沉默MFG-E8对乳腺癌细胞的功能影响研究

通过沉默乳脂肪球表皮生长因子基因表达,探讨其对MFG-E8高表达乳腺癌细胞的功能影响。采用RT-PCR检测方法筛选MFG-E8高表达乳腺癌细胞;利用实验室已构建的MFG-E8干扰慢病毒干扰高表达乳腺癌细胞,检测细胞增殖、凋亡和迁移变化,利用Western blotting方法检测相关蛋白因子。经筛选,在几种不同乳腺癌细胞中,MCF-7细胞MFG-E8表达量最高;与对照组相比,通过沉默MFG-E8基因,乳腺癌细胞异常增殖减缓,细胞凋亡率上升,细胞迁移受到抑制,MFG-E8、BCL2、MMP2、MMP9、磷酸化STAT3蛋白表达量均下降,Bax和Caspase3蛋白表达上调;研究表明,沉默MFG-E8基因,乳腺癌细胞在癌症的发生发展过程中,功能受到明显改变,提示干扰MFG-E8的表达可能成为乳腺癌治疗的重要手段。     

血清PCT、NETs、MFG-E8、TLR 9与重症急性胰腺炎患者肠黏膜屏障功能的相关性分析及对预后的影响

摘要 目的：分析血清降钙素原（PCT）、中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）、乳脂球表皮生长因子8（MFG-E8）、Toll样受体9（TLR 9）与重症急性胰腺炎（SAP）患者肠黏膜屏障功能的相关性,并观察其对预后的影响。方法：回顾性分析本院2019年3月至2022年1月期间收治的174例SAP患者的临床资料（SAP组）,另收集并分析同期来本院进行健康体检的90例志愿者临床资料（对照组）,对比对照组、SAP组的血清PCT、NETs、MFG-E8、TLR 9和血清内毒素（LPS）、D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）水平,分析PCT、NETs、MFG-E8、TLR 9与肠黏膜屏障功能指标的相关性。174例患者入院28 d内死亡39例,生存135例,根据28 d内预后不同分为死亡（n=39）和生存组（n=135）。单因素和多因素Logistic回归分析预后的影响因素。结果：SAP组的血清PCT、NETs、TLR 9水平高于对照组,MFG-E8水平低于对照组（P<0.05）。SAP组的血清LPS、D-乳酸、DAO水平高于对照组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果证实：LPS、D-乳酸、DAO与PCT、NETs、TLR 9呈正相关,与MFG-E8呈负相关（P<0.05）。单因素分析显示：SAP患者的预后与年龄、糖尿病、高血脂、D-二聚体（D-D）、血淀粉酶、急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分、急性胰腺炎严重程度床边指数（BISAP）评分、LPS、D-乳酸、DAO、PCT、NETs、MFG-E8、TLR 9、减少饮酒、低脂饮食有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：BISAP评分偏高、APACHE Ⅱ评分偏高、LPS偏高、PCT偏高、血淀粉酶偏高、D-乳酸偏高、DAO偏高、NETs偏高、MFG-E8偏低、TLR 9偏高均是SAP患者预后的危险因素,而减少饮酒、低脂饮食则是SAP患者预后的保护因素（P<0.05）。结论：SAP患者体内血清PCT、NETs、MFG-E8、TLR 9水平异常变化,且与肠黏膜屏障功能相关,同时血淀粉酶、APACHEⅡ评分、BISAP评分、LPS、PCT、D-乳酸、DAO、NETs、MFG-E8、TLR 9是SAP患者预后的危险因素,而减少饮酒、低脂饮食则是SAP患者预后的保护因素,临床应注意早期评估,以改善患者预后。     

吞噬凋亡细胞的机制

被吞噬细胞吞噬是多数凋亡细胞的命运.凋亡细胞表面膜磷脂酰丝氨酸的暴露、膜碳水化合物的改变及表面糖蛋白的重新分布和聚集导致被吞噬细胞识别与摄取.吞噬细胞的多种受体参与吞噬过程,有些受体参与栓系凋亡细胞,有些激发巨吞饮的摄取机制.吞噬的摄取过程因吞噬细胞和凋亡细胞的类型差异而不同.至少有7种线虫吞噬基因及其哺乳动物同源物组成两条部分重叠而又平行的摄取信息传导通路.吞噬基因的突变可以改变凋亡细胞的进程.吞噬功能的缺陷将影响机体正常的免疫应答.     

