濒危中药材太白米组织培养及总黄酮含量测定

以太白米(Notholirion bulbuliferum)地下小鳞茎为外植体,通过在MS基本培养基添加不同浓度2,4-D、KT、TDZ和NAA,研究不同植物生长调节剂对太白米愈伤组织诱导的影响.结果显示,4种植物生长调节剂在不同水平上对愈伤组织诱导有显著作用(2,4-D、TDZ,P<0.01;NAA、KT,P<0.05),诱导愈伤组织的最佳激素组合是0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.2 mg·L~(-1) KT+0.1 mg·L~(-1) TDZ,愈伤组织在该培养基上继代培养有不定芽分化,如用相同浓度ZT代替KT则分化的不定芽增多.HPLC分析显示野生小鳞茎、愈伤组织和不定芽中总黄酮含量无显著差异,分别为干重的13.3%、11.4%和11.9%.     

红花草莓的组织培养与快繁技术研究

以红花草莓叶片为外植体,通过筛选诱导愈伤组织、不定芽及壮苗、生根的培养基,建立一套实用且易推广的红花草莓组培快繁技术体系。结果表明:在愈伤组织的诱导过程中TDZ的诱导效果优于6-BA,TDZ与NAA配合使用效果优于与IBA的组合。6-BA浓度为0.5 mg·L~(-1)时不定芽诱导率高达86.6%。低浓度的6-BA和8 g·L~(-1)的琼脂更有利于壮苗培养,NAA比IBA更有利诱导生根。综上述,最适红花草莓愈伤组织的诱导培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)TDZ+0.5 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂;最适不定芽分化的培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂;最适壮苗培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+8g·L~(-1)琼脂;最适生根培养基为MS+0.5mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+8 g·L~(-1)琼脂。试管苗移栽生长20 d后,成活率高达93%,且后期草莓苗生长壮健。此体系的建立为优质红花草莓种苗大规模生产提供了科学依据和技术支持。     

轮叶党参的组织培养及植株再生研究

以轮叶党参为材料,研究了不同外植体、激素组合、培养基及光照条件对愈伤组织诱导及植株再生的影响.结果表明,叶片是轮叶党参组织培养较为合适的外植体.外植体在添加0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) KT的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%;愈伤组织转移到附加0.75 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA的MS培养基进行继代培养,增殖后的愈伤组织转移到附加0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS分化培养基进行分化,其分化率达89.4%;将分化出的芽转接到附加0.2 mg·L~(-1) IAA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS培养基,生根率达92.5%.暗培养诱导出愈伤组织后转到16 h·d~(-1)光照条件下,愈伤组织增殖倍数和分化率显著提高,再生苗健壮,长势强.     

胡杨杂种叶片组培技术研究

目的:优化胡杨杂种叶片组培技术进而为其遗传转化研究奠定基础。方法:以胡杨杂种叶片为外植体,以WPM为基本培养基,研究不同植物生长调节剂对叶片诱导愈伤组织、愈伤组织诱导不定芽、以及不定芽进一步诱导不定根的作用效果。结果:胡杨杂种叶片最佳脱菌方式:0.1%HgCl_2脱菌5 min;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为WPM+0.4 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1)NAA,诱导率可达100%;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为WPM+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.2 mg·L~(-1)NAA,诱导率可达100%;诱导不定根的最适培养基为1/2WPM+2.0 mg·L~(-1)IBA+0.02 mg·L~(-1)NAA+0.2 mg·L~(-1)GA_3,生根率可达100%。以上3种培养基均需添加30 g·L~(-1)蔗糖,30 g·L~(-1)琼脂,pH调至5.8。结论:本研究建立了以胡杨杂种叶片为外植体的组培技术,为后序进行胡杨杂种批量化生产及其遗传转化研究提供重要参考。     

茶条槭愈伤组织的再生体系建立及其没食子酸含量的测定

通过愈伤组织诱导途径, 建立了快速高效的茶条槭再生体系。成熟种子在MS+1.0 mg·L-1 6-BA的培养基中萌发, 以茎段作为外植体, 在WPM+0.002-0.01 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 6-BA中培养3周诱导形成愈伤组织, 诱导频率平均为98.0%。愈伤组织转入WPM+0.01 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 6-BA培养基中得到再生芽, 分化频率为42.0%,平均每块愈伤产生再生芽10个左右。转到WPM+0.3 mg·L-1 IBA的培养基上的再生芽均可生根并长成完整植株, 小苗移栽成活率达到89.0%。实验还建立了愈伤组织中没食子酸的提取和HPLC检测方法。对深绿色愈伤组织连续培养2个继代后, 没食子酸含量达到2.8%。     

