敲低序列相似家族172成员A 抑制肝癌细胞增殖和糖酵解

序列相似家族172成员A(family with sequence similarity 172 member A, FAM172A)已被证实与多种肿瘤的发生和恶性转化有关,但是FAM172A在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的作用尚不完全清楚。本研究分析了肿瘤与癌症基因组图谱数据库中50例正常肝组织和50例肝癌组织信息,结合实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹结果,发现肝癌组织中FAM172A的表达高于正常肝组织。利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)将肝癌细胞系中FAM172A进行敲低,细胞活力检测和细胞克隆形成实验结果表明,FAM172A的敲低显著抑制了细胞的增殖(P<0.01)。此外糖酵解压力测试和Western印迹结果显示,敲低FAM172A可以有效抑制肝癌细胞的糖酵解能力,糖酵解酶己糖激酶2(hexokinase 2, HK2)、肝内磷酸果糖激酶(phosphofructokinase-liver, PFKL)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A, LDHA)及其转录因子c-M...     

癌蛋白D52家族

癌蛋白D52家族近年来引起人们的研究兴趣.D52最早是从人乳腺癌中发现的.该家族成员分子中都含有一个叫做Coil-coil基序的高度保守结构域,这个结构域在从低等生物到哺乳动物或者同种生物的不同成员间是高度保守的.已有研究表明,该家族成员可以通过选择性剪接的方式产生功能不同的拼接体.D52家族基因在多种癌症中广泛扩增,蛋白表达水平升高.目前认为,他们的基因功能可能与包括癌症在内的人类疾病相关,然而,关于该家族成员发挥作用的分子机制还有待深入研究.     

癌蛋白D52家族研究进展

肿瘤蛋白D52家族近年来引起了人们的研究兴趣。D52最早是从人乳腺癌中发现的。该家族成员分子中都含有一个叫做Coli-Coli基序的高度保守结构域,这个结构域在低等生物到哺乳动物或者同种生物的不同成员间也是高度保守的。已有的研究表明该家族成员可以通过选择性剪接的方式产生功能不同的拼接体。D52家族基因在多种癌症中广泛扩增,蛋白表达水平升高。目前认为,他们的基因功能可能与包括癌症在内的人类疾病相关,关于这个家族成员发挥作用的分子机制还有待于进一步的探讨。     

乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白（HBXIP）对细胞周期的影响

与乙肝病毒X蛋白（HBX）的C端结合,它具有抑制HBX活性的作用. 为进一步阐明HBXIP对细胞增殖的作用及其分子机制,构建了HBXIP的真核表达载体,并将其稳定转染至正常人肝细胞系L-O2细胞中,建立了稳定表达HBXIP蛋白的肝细胞系,命名为L-O2-hbxip. 然后,应用MTT、BrdU标记实验和流式细胞术等方法,发现HBXIP过表达后,L-O2细胞的生长速度明显加快,可促进细胞由G₁期进入到S期,表明HBXIP具有促进L-O2-hbxip细胞增殖的作用.应用免疫印迹对有关细胞周期相关蛋白进行了检测. 结果显示,HBXIP过表达时可上调细胞周期蛋白D₁、细胞周期蛋白E的表达,并下调p21和p27的表达,从而调节细胞周期,产生对细胞增殖的影响.     

DCAF家族蛋白研究进展

DCAF (DDB1-and CUL4-associated factor)是一类新发现的含"WDXR"结构域的蛋白质家族,其可与CRL4-DDB1构成E3泛素连接酶,通过对靶蛋白进行泛素化修饰,实现对细胞生长、分化、凋亡等一系列生命活动的调控。DCAF蛋白的异常表达通常与肿瘤、发育障碍等疾病密切相关。本文主要根据目前的研究成果对DCAF家族蛋白的功能及机制展开论述。     

糖原合酶激酶3β以细胞周期蛋白D1依赖性方式引发人肺腺癌细胞A549细胞周期阻滞

对糖原合酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,6SK3β）在细胞增殖中的作用研究,在不同细胞系和不同刺激因素作用下得出了不同结论,本文旨在探讨GSK3β在人肺腺癌细胞系A549细胞生长中的直接作用。A549细胞瞬时转染持续激活型S9A-GSK3β以及显性负突变型KM-GSK3β两种GSK3β突变型质粒,改变GSK3β活性。24 h后,分别进行细胞计数,流式细胞术及Western blot检测。结果显示,增强GSK3β活性可导致细胞数量下降,G．期细胞百分比升高。细胞周期蛋白D1表达水平被GSK3β下调。结果提示,GSK3β可能以细胞周期蛋白D1依赖性方式引发A549细胞的G,期阻滞,从而发挥生长抑制效应。     

