前期蛙离体P－H－ME片段的哺乳类GnRH（mGnRH)的释放有显著的刺激作用;随着GABA作用浓度的增加,刺激作用逐渐增强。100μmol/L的多巴胺（DA）及1μmol/L和10μmol/L的雌二醇(E2）则显著抑制鸡ⅡGnRH(cGnRH-Ⅱ)的释放。10μmol/L和100μmol/L的睾酮（T）以及10μmol/L的E2显著刺激冬眠期蛙P－H－ME片段mGnRH的释放。这些结果表明,GABA,DA及E2和T对虎蚊蛙GnRH的释放有直接的调节作用。     

β-肾上腺素能受体在NO抑制小鼠回肠自主收缩中的作用

目的：观察一氧化氮（nitric oxide,NO）供体左旋精氨酸（L-argnine,L—Arg）对小鼠回肠自主收缩幅度的影响,探讨肛肾上腺素能受体在NO抑制小鼠回肠自主收缩中的作用。方法：应用张力换能器记录标本自主收缩的方法,以回肠肌条自主收缩幅度变化为指标,观察一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）抑制剂L-NNA,可溶性鸟苷酸环化酶（soluble guanylyl cyclase,sGC）抑制剂ODQ（1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-aJquinoxalin-1-one）,β-肾上腺素能受体激动荆异丙肾上腺素（Isoprenaline,ISO）和拮抗剂普萘洛尔（Propranolol）对NO作用的影响。结果：①L—Arg抑制小鼠回肠自主收缩幅度,呈浓度依赖性。②L-NNA（3×10^-4mol／L）,ODQ（3×10^-4mol／L）均减弱L-Arg的抑制效应。③Propranolol（3×10^-6mol／L）明显减弱L—Arg的抑制效应。④ISCO（1×100mol／L）明显增强L—Arg的抑制效应。而Propranolol（3×10^-6mol／L）和ISCO（1×10^-7mol／L）孵育组,L—Arg的抑制作用无明显变化。结论：L-Arg经NOS催化生成NO后经cGMP途径发挥对小鼠回肠自主收缩的抑制作用,良受体途径也部分参与了NO的作用过程。     

β-内啡肽对妊娠早期人胎盘绒毛hCG与孕酮分泌功能的影响

实验采用庄临之等建立的人胎盘绒毛组织无血清培养方法。将妊娠7—9周人工流产的人胎盘绒毛剪成1mm左右植入培养瓶中,每瓶加入2mlMcCoy's 5a培养液培养三天,更换培养液时分别加入不同剂量(10~(-11)—10~(-7)mol/L)的β-内啡肽,继续培养24小时后收集培液,用放射免疫法测定hCG与孕酮的含量。 结果表明β-内啡肽对妊娠早期人胎盘绒毛分泌hCG     

米非司酮对离体大鼠垂体细胞促黄体激素分泌的影响及其机制

本实验应用垂体细胞体外培养模型,观察了米非司酮（MP）对GnRH,高浓度细胞外K^ ([K^]e)和蛋白激素C激活剂PMA诱导的LH分泌的影响,结果证实MP可以剂理和时间依赖方式抑制GRH诱导的LH分泌,并可拮抗P 调节GnRH诱导的LH分泌效应,同时发现10^-7mol/L MP短时间处理4h能抑mmol/LKCl和10^-8mol/LMA诱导的LH分泌,而10^-7mol/LP短时间处理则起促进作用,当处理时间延长为52h时,P对60mmol/LCl和10^-8mol/LPMA诱导的LH分泌无明显作用,P也仅对60mmol/LKCl刺激的LH分泌起抑制作用,但不影响10^-8mol/L PMA诱导的LH分泌,当P和MP同时处理时,则MP可逆转P对高[K^ ]e和PMA诱导的LH分泌的调节作用,表明MP影响GnRH诱导的LH分泌的机制可能与MP影响电压依赖性钙离子通道和PKC的活性有关。     

一氧化氮在17-β雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖和原癌基因c -fos表达中的作用