FGF8在脊椎动物早期胚胎发育中的调控作用

成纤维细胞生长因子8 (fibroblast growth factor 8,FGF8)是成纤维细胞生长因子家族的成员之一,是一种组织发育过程中的重要分泌性调控信号分子,参与脊椎动物的多种组织器官的发生与发育.早期胚胎细胞通过表达FGF8在组织和器官发育、血管发生、血细胞生成、附肢发生和伤口愈合等方面发挥着重要作用.FGF8不但可以在细胞外通过胞内信号通路,而且也可以进入细胞内部发挥生物学功能.本文就FGF8在脊椎动物神经系统、内脏器官、肢体发育及不对称发育等组织、器官发育中的调控作用予以阐述.     

细胞的功能冗余性及其意义

引入新概念可能推动学科的发展.近年来冗余性概念已逐步渗入生命科学,细胞因子和转录因子的功能冗余性已引起研究者的关注.但是,对细胞冗余性的研究报道尚少.最近,对成体干细胞可塑性和专职吞噬细胞、兼职吞噬细胞的研究进展引发人们对细胞功能冗余性的思索.综述对细胞冗余性和抗冗余性的有关资料,试从生物医学角度探讨细胞冗余性的作用和意义,建议积极开展对细胞冗余性的研究.     

单核吞噬细胞系统(巨噬细胞系统)

单核吞噬细胞系统是高等动物体内具有强吞噬能力及防御机能的细胞系统,现将单核吞噬细胞系统的有关问题分述如下: 单核吞噬细胞系统的概念 1913年Aschoff观察了细胞的吞噬活动认为血窦、淋巴窦的内皮细胞,脾、淋巴结及骨髓内的网状细胞,结缔组织内的巨噬细胞等均有较强的吞噬能力,并认为它们均来源于网状细     

骨骼肌细胞中UBXD8的敲除及其对脂质代谢的影响

UBXD8是能与p97/VCP相互作用共同参与内质网相关的泛素化后蛋白质降解过程的膜蛋白.新近的脂滴蛋白质组学研究表明UBXD8能够定位到脂滴上,同时有研究表明UBXD8调控甘油三酯的代谢.但是UBXD8调控甘油三酯代谢的分子机制并不清楚.因此我们采用改良的CRISPR/Cas9技术敲除小鼠成骨骼肌细胞C2C12中的UBXD8.从筛选出来的26个可能的UBXD8敲除单克隆细胞系中鉴定获得了2个确切的UBXD8敲除单克隆细胞系.研究表明,敲除UBXD8没有显著改变脂滴上蛋白质的分布,但敲除UBXD8增加了细胞内中性脂的累积.同时敲除UBXD8可缓解棕榈酸引起的胰岛素抵抗和抵抗棕榈酸引起的细胞凋亡.当在敲除UBXD8的细胞中重新过表达UBXD8后,细胞再次出现了棕榈酸引起的胰岛素抵抗及细胞凋亡.这些数据表明UBXD8在细胞脂质代谢及其异常所引起的胰岛素信号和细胞凋亡中起着十分重要的作用.     

敲降组蛋白去乙酰化酶HDAC8对斑马鱼ZF4细胞存活率的影响

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,然而,其在鱼类生理中的作用目前报道较少.本研究设计合成了斑马鱼HDAC8的shRNA,用EcoR Ⅰ和AgeⅠ酶切构建了pLKO.1-hdac8-shRNA重组质粒,同时构建了一个阴性对照重组质粒(nc),接着将pCMV-VSVG、pCMV-Dr8.91两个慢病毒包装质粒分别与设计好的重组质粒共转染到HEK-293T细胞中进行病毒包装.收集病毒并用其感染ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中hdac8成功被敲降.随后使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内凋亡相关基因bax、bcl2、caspase-3的表达情况.研究发现:与对照组(nc)细胞相比,敲降hdac8的细胞存活率显著下降(P＜0.05),bax及caspase-3的表达量在敲降hdac8的细胞内显著上调,意味着敲降hdac8的细胞死亡的增加可能是通过上调凋亡水平引起的.本研究为后期对斑马鱼在生长发育过程中及环境压力下的凋亡机制的研究提供基础.     

乳腺癌细胞hMSH2 蛋白、CD4、CD8的表达及其与淋巴结转移的关系

目的:探讨乳腺癌细胞hMSH2蛋白、CD4和CD8表达与淋巴结转移的关系及临床意义.方法:采用免疫组织化学方法检测49例乳腺癌(淋巴结转移25例,无淋巴结转移24例)患者癌细胞hMSH2蛋白、CD4和CD8的表达,并分析其表达与淋巴结转移的关系.结果:hMSH2蛋白在乳腺癌细胞细胞核内表达,CD4和CD8在乳腺癌细胞细胞浆和细胞膜表达.淋巴结转移组与无淋巴结转移组hMSH2蛋白、CD4和CD8的表达率分别为29%和68%(P＜0.05)、58%和44%(P＞0.05)、29%和68%(P＜0.05).结论:在有淋巴结转移的乳腺癌细胞hMSH2蛋白、CD4、CD8表达的改变可能与乳腺癌淋巴结转移有关.     

