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将adr亚型HBV的完整X基因克隆到表达质粒pProEXHTb中,实现了X蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达。表达产物全长179个氨基酸残基(其中X蛋白部分154个氨基酸残基),分子量约19.7kD,约占细菌总蛋白的34%。其氨基端融合部分含有6组氨酸肽段,经HisTrapTM亲和层析纯化,一步可达纯度93%。Western印迹分析表明,该表达产物可与HBV感染患者体内的抗X抗体特异性结合。 相似文献
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湖北麻鸭乙型肝炎病毒全基因组的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
为了解湖北地区This finding was also Confirmed by the phylogenetic tree analysis.麻鸭中鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatitis B virus,DHBV)自然感染状况以及湖北麻鸭所携带DHBV的基因结构特征,采集了70份成年麻鸭血清并应用PCR技术检测DHBV DNA,对其中一份DHBV DNA阳性血清进行DHBV全基因扩增,并进行克隆与序列测定分析.结果表明,湖北麻鸭DHBV自然携带率为10%;湖北DHBV分离株(GenBank登录号DQ276978)基因组的全长为3024bp,有编码P,S和C蛋白的三个开放阅读框;与GenBank中17株DHBV基因组比较,核苷酸同源性介于89.85%~93.29%之间;S蛋白、C蛋白和P蛋白结构功能区序列均高度保守;而对P蛋白标志性氨基酸和全基因进化树的分析表明,该分离株属于DHBV中国基因型中的一个亚型. 相似文献
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为了解湖北地区Thisfindingwasalsoconfirmedbythephylogenetictreeanalysis.麻鸭中鸭乙型肝炎病毒(DuckhepatitisBvirus,DHBV)自然感染状况以及湖北麻鸭所携带DHBV的基因结构特征,采集了70份成年麻鸭血清并应用PCR技术检测DHBVDNA,对其中一份DHBVDNA阳性血清进行DHBV全基因扩增,并进行克隆与序列测定分析。结果表明,湖北麻鸭DHBV自然携带率为10%;湖北DHBV分离株(GenBank登录号DQ276978)基因组的全长为3024bp,有编码P,S和C蛋白的三个开放阅读框;与GenBank中17株DHBV基因组比较,核苷酸同源性介于89.85%~93.29%之间;S蛋白、C蛋白和P蛋白结构功能区序列均高度保守;而对P蛋白标志性氨基酸和全基因进化树的分析表明,该分离株属于DHBV中国基因型中的一个亚型。 相似文献
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乙型肝炎已成为严重威胁人类健康的世界性疾病之一,我国也是高流行区。现在对本病的认识与研究逐渐深入,已取得了很多研究成果。本文仅就乙型肝炎的病原(乙型肝炎病毒)和与疫苗有关的两个问题简述如下: (一)乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)属DNA病毒,该病毒与其相关抗原颗粒在电镜下分三种不同形态:直径为22nm小球型颗粒、直径为22nm长为200nm的管状颗粒和直径为42nm的大球型颗粒(又称Dane颗粒)。一般认为Dane颗粒是完整的病毒。这三种形态病毒颗粒的衣膜均由表面抗原(HBsAg)组成,不含核酸。Dane颗粒衣膜内为27nm的核心,核心部分包括核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)、内源性DNA模板及相应的DNA聚合酶。据研究HBV进入肝细胞浆脱去衣膜,其环形 相似文献
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Geraldine A. Willshaw Henry R. Smith Moyra M. McConnell Bernard Rowe 《FEMS microbiology letters》1988,49(3):473-478
Abstract Sequences encoding the CS6 antigen of colonisation factor antigen (CFA)IV were cloned on a 3kb Cla I fragment. The recombinant plasmid pDEP5 coded for surface expression of CS6 measured by ELISA and production of CS6 polypeptides was detected in E. coli minicells. The genes for the CS1, CS2 and CS3 components of colonisation factor antigen CFA/II were cloned together on a length of DNA corresponding to about 17kb. CS3 was always expressed but production of either CS1 or CS2 depended on the serotype and biotype of the host strain. Separate subclones were obtained that expressed CS3 or CS1 and CS2. 相似文献
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Geraldine A. Willshaw Henry R. Smith Moyra M. McConnell Bernard Rowe 《FEMS microbiology letters》1991,82(2):125-129
Sequences regulating production of fimbriae were cloned from two enterotoxigenic Escherichia coli strains. One cloned region, from E. coli 0.25.H42, controlled expression of coli surface-associated (CS) antigen 4, whereas the function of the other, from E. coli 0167.H5, was unclear. Both regulators were related to the cfaD gene that controls expression of colonization factor antigen I (CFA/I) although low stringency conditions were required to show significant hybridization between cfaD and the regulatory fragment from E. coli 0167. The cloned regulatory genes promoted expression of CFA/I, CS1, CS2 and CS4 antigens but the levels of production in the presence of the 0167 regulator were lower than those promoted by the CS4 regulator or cfaD. 相似文献
