血浆蛋白质的分级(续五)

<正>Ⅴ 各个血浆蛋白质的纯化方法 各个血浆蛋白质的纯化方法和步骤摘要列于表Ⅶ。     

血浆蛋白质的分级(续完)

各个血浆蛋白质的纯化方法 各个血浆蛋白质的纯化方法和步骤摘要列于表Ⅶ。     

血浆蛋白质的分级(续二)

<正>V各个血浆蛋白质的纯化方法 各个血浆蛋白质的纯化方法和步骤摘要列于表Ⅺ（所有参考文献详见原著一译者注）。     

血浆蛋白质的分级(续三)

<正>V.各个血浆蛋白质的色化方法 各个血浆蛋白质的纯化方法和步骤摘要列于表Ⅷ（所有参考文献详见原著一译者注）     

血浆旦白质的分级(续四)

<正>Ⅴ 各个血浆旦白质的纯化方法 各个血浆旦白质的纯化方法和步骤摘要对于表Ⅶ(所有参考文献详见原著-译者注)     

血浆蛋白分离纯化的进展——亲和技术的重要作用

从血浆中分离纯化各种药用蛋白质仍然是生物技术的重要产业。分离纯化技术的进展使得一血多用成为可能 ,大大降低了产品成本。其中 ,亲和技术扮演了重要的角色。经过 2 0多年的进展 ,亲和层析已经从实验室走进产业化 ,以其高选择性、高活性回收率和高纯度等特点 ,成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一。在血浆分离中 ,以乙醇沉淀或离子交换层析预处理后血浆组分为原料 ,用亲和层析可高效地获得目标血浆蛋白。综述了近年来各种亲和层析在血浆蛋白分离制备中的应用 ,并展望了血浆蛋白分离纯化发展的趋势。     

血浆蛋白质的分级(续一)

<正> Ⅲ.明显特征的血浆蛋白质 具有明显特征的血浆蛋白质的性质,总结于表Ⅴ。 Ⅳ.乙醇和利凡诺-硫酸铵法各 级份中蛋白质的分布 图5和6说明了两个著名的大规模分级方法的原理。用这些方法得到的级份也已通过聚丙烯酰胺电泳进行了分析试验,结果见图7和8。 在《血浆蛋白质》的第一版中,Pennell(1960)曾报告过乙醇法各级份中已知血浆蛋白质定位的试验。我们已试推广这些实验应用于利凡诺-硫酸铵(RAS)法,过氯酸沉淀,DEAE-纤维素层折和葡聚糖凝胶过滤(SChultze和Heremans,1965)的级份分析。今天,应用特异抗血清和生物学方法能够有意义地检测更多的蛋白质。所以,我们已检测了乙醇和利凡诺-硫酸铵法的各个级份,再次证实所有58种蛋白质的存在。结果见表Ⅵ。一般来说,各种血浆蛋白质分布在几个级份中,如同早先已知的情况一样。     

亚洲玉米螟免疫细胞中一种细胞粘附因子的研究

以亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis为试虫,发现血细胞裂解液被昆布多糖或低浓度钙离子激活后,能粘附浆细胞,使浆细胞伸展。昆布多糖处理的血细胞裂解液,经硫酸铵沉淀、羧甲基纤维素离子交换层析、ConA-Sepharose 4B亲合层析,提纯到一种细胞粘附因子。细胞粘附因子是分子量为64KD的蛋白质。以同样方法在血浆中纯化出一种分子量为390KD的蛋白质,推测其可能是血浆凝固原.经53%PercOll浓度梯度分离纯化了两类免疫细胞(颗粒细胞和浆细胞)。证明细胞粘附因子仅存在于颗粒细胞中。     