免疫小鼠脾脏中抗原提呈细胞的快速分离

应用胶原酶消化脾脏、BSA梯度离心富集低浮密度细胞和FACS分选细胞法,自小鼠脾脏中分离出高纯度树突细胞、吞噬细胞和B淋巴细胞。分离的3种细胞样品中分别合97％树突细胞对6％吞噬细胞和99％B淋巴细胞。而纯化前,树突细胞和吞噬细胞在低浮密度细胞中仅分别占6．5％和35％,B淋巴细胞占脾细胞的42％左右。该程序简便、快速、准确,在一个丁作日内可制备大量细胞,并适用厂其他淋巴组织中抗原提是细胞的纯化。免疫小鼠脾脏中抗原提呈细胞的快速分离@焦新安$扬州大学畜禽传染病学实验室!225009@PierreGuermonprez$巴黎巴斯德研究所免疫…     

肿瘤患者CD8+T细胞中CD28表达的研究进展

CD28与B7结合形成的共刺激信号是T细胞激活的第二信号,肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28分子在肿瘤免疫中发挥着重要作用。人体抗肿瘤免疫主要由CD8^＋T细胞介导,根据CD28的表达与否可将CD8^＋T细胞分为细胞毒T细胞（CD8^＋CD28^＋,CTL）和抑制性T细胞（CD8^＋C28^-,Ts）。CTL是体内杀伤肿瘤细胞的主要功能性细胞之一,当该细胞与肿瘤接触时,通过共刺激信号而被激活,发挥其对肿瘤细胞的杀伤作用;Ts在机体的免疫耐受中发挥作用。现就肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28的表达作一综述。     

SKW6细胞在转导6A8 a-甘露糖苷酶反义cDNA后对抗Fas抗体诱导的凋亡

鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义, 以腺相关病毒为载体, 把编码6A8 a-甘露糖苷酶的cDNA 3′端1358 bp的反向片段转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6, 探讨6A8 a-甘露糖苷酶表达抑制对抗Fas抗体诱导凋亡的影响. 反义6A8转导成功及表达用Northern杂交及RT-PCR检测, 6A8 a-甘露糖苷酶表达用Con A结合试验检测. Giemsa染色, AnnexinⅤ染色及梯形DNA电泳显示, Fas抗体能诱导SKW6细胞凋亡, 但6A8 a-甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Fas抗体诱导的凋亡发生抵抗, 而转导正义6A8或空载载体则无影响. 6A8 a-甘露糖苷酶表达状况对SKW6细胞表面Fas分子表达没有影响.     

IL-8与胃癌关系的研究进展

IL-8是趋化性细胞因子,可以促进炎症细胞趋化和诱导细胞增殖,在胃癌组织中高表达。影响IL-8在胃癌组织中表达水平的因素包括幽门螺杆菌感染、NF-κB的干预、IL-8的基因多态性、表皮生长因子（EGF）的水平。IL-8主要参与胃癌的血管形成、促进金属蛋白酶的表达、影响E-cad和ICAM-1的水平、促进细胞有丝分裂、促使肿瘤转移等,对胃癌的发生、发展、预后均起重要的作用。选择性阻断IL-8及其受体具有抑癌作用,有望成为胃癌治疗的基础药物之一。     

胶原蛋白肽增强小鼠免疫力的实验研究

目的 探讨用生物酶提取的胶原蛋白肽增强小鼠免疫力的作用及相关机制.方法 80只清洁级昆明小鼠被随机分成正常对照组、胶原蛋白肽低剂量组[3 g/(kg·bw)]、中剂量组[7.5 g/(kg·bw)]和高剂量组[12 g/(kg·bw)],每日给药2次,连续2周.检测免疫器官重量、抗体生成细胞数(Jerne改良玻片法)、半数溶血值(HC50)的测定及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验.结果 高剂量组可提高脾脏指数、胸腺指数、半数溶血值及吞噬细胞吞噬率和吞噬指数、可增加抗体生成细胞数;中剂量组可提高胸腺指数、增加抗体生成细胞数、提高小鼠半数溶血值及吞噬细胞吞噬率和吞噬指数;低剂量组可增加抗体生成细胞数、提高吞噬细胞的吞噬率和吞噬指数.结论 三种剂量胶原蛋白肽对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫均有显著的增强作用,高剂量组效果最强.     