如意皇后粗肋草愈伤组织及丛生芽诱导培养基优化

本研究以粗肋草‘Red Valentine’带侧芽的根茎为外植体,研究不同培养基类型、不同外源激素及浓度、不同转接周期对其愈伤组织及丛生芽诱导的影响,进而优化如意愈伤组织和丛生芽诱导培养基。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+2.0 mg/L 2,4-D和1/2MS+0.5 mg/L TDZ+2.5 mg/L 2,4-D;最佳愈伤组织分化培养基为1/2 MS+0.4 mg/L TDZ,最佳转接周期为30 d;最佳丛生芽诱导培养基为5.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA和1/2 MS+0.5 mg/L TDZ,最佳转接周期为30 d。优化培养基后愈伤组织及丛生芽诱导效率更高。本研究通过设计优化试验,筛选出了愈伤组织诱导及丛生芽诱导的最佳培养基,为粗肋草属植物的快速繁殖及规模化生产提供了一定的理论指导。     

褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖

褐纹报春苣苔(Primulina glandaceistriata)是一种极具观赏价值的喀斯特地区野生花卉,目前尚未有褐纹报春苣苔组培快繁的研究报道。该研究以褐纹报春苣苔的叶片为外植体,通过两种途径建立其组培快繁体系。结果表明:适宜的不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),适宜的不定芽增殖培养基为MS+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1),增殖系数为11.09;适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+TDZ 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),适宜的愈伤组织分化培养基为MS+ZT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10mg·L~(-1),分化系数为12.46;适宜的生根培养基为1/2MS+IBA 0.1 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1)或1/2MS+IBA0.5 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1),生根率为100%。该研究结果成功建立了褐纹报春苣苔的组培快繁体系,为今后褐纹报春苣苔的种苗繁殖和遗传转化提供了技术支持。     

诺丽叶片的离体再生

以诺丽(Morinda citrifolia)叶片为外植体,在添加不同激素种类和浓度的MS培养基上进行离体培养,建立两种离体再生模式:模式Ⅰ为先脱分化愈伤组织,再分化不定根和不定芽;模式Ⅱ为直接培养生根后分化不定芽。结果表明:在模式Ⅰ中,诱导诺丽叶片产生愈伤组织的最优培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+2.0mg·L~(-1)2,4-D;诱导叶片愈伤组织再分化出不定根和不定芽的最优培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA或MS+2.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA,其中MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA生根时间最早为10 d左右,根系较发达,而MS+2.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA生根时间在15 d左右,根系发达。在模式Ⅱ中,诱导叶片直接生根长芽的培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA。将模式Ⅰ和模式Ⅱ中,完成诺丽叶片离体再生的苗切下后接种到MS+0.2 mg·L~(-1) NAA培养基中诱导生根,15 d左右分化出不定根,45 d获得完整植株。该研究结果为后续的遗传转化和基因改良研究奠定了基础。     

TDZ和CPPU对红掌快速繁殖的影响

以红掌带主脉叶切片、叶柄切段为外植体,研究TDZ和CPPU对其快速繁殖的影响。结果表明,在愈伤组织诱导上,与6-BA相比,TDZ和CPPU具有更强的诱导外植体脱分化活性;TDZ 1.0mg/L和6-BA0.5mg/L配比是诱导红掌外植体脱分化的最佳配方,与其它培养基比较,愈伤组织诱导率提高50.0%~166.0%。在附加TDZ 0.3mg/L+NAA 0.1~0.4mg/L或CPPU 0.3mg/L+NAA 0.1~0.4mg/L的MS培养基上,愈伤组织均能很好分化,并能长成完整植株。     