应用蛋白组方法筛选血浆中乙肝病毒PreS1结合蛋白

目的筛选血浆中乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白。方法表达纯化了PreS1-谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione—S-transferase,GST）融合蛋白,利用该蛋白与血浆进行Pull—down实验,并设立GST与血浆Pull—down,GST、PreS1-GST与PBS Pull—down对照,Pull-down产物进行双向电泳分离（2-DE）,差异蛋白点通过质谱鉴定。结果成功表达纯化出PreS1-GST融合蛋白,通过双向电泳分析发现一个PreS1特异结合蛋白,经质谱鉴定为含锚蛋白重复序列的蛋白57（ANKRD57）。结论锚蛋白重复序列的主要功能是介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用,ANKRD57与PreS1特异结合后的生理功能值得深入研究。     

重组人血白蛋白临床研究进展

人血白蛋白是人血浆中最丰富的蛋白质,具有许多重要的生理特性,用途广泛。目前主要以毕赤酵母作为宿主表达的重组人血白蛋白,开发了重组人血白蛋白的纯化技术,同时对重组人血白蛋白结构进行了分析,结果表明与人血浆白蛋白基本一致。临床研究结果表明重组人血白蛋白与人血浆白蛋白有着几乎相同的疗效和安全性。综述了重组人血白蛋白的性质结构分析及酵母表达系统;重点介绍了重组人血白蛋白在临床方面研究进展。     

明胶亲和层析介质分离纯化猪血浆纤维结合蛋白

目的：研究猪血浆中纤维结合蛋白的分离纯化方法,得到高纯度、高活性的目标蛋白。方法：以明胶亲和层析介质对猪血浆纤维结合蛋白进行分离纯化,考察了不同洗脱方式对纯化结果的影响,对产品进行了纯度、生物活性的测定。结果：通过对纯化工艺条件的摸索,采用含不同浓度尿素缓冲液进行分步洗脱,可以得到纯度为95％以上的产品,回收率达到50．96％;经BHK细胞培养实验证明其具有与人血浆纤维结合蛋白同样的生物活性。结论：采用了较温和的洗脱方式以明胶亲和层析介质对猪血浆纤维结合蛋白进行分离纯化,提高了动物资源的可利用性。     

多元光学蛋白质芯片研究取得重要进展

蛋白质芯片技术是一种新型蛋白质分析技术,具有集成、并行、快速和自动化分析的优势。多元光学蛋白质芯片传感器,仅需微量生理或生物采样,即可以同时检测、识别和纯化不同的生物分子和研究分子间的相互作用。无需标记,可以直接测量像血浆、细胞裂解液等生理样品。     

用单克隆抗体检测乙肝核心抗原及抗体

<正>HBcAg的纯化 HBcAg的纯化操作时对生物危险要特别注意。根据Takahashi等方法纯化HBcAg。要选择具有高滴度HBsAg的无症状携带者的血浆。2.6升体积之混合血浆样品6000×g4℃20分钟离心。上清37000×g16小时离心。所得沉淀物悬浮在含有10~(-4)M水解蛋白酶的0.01MTris—HCl缓冲液(pH7.2)     

人凝血因子Ⅷ工艺研究进展

人凝血因子Ⅷ(Human coagulation factorⅧ,FⅧ)是人血浆中重要的蛋白质,是人体内源性凝血途径的主要成分,血液中FⅧ过低会导致不同程度的凝血功能障碍。目前国内FⅧ大多以血浆冷沉淀为起始原料,采用离子交换层析纯化获得"#$。在此工艺中,血浆的采集、血浆融化、冷沉淀离心、冷沉淀的溶解、层析前样品的预纯化、离子交换层析条件、病毒灭活、冻干工艺均对FⅧ的质量影响较大,因此主要从这几方面进行了综述。     

蛋白质分离纯化方法的研究进展

蛋白质作为生命物质基础之一,存在于自然界中复杂的混合体系中。蛋白质在细胞中的含量极低,将其从复杂体系中分离出来并保持其活性,难度较大,因此分离纯化蛋白质的方法受到生命科学领域广泛关注。本文首先阐述了蛋白质的预处理,其次阐述了蛋白质分离纯化的各种方法如沉淀、层析、离心等,重点阐述了蛋白质新纯化的各种原理,以及每种方法的适用范围。有助大家更全面、更彻底的了解蛋白纯化技术的发展,以期为今后开展蛋白质的制备及应用提供一定理论依据和实验指导。     