实验利用大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC)作为模型,观察17-β雌二醇（E2）对VSMC增殖和原癌基因c-fos表达的影响,并探讨VSMC源性一氧化氮（NO）在基中的作用,检测指标包括NO释放的测定,细胞计数、^3H-Tdr掺入,噻唑蓝（MTT）测定和c-fosmRNA表达,结果显示,E2（10^-12-10^-8mol/L)呈浓度依赖性地促进VSMC中NO的释放;10^-8mol/LE2能明显抑制10%小牛血清（FCS）和10^-7mol/L内皮素-1（ET-1）诱导的细胞增殖和DNA合成,E2的抑制作用均可被雌激素受体（ER）拮抗剂tamoxifen(10^-7mol/L)和一氧化氮合酶抑制剂L-NAME（10^-6mol/L)明显减轻;E2（10^-8mol/L)可明显抑制10^-7mol/LET-1诱导的VSMCc-fos表达,这种抑制作用可被L-NAME（10^-6mol/L)明显减轻,这些结果提示E2能抑制VSMC增殖和原癌基因c-fos表达,这种促进VSMC的NO释放密切相关,而且该作用至少部分通过ER介导。     

灵芝原生质体制备、再生及融合的研究

报道不同菌龄、酶液浓度、稳渗剂对灵芝原生质体产率及不同种类、不同浓度的稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,诱变后具抗药性标记的“中国红灵芝”菌种（mH1）原生质体制备时菌丝最适菌龄为48小时,酶液浓度为3％,稳渗剂以0．6mol／L蔗糖为佳;诱变后具抗药性标记的“韩国红灵芝”（mK1）原生质体制备时菌丝最适菌龄为40小时,酶液浓度为1％,稳渗剂为0.4mol／L甘露醇时原生质体产率最高。mH1,mK1原生质体均以蔗糖作稳渗剂再生率较高,其最佳浓度为0．6mol／L。在该条件下mH1原生质体再生率为3．20×10-2,mK1为5．40×10-2。在此基础上,以30％的PEG作为融合诱导剂进行灵芝原生质体融合,并获得了融合子,融合率为140×10-2。     

奥帕曲拉对内皮素-1诱导的心脏成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨奥帕曲拉（omapatrilat,OMA）对内皮素-1（ET-1）诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的干预作用及可能机制．方法：经差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为7组：对照组,ET-1组,OMA组,ET-1＋OMA10^-9mol／L组,ET-1＋OMA10^-8mol／L,ET-1＋OMA10^-7mol／L组．ET-1＋OMA10^-6mol／L组.采用四氮唑盐（MTT）比色法测定CFs数目,流式细胞分析仪（FCM）检测CFs细胞周期,液体闪烁计数仪测定CFs^3H-脯氨酸掺入率,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO含量：结果：与对照组相比,10^-7mol／LET-1能显著增加CFs的吸光度A190值及[^3H]-Pro掺入率,降低CFs生成NO的量（均P〈0．01）,10^-9-10^-6mol／L OMA呈浓度依赖性的降低ET-1诱导的A190值和[^3H]—Pro掺入率升高（均P〈0．01）,促进CFsNO的生成（均P〈0．05）;细胞周期分析表明ET—1能显著提高S期细胞百分率（P〈0．01）,10^-7mol／LOMA抑制ET-1诱导S期细胞百分率上升（P〈0．01）.结论：OMA对ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成有抑制作用,该作用可能和NO生成有关.     

一氧化氮在吲哚昔酚抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察吲哚昔酚（ldoxifene,ldo）对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,并探讨平滑肌源性一氧化氮（NO）在其中的作用。方法：血管平滑肌细胞培养、NO释放的测定、细胞计数和MTT测定。结果：吲哚昔酚可剂量依赖性的促使血管平滑肌细胞NO的释放,10μmol／L吲哚昔酚明显抑制10％胎牛血清（FCS）和10^-7mol／L的ET-1诱导的细胞增殖,吲哚昔酚的抑制作用可被一氧化氮合酶抑制剂L-NAME（100μmol／L）和鸟苷酸环化酶（guanylate cyclase,GC）抑制剂美蓝（methylene blue,MB）（10μmol／L）明显减轻。结论：吲哚昔酚抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与其NO释放密切相关,其中可能有NO-GC-cGMP通路的参与。     