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Abstract Formaldehyde resistance in Escherichia coli strain VU3695 is mediated by a 94 kilobase plasmid. The genes responsible for formaldehyde resistance were identified on a 9.2 kb DNA fragment and cloned in pBR322. By minicell analysis three proteins were shown to be encoded by this fragment. 相似文献
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乙型肝炎病毒表面抗原前S区和谷胱甘肽巯基转移酶融合基因在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
我们构建了谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和完整的或部分缺失的乙型肝炎病毒表面抗原前S区的融合基因,并在大肠杆菌中进行了表达。融合蛋白的产量随着前S区长度的增加而迅速降低,而且融合蛋白的前S区有严重的降解,主要降解位点在preS1区的a.a.75和preS2区的a.a.130和a.a.165左右。利用蛋白降解酶系缺陷型菌株进行的研究表明,这种降解酶存在于多个大肠杆菌株中而且和大肠杆菌中的两个主要的蛋白降解酶系Lon和htpR无关。具有重要生物学功能的前S区肽段(preS1a.a.1-65)因含有阻止分泌的滞留顺序而无法在哺乳动物细胞和酵母中大量表达,但滞留顺序的存在并没有影响含有这一肽段的融合蛋白在大肠杆菌中的表达和产物的纯化。GST融合表达系统产量高,纯化快速简便。用这一方法大量表达并得到的这一肽段不仅是研究乙型肝炎病毒的分子生物学的重要材料,而且可以作为新一代乙型肝炎疫苗的主要组成成分。 相似文献
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重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白工程菌的高密度培养 总被引:2,自引:0,他引:2
在10L发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究,用分批培养方法探讨了不同培养基、培养基中磷酸盐浓度和Mg2+浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响;用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体生长与重组蛋白表达的影响,同时对重组菌诱导时期、诱导持续时间以及不同诱导温度表达包含体在尿素溶液中的溶解性进行了研究。结果表明,在优化后的培养基中,磷酸盐浓度、Mg2+浓度分别为80mmol/L 与20mmol/L时菌体生长与表达效果较好;分批补料培养中,37℃培养9h菌体达到对数期中期(约45OD600)为适宜诱导时期,加入终浓度为10mmol/L IPTG后诱导5h,OD600达到80以上,重组蛋白表达量达到29.74%,为最适收获菌体时间;37℃表达的包含体80%以上溶解在4mol/L的尿素溶液中,最终浓度达到14mg/mL; 10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在30L发酵罐中进行了放大培养,10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在30L发酵罐上具有可放大性与重复性, 可以应用于工业生产。 相似文献
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Cloning and expression of the putative gene coding for GTP cyclohydrolase I from Escherichia coli 总被引:3,自引:0,他引:3
The putative gene coding for GTP cyclohydrolase I of Escherichia coli was isolated from a lambda gt11 expression vector library by using antibodies as a probe and has been subcloned on a 3.8 kb Bam HI fragment in the plasmid vector pUC13. E. coli cells carrying the recombinant plasmid designated pCYH express 100-fold increased levels of the enzyme. The protein formed under the control of the plasmid appears electrophoretically and immunochemically identical with the wild type enzyme. 相似文献
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本文首次报告用3’—末端核苷酸转移酶将生物素—11—dUTP标记到人工合成的21寡核苷酸上,该d(NMP)_(21)与HBV DNA长链缺口区附近的序列互补,并含HBV DNA的直接重复序列(Direct Repeat)。本文对其标记条件、检出方法进行观察比较,找出合适的条件,制成的生物素化d(NMP)_(21)探针可与标准的HBVDNA进行杂交,检测敏感度为25pg。用这种探针可以从乙型肝炎病人血清中检出HBV DNA。 相似文献
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建 总被引:1,自引:0,他引:1
从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %~ 99.71%和 97.5 8%~ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。 相似文献