因子Ⅷ浓缩物的病毒灭活

<正>自六十年代后期以来,患血友病A的病人用血浆浓缩物进行治疗,在以后的二十年中,以冷沉淀为原料提制的几种中间体以及高度纯化制品的各种类型浓缩物已被使用。最近,应用免疫吸附剂获得的高纯因子Ⅷ浓缩物已制备出来 表1概括了因子Ⅷ浓缩物在质量上的进展。为急需提高浓缩物的质量,则要求减少异源蛋白质的含量,依据一些体外研究报道此异源蛋白质可引起免疫抑制。此外,自1984年以来尽管所有的血浆衍生物均经过了病毒灭活过程。这些高纯浓缩物也还要求尽可能减少病毒污染。     

融合标签技术及其应用

融合标签最初是作为一种有效的工具用于纯化重组蛋白质,近几年的研究表明,融合标签的作用并不局限于此。本文综述了融合标签技术的发展及在生命科学研究中的各种应用,包括重组蛋白质的纯化;目的蛋白质的检测、定向固定;体内生物事件的可视化;提高重组蛋白质的产量;增强重组蛋白质的可溶性及稳定性。     

血浆蛋白质组学的研究进展

血浆蛋白质组学是研究血浆蛋白质的功能和变化的一门科学。血浆中蕴藏着生命机体的所有信息,因此只有彻底了解血浆中存在哪些蛋白质,才能知道如何利用血浆来预测人体对疾病的易感性并监控疾病的进程,以期达到对疾病进行早诊断早治疗。由于血浆蛋白质组动态范围大,给研究带来了很大的困难。尤其是高丰度蛋白质的存在影响了低丰度蛋白质的检测率。而低丰度蛋白质都是有意义的具有临床诊断价值的蛋白质。因此去除高丰度蛋白质的干扰成了血浆蛋白质组学研究的关键。近年来,血浆蛋白质组学相关研究技术也得到了长足进展,为深入研究血浆蛋白质做出了重要贡献。血浆蛋白质组学作为一种无创性的研究方法,值得我们去探讨。本文就血浆蛋白质组学研究进展情况做一简要综述。     

蛋白的色谱复性及同时纯化

对近年来新发展的用液相色谱(LC)进行蛋白质复性及同时纯化的方法做了评述,详细介绍了蛋白质在4种液相色谱上的复性及同时纯化的方法、设备和影响因素,并对各自的优缺点进行了比较,为色谱法作为研究蛋白质折叠及用于基因工程生产治疗蛋白质的复性及同时纯化技术的进一步应用提供依据。     

沙门伤寒杆菌内膜蛋白GsiD的表达纯化与相互作用北大核心

[目的]克隆沙门伤寒杆菌gsiD编码序列并在大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)进行过表达,纯化GsiD蛋白质并研究其相互作用关系。[方法]使用GFP作为融合蛋白质标签,优化蛋白质表达和纯化过程,使用位于GFP末端的8×His作为标签进行Ni柱纯化。Gsi A、B、C和D之间的相互作用通过细菌双杂交方法进行验证。[结果]成功构建gsiD过表达载体,优化了GsiD的表达和纯化条件,每1 L培养基可获得约0.4 mg的GsiD蛋白质;内膜蛋白GsiD能够和内膜蛋白质Gsi C发生相互作用,同时GsiD能够和ATP结合蛋白质Gsi A发生相互作用,却不会和Gsi B发生相互作用。[结论]首次克隆并研究了沙门伤寒杆菌gsiD基因,为进一步研究谷胱甘肽转运的机制奠定基础。