厚叶景天组织传感器的研究

利用厚叶景天的叶和茎组织作为生物催化材料,分别同二氧化碳气敏电极和氨气敏电极组合,研制了L－精氨酸传感器及,L－赖氨酸传感器。两种传感器的线性范围分别为1.0×10^-4 1.O×10^-3mol/L和8．0×10^-5—3.0×10^-3mol/L．检测下限分别为3．2×10^-5mol／L和2.2×10^-5mol/L,响应斜率分别为42.2mV／dec和41．4mv／dec。考察了两种传感器的回收率．结果表明,L－精氨酸传感器和L－赖氨酸传感器的回收率平均值分别为98．6％和101.6％,标准偏差分别为4.6％和4.0％。     

地中海诺卡氏菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分部沉淀、DEAE纤维素-52柱层析和亲和蓝柱层析的方法,分离纯化了地中海诺卡氏菌(Nocardia mediterranei)U-32丙氨酸脱氢酶(ADH),用聚丙烯酰胺凝肢电泳鉴定为单一组份。以聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳测得丙氨酸脱氢酶的分子量为228000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为38000,表明地中海诺卡氏菌U-32丙氢脱氢酶由六个相同的亚基组成。ADH加氨反应最适pH为8．5,脱氨反应最适pH为11．5,ADH的pH稳定范围在pH 7．5-11．5。脱氨反应的最适温度为50℃。ADH的米氏常数KM为：丙酮酸4．88×10-4mol／L;NH+44．03×10-3Mol／L;NADH 6．02×10-5Mol／L;L—Ala7．45×10-3mol／L;NAD+6．67×10-5mol／L。 Hill作图法求得ADH的Hill系数n为：ADH对丙酮酸、NADH和NAD+的Hill系数都为1;对L—Ala和NH4+的Hill系数n值分别为0．52和0．51,ADH对L—Ala和NH+4有负协同效应,由此初步推测ADH是一个调节酶。     

反式激活HIV—1LTR的人疱疹病毒6型（HHV—6）基因片段的初步研究

艾滋病（ＡＩＤＳ）主要是由人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）侵入人体后,破坏人的免疫系统造成的。许多流行病学研究已证明,疱疹病毒与ＨＩＶ的共感染可以导致对ＨＩＶ－１启动子的激活,并加速细胞的病理性反应〔１〕,从而加大个体对ＨＩＶ感染的敏感和加快疾病的进程。人疱...     

血沉标本中人巨细胞病毒DNA的检出

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛标记探针（ｄｉｇ－ｐｒｏｂｅ）检测临床血沉标本中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果表明,人群血标本中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ携带率较高;ＰＣＲ技术较ｄｉｇ－ｐｒｏｂｅ更敏感、快速、简便,二者检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８３．３％和６０．３％;ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率、ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检出率与血沉值高低之间无相关性。     

应用抗体探针对人食管癌组织，Eca－109细胞及其染色体的NHP免疫反应性研究

应用自制的癌非组蛋白（ＮＨＰ）抗体探针,探讨了人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞及其染色体和人食管癌组织的ＮＨＰ免疫反应性。结果表明：①以０．４ｍｏｌ／Ｌ及０．３５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ提取的ＮＨＰ均含１．１４万－４万道尔顿分子量的高速泳动族蛋白（Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＭＧＰ）。②在人食管癌切片标本上癌细胞核、胞质、胞核均呈免疫反应阳性,且胞膜、胞质反应强于胞核。并见到癌巢周缘细胞比癌巢中心的细胞反应较强。③人食管瘤Ｅｃａ－１０９细胞的胞膜、胞质、胞核均呈ＮＨＰ免疫反应阳性,多见胞膜、胞质强于胞核。④人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞的分裂中期染色体上,免疫反应呈阳性。这提示０．４ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ提取的ＮＨＰ含有ＤＮＡ特异结合的ＮＨＰ组分。     

16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达

为了构建HPV16型晚期蛋白重组杆状病毒,并使其在昆虫细胞中获得高效表达.首先构建2株重组杆状病毒转移质粒,分别携带人乳头瘤病毒晚期基因L1及L1和L2,再用线性化的杆状病毒DNA与该重组杆状病毒转移质粒共转染sf9昆虫细胞进行同源重组,获得2株重组杆状病毒.经鉴定该重组病毒中有目的基因存在且可表达所编码的L1或L2晚期蛋白.结果表明HPV16型晚期蛋白在昆虫细胞中获得成功表达,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研制和诊断试剂的研究开发奠定了基础.     