藏药匙叶翼首草高频组织培养再生体系优化研究

以匙叶翼首草种子为材料,探索种子最佳消毒方法,对影响无菌苗外植体愈伤组织诱导、增殖及植株再生的因素进行了研究。结果表明:(1)剥去外种皮的种子,经75%乙醇1min+0.1%HgCl_27min+50%多菌灵500倍液30min消毒后,在1/2 MS培养基中的发芽率达60.67%,无污染。(2)无菌苗的叶片和茎段都适宜诱导愈伤组织,在培养基MS+5.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) 2,4-D中可在10d内诱导出生长旺盛的愈伤组织,愈伤诱导率分别为84.00%、97.33%。(3)适宜的愈伤组织增殖培养基为MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) IAA,培养20d的叶片和茎段愈伤组织的生长率分别为74.37%、70.52%。(4)适宜的丛生芽诱导培养基为MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) IAA+250mg·L~(-1) L-脯氨酸+150mg·L~(-1)水解酪蛋白,30d后茎段和叶片的丛生芽发生率分别达到100%、94.44%。(5)再生苗在1/2 MS+0.5mg·L~(-1) NAA培养基中生根培养30d,生根率为100%。匙叶翼首草高效稳定的再生体系为保护其野生资源和工厂化育苗提供了有效途径。     

ZT和2iP对3个南方高丛蓝浆果优选系丛生枝增殖及生长的影响

研究了不同质量浓度ZT和2iP对南方高丛蓝浆果(Vaccinium corymbosum hybrids)优选系A47、A119和A167丛生枝的增殖倍数、质量、含水量和长度的影响.结果表明,在0.5～3.0 mg·L~(-1)质量浓度范围内,随ZT质量浓度提高,3个优选系丛生枝的总增殖倍数、有效增殖倍数、鲜质量、干质量、含水量及总长度均呈增加趋势,而平均长度则呈下降趋势.在2.5～15.0 mg·L~(-1)质量浓度范围内,随2iP质量浓度提高,3个优选系丛生枝的总增殖倍数和含水量先增加后下降,在2iP质量浓度为5.0～10.0 mg·L~(-1)时达到峰值;有效增殖倍数、总长度和平均长度一直呈下降趋势;鲜质量和干质量无明显的变化规律.在改良WPM培养基中添加2.0～3.0 mg·L~(-1) ZT或5.0～10.0 mg·L~(-1) 2iP可使3个南方高丛蓝浆果优选系丛生枝有较高的增殖倍数,而添加0.5～1.0 mg·L~(-1) ZT或2.5 mg·L~(-1) 2iP可使丛生枝生长较好.此外,优选系A47和A167丛生枝的增殖倍数显著高于优选系A119.     

狭叶小金梅草组织培养与快速繁殖

以狭叶小金梅草(Hypoxis angustifolia)当年花苞为材料进行离体快速繁殖体系研究。结果表明,花苞的愈伤诱导适宜培养基为MS+6-BA 0.8 mg·L^-1+NAA 0.05 mg·L^-1+TDZ 0.1 mg·L^-1;诱导芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.02 mg·L^-1+AC(活性碳)0.2 g·L^-1;芽继代增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+花宝1号1 g·L^-1+AC 0.2 g·L^-1,30 d为一个继代周期,增殖系数达10~20倍;壮苗生根培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.02 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1。将生根苗移栽至泥土:蛭石按3:1配制旳基质中,盖膜保湿,成活率达80%。     

TDZ对喜树愈伤组织生长及色素积累的影响

目的:研究苯基噻二唑基脲(Thidiazuron,TDZ)对喜树愈伤组织生长及叶绿素、花青素积累的影响。方法:采用TDZ单独应用及合并植物激素对喜树愈伤组织进行了继代培养。结果:单独应用TDZ时1mg/L为组织生长最适浓度。1mg/L TDZ+0.5mg/L NAA可显著促进愈伤组织的生长及叶绿素的积累,1mg/L TDZ+0.5mg/L 2,4-D培养条件下花青素含量高于单独应用TDZ培养。结论:TDZ在喜树愈伤组织培养中可替代植物激素并对细胞植物色素积累有明显影响。     