中药固真方对UMR106细胞周期蛋白表达及细胞周期的影响

应用流式细胞技术和 Western blot技术 ,观察了中药固真方对大鼠成骨肉瘤细胞 UMR1 0 6细胞的细胞周期及细胞周期蛋白 cyclin E和 cyclin A表达的影响 .结果显示 :固真方处理 UMR1 0 6细胞后 2 4 h,S期细胞百分比达高峰 ,占 49.6% ,而对照组 30 h时 ,S期细胞才增高 ,达 43.2 % .cy-clin E的表达在固真方处理 8h时增高 ,而对照组在 1 6h时 ,cyclin E表达才达高峰 .cyclin A的表达在给药组处理 2 4 h时最高 ,而对照组在 30 h时 ,cyclin A表达才增高 .揭示固真方可缩短细胞周期的时程 ,加速细胞周期的运行 ,从而促进细胞增殖 .     

人细胞周期蛋白G2基因真核表达载体构建及其功能研究

构建人cyclin G2基因真核表达载体,进一步研究cyclin G2对体外培养细胞增殖的调节作用及可能的调节机制。以人口腔癌前上皮细胞系POE4总RNA的反转录产物为模板,应用RT-PCR方法克隆cyclin G2基因cDNA,成功构建真核表达载体pIRES -G2;应用脂质体介导的基因转染技术,以体外培养的肿瘤细胞系HeLa细胞和正常细胞系CV-1细胞作为受体细胞,进行转基因表达研究,发现cyclin G2高表达对体外培养细胞的增殖起明显抑制作用;应用p16INK4a、p21WAF1、p27KIP1三种周期蛋白依赖性激酶抑制因子的单克隆抗体对转基因的HeLa细胞进行免疫细胞化学研究,发现转染pIRES-G2的实验组细胞中,p21 WAF1蛋白染色阳性细胞数明显多于转染空载体的对照组,平均光密度值高于对照组,两组间均有显著性差异（p<0.01）,提示cyclin G2抑制细胞增殖作用可能是通过诱导p21WAF1的表达而实现。     

中华按蚊CPF家族表皮蛋白基因的全基因组鉴定及其特征分析

【目的】鉴定中华按蚊Anopheles sinensis基因组上的CPF家族表皮蛋白基因,分析其基因结构和特征,推测其可能的生物学功能;同时比较研究代表性蚊种的CPF家族基因,提供CPF家族基因的信息框架。【方法】基于中华按蚊An.sinensis、冈比亚按蚊An.gambiae、微小按蚊An.minimus、埃及伊蚊Aedes aegypti、致倦库蚊Culex quinquefasciatus和黑腹果蝇Drosophila melanogaster全基因组序列,以冈比亚按蚊CPF家族基因序列为询问序列,采用BLASTP,TBLASTN和HMM方法鉴定这些物种的CPF家族基因;利用生物信息学方法预测中华按蚊CPF家族基因的结构、剪切模式、信号肽、跨膜区、结构域和3D结构等;采用最大似然法(maximum likelihood,ML)构建这些物种的系统发生关系,推断CPF家族基因的起源和进化。【结果】中华按蚊、冈比亚按蚊、微小按蚊、埃及伊蚊、致倦库蚊和黑腹果蝇全基因组共有4,4,4,3,3和3个CPF家族基因。中华按蚊的CPF基因被分别命名为As CPF1,As CPF2,As CPF3和As CPF4,这些As CPF基因的全长c DNA序列分别为736,2 021,531和1 001 bp,分别编码219,345,148和185个氨基酸。As CPF1,As CPF2和As CPF3仅含有一个内含子,但As CPF4含有3个内含子,所有内含子均为0位内含子。As CPF1,As CPF2,As CPF3和As CPF4分别有3,2,1和2个不同的选择性剪切子。As CPF3的表达量最高,其次是As CPF4,As CPF2和As CPF1。推测的As CPF1,As CPF2,As CPF3和As CPF4的理论分子量分别为22.86,36.47,15.08和18.66 k D,等电点分别为9.08,8.97,9.44和9.16。As CPF家族蛋白含有保守的44个氨基酸基序和C-末端基序;As CPF1,As CPF3和As CPF4具有信号肽,为分泌型蛋白,而As CPF2缺乏信号肽,为非分泌蛋白。二级结构分析显示,4个As CPF均具有α-螺旋,无规卷曲和延伸链,只有As CPF4有一段跨膜片段,位于第5-27位氨基酸。系统发育分析显示,CPF3基因可能是最早分化出来的CPF家族基因,CPF1和CPF2基因可能是同一祖先基因经过一个基因重复事件分化形成的,CPF4基因很可能是按蚊所特有的,是最晚分化出来的CPF基因。以冈比亚按蚊为对照,替换率分析显示,中华按蚊CPF表皮蛋白的Ka/Ks值均小于1,表现出纯化选择。【结论】对中华按蚊CPF家族基因在全基因组上的鉴定和特征分析,及对代表性蚊虫CPF家族基因的比较分析,揭示了蚊虫CPF家族基因的多样性、结构和氨基酸特征以及起源和进化,这为该家族基因的进一步研究和利用提供了信息基础。     