SYNTHESIS AND BIOLOGICAL EVALUATION OF NAD ANALOGS AS HUMAN PYRIDINE NUCLEOTIDE ADENYLYLTRANSFERASE INHIBITORS

NAD analogs modified at the ribose adenylyl moiety, named N-2′-MeAD and Na-2′-MeAD, were synthesized as ligands of pyridine nucleotide (NMN/NaMN) adenylyltransferase (NMNAT). Both dinucleotides resulted selective inhibitors against human NMNAT-3 isoenzyme.     

人肾上腺内肽能神经的超微结构

应用抗生蛋白链菌素一生物素一过氧化物酶复合物的免疫电镜技术,在相邻切片中,分别观察人肾上腺内ＮＰＹ、ＶＩＰ、ＳＰ和ＣＧＲＰ免疫反应神经纤维的超微结构和免疫反应物的定位。ＮＰＹ和ＶＩＰ免疫反应物位于小颗粒羹泡和线粒体外膜,部分嗜铬细胞呈ＮＰＹ免疫反应阳性。ＳＰ和ＣＧＲＰ免疫反应物主要定位于大颗粒囊泡内。ＳＰ和ＣＧＲＰ免疫反应轴突与嗜铬细胞形成对称性或非对称性的轴体突轴。测量了这４种肽能神经末梢的直径,从而推测其来源,并讨论了该４种神经肽对人肾上腺的作用。     

人胎儿脾交错突细胞发育的免疫组织化学研究

用免疫组织化学链亲合素（ＳＰ）显色法研究不同胎龄人胎儿脾中交错突细胞（ＩＤＣ）的形态,分布及数量变化。结果表明：１２周时ＩＤＣ呈散在分布,２８周以后ＩＤＣ逐渐聚集到动脉周围淋巴鞘及与脾小结的交界处和边缘区。ＩＤＣ在胎脾中有两种类型,一种呈圆形,可能是不成熟的ＩＤＣ,另一种有细长的突起,是成熟的ＩＤＣ。ＩＤＣ的数量随着胎龄的增长而增加,特别是在１２～２８周数量迅速增加,２８周后增长减慢。本文对ＩＤＣ在胎脾中的发育特点进行了讨论。     

人白细胞介素12(hIL\|12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达

人白细胞介素12(hIL-12)是细胞介导免疫发生的关键调节因子,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成.利用DNA重组技术,分别构建了含hIL-12p35基因和p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3-p35和pAcAB3-p40.将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒(AcNPVBaculoGold LinearizedBaculovirus)基因DNA共转染昆虫细胞,构建出遗传稳定的重组病毒AcNPV-OCC-hIL-12(p35)与AcNPV-OCC——hIL-12(p40).将两种病毒分别感染Sf9细胞,取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示hIL-12p35和p40两基因均在昆虫细胞中获得表达,且能分泌至胞外.表达产物具有免疫原性.     

人巨细胞病毒先天性中枢神经系统感染小鼠模型的建立

将人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）接种至８￣１２周龄Ｂａｌｂ／ｃ雌雄小鼠腹腔后,交配。等雌鼠临产时剖腹取出胎鼠脑双侧大脑皮层,进行病毒分析、病理学检测及用地高辛标记的ＨＣＭＶ寡核苷酸探针对大脑皮层细胞压印片进行原位分子杂交检测。病理学研究结果证实,鼠脑为侵袭性脑膜脑炎性病理改变,并在神经细胞内发现病毒特性性的大的核内嗜碱性包涵体;原位杂交结果显示,病毒核酸存在于受染神经细胞及神经胶质细胞核内及胞浆内;在鼠     

汉坦病毒在原代人胚肾与人胚肺细胞中增殖及其特性的研究

近年来研究发现,汉坦病毒能在多种细胞株及人体细胞中增殖、适应.国内学者用人胚肺二倍体细胞(2BS)体外适应该病毒成功,但有关原代人胚肺、肾细胞的报道尚少.作者选用两株病毒及两种原代人胚细胞用于体外感染、观察,应用免疫荧光间接法及胶体金包埋前染色电镜技术对宿主细胞中增殖的病毒进行了动态观察及特异性定位研究,现报告如下.1 材料和方法1.1 细胞的分离和培养1.1.1 人胚细胞:取正常孕妇5—7个月水囊引产胚肾及肺组织,按常规方法分散细胞,5—7天后长满单层.1.1.2 非洲绿猴肾上皮细胞(VeroE6):由安徽省医学科学研究所倪大石惠赠.1.2