黏着斑激酶信号通路在细菌侵入非吞噬细胞中的作用

细菌对宿主细胞的黏附和侵袭是引发传染病的重要步骤。细菌在黏附的过程中,其表面结构或特殊黏附分子和宿主细胞表面受体相互作用激活黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK),通过FAK/Src-Cortactin-Arp2/3通路和FAK/PI3K-Rac通路调控细胞骨架重排,促进细菌侵入非吞噬细胞。为了深入探讨细菌侵入非吞噬细胞的整个过程及调控机制,就细菌对非吞噬细胞的黏附、侵入以及细胞FAK信号通路在此过程中的调节作用进行综述。     

布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶对胚胎滋养层细胞的致炎作用

[目的]本文研究布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)基因缺失株和PGM蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及其引起炎症反应时细胞因子的变化,探讨布鲁氏菌pgm基因的生物学功能.[方法]本文分别用布鲁氏菌pgm基因缺失株和纯化的PGM蛋白感染胚胎滋养层细胞,通过细胞形态学的观察和酶联免疫反应检测其对细胞的损伤作用以及细胞因子的变化.[结果]本实验获得了纯化的PGM蛋白,成功构建了pgm基因缺失株,采用该基因缺失株免疫小鼠后,采集血液分离血清,虎红平板实验和试管凝集实验结果显示为阴性;pgm缺失株和PGM蛋白感染HPT-8细胞均能诱发贴壁细胞脱落;而且pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞的能力较M5-90明显降低.pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于M5-90对照组,差异极显著(P＜0.01),而细胞因子IL-10的分泌变化不明显,PGM蛋白感染HPT-8细胞时,其细胞因子LDH表达水平高于PBS对照组,差异极显著(P＜0.01),而IL-6、IL-10和TNF-α的表达水平明显低于PBS对照组,差异显著(P＜0.05).[结论]本研究表明,PGM蛋白和pgm缺失株可致胚胎滋养层细胞损伤,且引发滋养层细胞细胞因子的表达变化,为进一步研究布鲁氏菌感染宿主细胞的分子机制奠定了基础.     

多种受体参与调控吞噬细胞对凋亡细胞的识别和清除

细胞凋亡被公认为是正常组织生长调节的一种重要机制,与增殖相对。凋亡细胞及时被清除,一方面可以防止胞内有毒物质的释放,避免组织炎症的发生;另一方面也可以阻止核物质的释放,防止自身免疫性疾病如红斑狼疮等的发生。凋亡细胞主要被吞噬细胞吞噬清除,接触和识别是吞噬发生的前提,吞噬细胞对凋亡细胞的识别有多种机制的参与。目前已发现三种主要机制参与吞噬细胞对凋亡细胞的识别,包括磷脂酰丝氨酸与磷脂酰丝氨酸受体,碳水化合物与凝集素样受体,血小板反应蛋白、CD36与玻连蛋白受体。     

高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达的影响.方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5d小鼠囊胚,随机分成三组,即对照组(空白)、低糖组(葡萄糖浓度为7.5mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为28.0mmol/L),分别培养在含0、7.5mmol/L和28.0mmol/L葡萄糖的M199培养基中,培养24h后,然后再吸出囊胚.每组随机吸取30个囊胚用免疫组织化学S-P法.检测不同浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达状况,利用HPIAS-1000图像分析系统测定Caspase-8在以上三组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果:Caspase-8表达结果:空白组中囊胚细胞胞浆中可见少量浅棕黄色颗粒,Caspase-8表达呈弱阳性.低糖组中囊胚细胞胞浆未见着色,Caspase-8表达呈阴性.高糖组囊胚细胞胞浆中可见较多的棕黄色颗粒,Caspase-8表达呈强阳性.空白组与低糖组囊胚Caspase-8表达的阳性面积率及平均光密度无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.01).结论:高浓度葡萄糖可诱导Caspase-8的过度表达,导致囊胚细胞数目过度减少,从而影响囊胚的正常发育和着床.     

重构型人caspase-8基因的表达诱导HeLa细胞凋亡

以两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase-8基因的pIRES2-EGFP真核表达载体转染HeLa细胞,用间接免疫荧光染色、免疫细胞化学染色和电镜观察等方法,研究重构型人caspase-8基因在HeLa细胞中的表达及其促凋亡活性.结果显示,两种重构型人caspase-8基因在HeLa细胞中的表达可以有效地诱导HeLa细胞凋亡.     

呼吸道合胞病毒细胞免疫的研究进展

本文通过介绍单核吞噬细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、NK细胞和K细胞在呼吸道合胞病毒感染免疫中的作用,对呼吸道合胞病毒的细胞免疫机制作一概述。