miR-155对肝癌细胞增殖的影响

目的:在肝癌细胞系中过表达miR-155,研究其对肝癌细胞增殖的影响。方法:将pc DNA3.0-miR-155表达载体瞬时转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术对miR-155在转录水平的表达进行检测,采用CCK8法及克隆形成实验检测miR-155过表达后对Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系增殖的影响。结果:转染细胞后72 h,经实时定量PCR检测,Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞中成熟miR-155的表达分别上调约431及16倍(P0.01),说明其能有效高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,miR-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P0.01)。结论:pc DNA3.0-miR-155转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系后能高效表达成熟miR-155,同时证明过表达miR-155能使肝癌细胞的增殖受到非常明显的促进。     

Cell Proliferation and Motility Are Inhibited by G1 Phase Arrest in 15-kDa Selenoprotein-Deficient Chang Liver Cells

The 15-kDa selenoprotein (Sep15) is a selenoprotein residing in the lumen of the endoplasmic reticulum (ER) and implicated in quality control of protein folding. Herein, we established an inducible RNAi cell line that targets Sep15 mRNA in Chang liver cells. RNAi-induced Sep15 deficiency led to inhibition of cell proliferation, whereas cell growth was resumed after removal of the knockdown inducer. Sep15-deficient cells were arrested at the G1 phase by upregulating p21 and p27, and these cells were also characterized by ER stress. In addition, Sep15 deficiency led to the relocation of focal adhesions to the periphery of the cell basement and to the decrease of the migratory and invasive ability. All these changes were reversible depending on Sep15 status. Rescuing the knockdown state by expressing a silent mutant Sep15 mRNA that is resistant to siRNA also reversed the phenotypic changes. Our results suggest that SEP15 plays important roles in the regulation of the G1 phase during the cell cycle as well as in cell motility in Chang liver cells, and that this selenoprotein offers a novel functional link between the cell cycle and cell motility.     

早老素通过下调CDK4使HEK293T细胞周期阻滞

早老素（progerin）的累积导致儿童早老症（Hutchinson Gilford progeria syndrome, HGPS）的发生,并与正常衰老相关。早老素能使细胞内稳态失衡但分子机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨早老素导入人胚胎肾293T细胞（human embryo kidney 293T cell, HEK293T）后细胞增殖、周期变化的分子机制。形态学观察发现过表达早老素的HEK293T细胞密度下降,(57±2.47)%细胞核形态皱缩。细胞增殖和周期实验证明早老素使细胞增殖减慢,发生G1/S期阻滞,G1细胞从 (42.3±1.31)%升至(47.2±1.26)%,而S期细胞从 (43.1±1.36)%降至 (38.5±1.42)%。Western印迹结果显示早老素的高表达引起p21蛋白表达上调（103.2±1.49）%,CDK4下调（63±1.52）%,而p53、ATM、CyclinE1以及p16等蛋白质水平均不变;HEK293T细胞中早老素的过表达导致γ H2AX水平下调（53±1.36）%,H2O2处理后变化趋势不变。我们的研究结果提示,早老素通过上调p21和下调CDK4使细胞发生周期阻滞,不能增加HEK293T细胞的损伤及衰老。     

甘氨鹅脱氧胆酸钠通过MAPK/ERK1/2介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化引起人肝细胞癌的抗药