茶条槭愈伤组织的再生体系建立及其没食子酸含量的测定

通过愈伤组织诱导途径,建立了快速高效的茶条槭再生体系。成熟种子在MS＋1．0mg·L^-1 6-BA的培养基中萌发,以茎段作为外植体,在WPM＋0．002-0．01mg·L^-1 TDZ＋0．1mg·L^-1 6-BAR培养3周诱导形成愈伤组织,诱导频率平均为98．0％。愈伤组织转入WPM＋0．01mg·L^-1 TDZ＋0．1mg·L-^1 6-BA培养基中得到再生芽,分化频率为42．0％,平均每块愈伤产生再生芽10个左右。转到WPM＋0．3mg·L^-1 IBA的培养基上的再生芽均可生根并长成完整植株,小苗移栽成活率达到89．0％。实验还建立了愈伤组织中没食子酸的提取和HPLC检测方法。对深绿色愈伤组织连续培养2个继代后,没食子酸含量达到2．8％。     

芍药愈伤组织中体细胞胚发育过程的组织细胞学观察

以芍药（Paeonia lactiflora Pall.）3个芍药品种的茎段、叶片、叶柄为外植体,诱导体细胞胚发生,并采用石蜡切片法对该发育过程进行组织细胞学观察。结果表明：‘Going Bananas’的茎段愈伤诱导率达100%,增殖率在4.0以上,表现最佳;非胚性愈伤组织最佳诱导、增殖培养基为WPM+IAA 1.0mg·L^-1+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.5mg·L^-1+TDZ 0.5mg·L^-1+CH 0.625g·L^-1;愈伤组织转入到1/2 MS（Ca²⁺加倍）+2,4-D 2.0mg·L^-1+ABA 0.5mg·L^-1或ZT 1.0mg·L^-1的培养基中,连续暗培养90后得到胚性愈伤;之后转入到成熟培养基1/2MS（Ca²⁺加倍）+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1中,见光培养60d,逐渐发育至球形胚和心形胚。在石蜡切片观察中,芍药的体细胞胚起源方式包括外起源和内起源两个途径。在外起源方式中包括单个表层细胞的外起源和多个表层下细胞的共同起源。3种方式的区别主要在于起始的位置和起始细胞数量,后期均形成原胚结构。胚性细胞的分裂方式为对称分裂,未发现不对称分裂细胞的存在。     

马尾松胚乳愈伤组织发生的初步研究

为获取马尾松(Pinus massoniana)单倍体材料，建立其胚乳组织培养体系，对马尾松胚乳不同的消毒方法进行筛选，并分析不同基本培养基、生长调节剂配比和热激处理对愈伤诱导的影响。结果表明，胚乳的最佳消毒方式为75%酒精处理30 s+2% NaClO消毒15 min，外植体污染率为0，死亡率仅为15.56%；生长素可促进愈伤诱导且是必需的；细胞分裂素浸泡种子可代替培养基中的细胞分裂素，并能取得比较好的胚乳愈伤诱导效果，1.0 mg·mL-1 6-BA浸泡30 min处理的效果最佳，在培养基WPM+NAA 2.0 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1中，愈伤诱导率高达87.78%；培养基DCR+NAA 2.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1的胚乳愈伤诱导率最高(68.75%)；热激处理可提高胚乳愈伤的诱导率和质量，以相对湿度85%下45 ℃热激10 min最佳，总愈伤诱导率为66.25%，成团愈伤诱导率达8.75%；增殖培养以培养基WPM+NAA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1最佳，增殖率达83.33%。     

蓝莓离体叶片胚状体高效发生及其组织学观察

以高灌蓝莓试管苗叶片为外植体、以改良WPM为基本培养基,研究了外源激素TDZ、ZT及其组合对离体叶片胚状体发生的影响,同时也探讨了蔗糖浓度、水解酪蛋白、椰汁等对胚状体发生、丛芽形成的影响.结果表明:不同浓度的外源激素TDZ、ZT及其组合对胚状体的发生频率、丛芽的形成和生长起重要作用;蔗糖浓度对胚状体的发生及丛芽的生长影响较大,而添加有机质则对胚状体的发生及丛芽的生长没有明显影响.适合高灌蓝莓叶片胚状体发生及成苗的培养基为WPM TDZ 0.04 mg/L ZT 0.25～2.0 mg/L 蔗糖20～40 g/L,而培养基WPM ZT 0.5～1.0 mg/L 蔗糖20 g/L适合于丛芽继代生长.组织学观察表明,蓝莓叶片胚状体发生主要起源于叶上表皮细胞和部分叶肉细胞,可能为多细胞起源,历经多细胞原胚、原球胚、梨形胚、心形胚、子叶胚等发育阶段,并能直接发育成苗.