B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）是一种重要的抗凋亡蛋白质,在多种人类肿瘤中普遍过表达。甘氨鹅脱氧胆酸钠（GCDA）与消化道肿瘤的发生发展密切相关,并能介导肝癌细胞对化疗药物的抵抗。本文旨在探讨在GCDA介导的人肝细胞癌（HCC）耐药性中Bcl-2的作用及其机制。本研究以肝癌细胞系为研究对象,Western印迹结果显示,Bcl-2在多种肝癌细胞系中均有表达。设计靶向Bcl-2的siRNA沉默HCC细胞系内源性Bcl-2的表达,发现Bcl-2沉默之后促进了化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡。机制上,GCDA可介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化,而Ser70位点的磷酸化能够被PD98059（MAPK/ERK1/2抑制剂）所抑制。构建huBcl2-WT和huBcl2-S70A真核表达载体,脂质体转染HCC细胞系。用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测凋亡细胞。结果显示,huBcl2-WT过表达能抑制5 FU介导的凋亡,S70位点失活突变成A后,Bcl-2的过表达不能抑制5-FU介导的凋亡。本研究提示,GCDA通过MAPK/ERK1/2通路介导的Bcl-2 Ser70位点的磷酸化,在肝癌细胞的存活和抗药中发挥重要作用。抑制Bcl-2能够促进化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡,该结果为治疗GCDA介导的耐药性肝癌提供新的思路。     

SNX-2112, a Novel Hsp90 Inhibitor,Induces G2/M Cell Cycle Arrest and Apoptosis in MCF-7 Cells

SNX-2112 is a heat shock protein 90 (Hsp90) inhibitor with anticancer properties currently in clinical trials. This study investigated the effects of SNX-2112 on inhibition of cell growth, the cell cycle, and apoptosis in MCF-7 human breast cancer cells, in addition to the various molecular mechanisms. The results of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and flow cytometric analysis suggest that SNX-2112 inhibits cell growth in a time- and dose-dependent manner more potently than 17-(allylamino)-17-demethoxygeldanmycin (17-AAG), a traditional Hsp90 inhibitor, probably as a result of cell-cycle arrest at the G2/M phase and the induction of apoptosis. Downregulation of Bcl-2 and Bcl-xL, upregulation of Bax, cleavage of caspase-9 and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), and degradation of the breast cancer-related Hsp90 client proteins human epidermal growth factor receptor-2 (HER2), Akt, Raf-1, and nuclear factor kappa-B kinase (IKK) were observed in SNX-2112 treated cells by Western blot assay. These findings suggest that the molecular mechanisms of cell-growth inhibition by SNX-2112 involve activation of the mitochondrial apoptotic pathway and the degradation of breast cancer-related proteins.     

Long Non-coding RNA HOXA10-AS Promotes Invasion and Migration of Hepatocellular Carcinoma Cells

Some studies have showed that long non-coding RNA (lncRNA) HOXA10-AS acts as an oncogene and regulates the invasion and metastasis of tumor cells. However, its mechanism in the invasion and migration of hepatocellular carcinoma (HCC) cells is unclear. The purpose of this study was to analyze the expression of HOXA10-AS in HCC tissues and its clinical significance, detect the influence of HOXA10-AS on the invasion and migration of HCC cells, and explore the mechanism of HOXA10-AS in promoting the invasion and migration of HCC cells. The results of quantitative real-time PCR (qRT-PCR) showed that the expression of HOXA10-AS was significantly upregulated in HCC tissues compared with the adjacent non-HCC tissues. Age and gender did not show significant correlation with HOXA10-AS expression, while tumor size, lymphatic metastasis and distant metastasis showed significant correlation with HOXA10-AS expression. Meanwhile, the expression of HOXA10-AS in HCC cells was higher than that in normal liver cells. After interfering with HOXA10-AS in HCC cell lines HepG2 and QGY7701, Transwell invasion and scratch experiments showed that the invasion and migration ability of HOXA10-AS cells in the HOXA10-AS group was significantly lower than that in the control group. Western blotting results showed that the expression levels of vimentin and N-cadherin were significantly lower than those of the control group, while the E-cadherin expression was significantly increased. The TGFβ1/Smads signaling pathway was inhibited after HOXA10-AS interference. In summary, HOXA10-AS promotes the invasion and migration of HCC cells by the TGFβ1/Smads signaling pathway.     

The role of TRIM family proteins in autophagy,pyroptosis, and diabetes mellitus

The ubiquitin-proteasome system, which is one of the systems for cell protein homeostasis and degradation, happens through the ordered and coordinated action of three types of enzymes, E1 ubiquitin-activating enzyme, E2 ubiquitin-carrier enzyme, E3 ubiquitin-protein ligase. Tripartite motif-containing (TRIM) family proteins are the richest subfamily of really interesting new gene E3 ubiquitin ligases, which play a critical role not only in many biological processes, including proliferation, apoptosis, pyroptosis, innate immunity, and autophagy, but also many diseases like cancer, diabetes mellitus, and neurodegenerative disease. Increasing evidence suggests that TRIM family proteins play a vital role in modulating autophagy, pyroptosis, and diabetes mellitus. The aim of this review is to discuss the role of TRIM proteins in the regulation of autophagy, pyroptosis, diabetes mellitus, and diabetic complications.     

甘氨鹅脱氧胆酸钠通过MAPK/ERK1/2介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化引起人肝细胞癌的抗药

B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）是一种重要的抗凋亡蛋白质,在多种人类肿瘤中普遍过表达。甘氨鹅脱氧胆酸钠（GCDA）与消化道肿瘤的发生发展密切相关,并能介导肝癌细胞对化疗药物的抵抗。本文旨在探讨在GCDA介导的人肝细胞癌（HCC）耐药性中Bcl-2的作用及其机制。本研究以肝癌细胞系为研究对象,Western印迹结果显示,Bcl-2在多种肝癌细胞系中均有表达。设计靶向Bcl-2的siRNA沉默HCC细胞系内源性Bcl-2的表达,发现Bcl-2沉默之后促进了化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡。机制上,GCDA可介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化,而Ser70位点的磷酸化能够被PD98059（MAPK/ERK1/2抑制剂）所抑制。构建huBcl2-WT和huBcl2-S70A真核表达载体,脂质体转染HCC细胞系。用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测凋亡细胞。结果显示,huBcl2-WT过表达能抑制5 FU介导的凋亡,S70位点失活突变成A后,Bcl-2的过表达不能抑制5-FU介导的凋亡。本研究提示,GCDA通过MAPK/ERK1/2通路介导的Bcl-2 Ser70位点的磷酸化,在肝癌细胞的存活和抗药中发挥重要作用。抑制Bcl-2能够促进化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡,该结果为治疗GCDA介导的耐药性肝癌提供新的思路。     

HBx参与肝细胞癌发生发展调控的分子机制

肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma, HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,而HBV慢性感染是肝癌发生的主要原因.乙型肝炎病毒(HBV)中X基因编码的一种多功能蛋白(HBx),参与众多重要生物学过程的调控,并促进肝细胞癌的发生. 早期研究表明,HBx在HCC发生过程中发挥重要的调控功能,但其确切分子机制尚未完全明确. 近几年,HBx参与生物学过程的分子机制研究有了较快的进展. 有趣的是,研究发现,HBx在不同的细胞系以及HBV感染的不同阶段发挥促抑凋亡的双重作用,HBx还参与细胞自噬的调控. 此外,在HBx参与细胞增殖及肿瘤侵袭和转移等方面,也产生了一些新的认识. 本文将从HBx对肝细胞凋亡、自噬和增殖的调控及其对肝癌细胞转移和侵袭的调控等方面,对HBx参与肝细胞癌发生发展调控机制做一综述.     

Ubiquitin B在HSP90抑制剂17-AAG诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞中的作用

目的 研究Ubiquitin B（Ubb）在热休克蛋白90（HSP90）抑制剂17-AAG诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及机制.方法 不同浓度17-AAG处理HeLa细胞后,流式细胞术检测细胞周期分布,荧光分光光度法检测细胞蛋白酶体活性变化;Ubb siRNA 转染HeLa细胞后,Real Time PCR法检测Ubb干扰效应,Western 印迹检测细胞周期相关蛋白的表达改变.结果 17-AAG可以诱导HeLa细胞阻滞于G2/M期,同时显著增强细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性,并且两者的变化均呈现剂量依赖性;干扰HeLa细胞内Ubb后,可以逆转17-AAG引起的G2/M期阻滞;17-AAG可明显下调HeLa细胞周期相关蛋白Cdk1和Hec1的表达,并且这一变化也是Ubb依赖的.结论 Ubb在17-AAG诱导的HeLa细胞周期阻滞中发挥重要作用,Ubb和HSP90抑制剂17-AAG在功能上相互关联,可能成为宫颈癌治疗的新靶点.