贵州苗族新生儿HbF中Gγ/Aγ比值测定与AγT基因频率分析

用含Triton X-100的酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法测定了贵州省108例苗族新生儿脐带血胎儿血红蛋白(HbF)中Gγ/Aγ值.显示107例(占99.07%)新生儿的Gγ值在55-78%之间,均值与标准差为70.42±3.45;高Gγ值者1例(占0.925%);低Gγ值者未发现。用Large-pore Vydac C4柱反相高效液相层析法对108例样本进行了AγT基因频率（fAγT）分析,fAγT为0.0648。 The ratio of Gγ to Aγ of fetal hemoglobin inn 108 cord blood samples of Miao nationality newborns in Guizhou province was determined by the polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE).The result showed that one case had high Gγ value(0.925%) and 107 babies the normal Gγ values of 55 to 78%(70.42+3.45)。The AγT gene frequency(fAγT) analysis in 108 samples was done by high pressure liquid chromatography using a large pore Vydac C4 column,the fAγT was 0.0648.     

贵州苗族新生儿HbF中G_λ/A_λ比值测定与~Aγ~T基因频率分析

用含Triton X-100的酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法测定了贵州省108例苗族新生儿脐带血胎儿血红蛋白(HbF)中。~Gγ/~Aγ值。显示107例(占99.07％)新生儿的~Gγ值在55—78％之间,均值与标准差为70.42±3.45;高~Gγ值者1例(占0.925％);低~Gγ值者未发现。用Large-pore Vydac C4柱反相高效液相层析法对108例样本进行了~Aγ~T基因频率(f~4γ~T)分析,f~4γ~T为0.0648。     

满族新生儿血红蛋白F中G_γ／A_γ比值测定及其异常者γ－珠蛋白基因图谱分析

以聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定了３３１例辽宁满族新生儿脐带血血红蛋白Ｆ中Ｇγ／Ａγ比值。结果显示：高Ｇγ（＞８０％）者４例,占１．２１％,其基因频率（ｆ）为０．００６０４,低Ｇγ（３０－４８％）者６例,占１．８１％,其基因频率为０．００９０６,其余正常,Ｇγ平均值为６５．２３±６．３８％。未发现ＡγＴ链。对其中八例异常者（４例高Ｇγ值,４例低Ｇγ值）的染色体ＤＮＡ进行了基因图谱分析,确定４例高Ｇγ值者基因型有两种：Ｇγ－Ｇγ／Ｇγ－Ａγ二例,Ｇγ－ＡＧγ－Ａγ／Ｇγ－Ａγ二例;４例低Ｇγ值者基因型有二种,分别为：Ａγ－Ａγ／Ｇγ－Ａγ二例和－ＧＡγ／Ｇγ－Ａγ二例。其中Ａγ－Ａγ基因型在中国人群中未见报道过。     

人γ干扰素突变体(rIFN-γ132-PGIL)的构建及其生物学活性的测定

利用DNA重组技术,去掉人γ干扰素(IFNγ)基因3′端含编码多肽羧基(C)端11个氨基酸的核苷酸序列,与编码P,G,I,L的DNA序列相连接,构成IFNγ突变体(rIFN-γ132-PGIL)基因,将后者插入pBV220P_RP_L串连启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,在CIts857基因的调节下,通过升温诱导,获得了高效表达,表达量约占菌体可溶性蛋白的30％以上,抗病毒活性平均可达4.9×10~-8U/L,比母体菌株高10倍。SDS—PAGE结果表明,rIFN-γ132—PGIL分子量为17kd。     

南昌地区汉族新生儿胎儿血红蛋白中γ与γ比值的测定

用改良的含Triton X-100和尿素的酸性聚丙烯酸胺凝胶电泳法测定了503例南昌地区汉族新生儿胎儿血红蛋白中^Gγ和^Aγ二比值。结果低GY组（34-46%）占1%,高^Gγ组（83-91%）占1.2%,其余为正常组（59-79%)。此结果提示,在南昌地区汉族新生儿中,异常γ基因的频率可能低于其它东亚黄种人     

蓖麻蚕中肠γ-谷氨酰转肽酶和底物的相互作用及其生理功能

蓖麻蚕Philosamta cynthia ?n,高度提纯的中肠γ-谷氨酰转肽酶(γ-GTP)体外转肽作用表明:L-苯丙氨酸、L-甲硫氨酸,L-半胱氨酸、L-色氨酸,L-精氨酸和L-赖氨酸是最好的γ-谷氨酰的受体,而L-谷氨酸和L-谷氨酰胺(L-Gln)系该酶良好的γ-谷氨酰供体。酶对γ-谷氨酰对硝基苯胺(γ-GNA)的K_m为0.13mmol/L(含L-苯丙氨酸)和0.29mmol/L(无L-苯丙氨酸)。谷胱甘肽(GSH)和L-Gln与γ-GNA竞争酶的γ-谷氨酰结合部位,其抑制常数K_1值分别为0.5mmol/L和1.1mmol/L。γ-GTP催化L-Gln的酰胺键水解和转肽,其催化速率相当于对γ-GNA的38％。     

新疆蒙古族、锡伯族新生儿HbF中Gγ/Aγ、AγI/AγT比值测定及基因图谱分析

用HPLC法测定新疆蒙古族78例、锡伯族60例新生儿胎儿血红蛋白(HbF)中Gγ/Aγ以及AγI/AγT比值。%Gγ均值为:蒙古族73.99% ,锡伯族74.59%。%AγI均值分别为蒙古族56.04%和锡伯族64.33%。在蒙古族中发现AγT纯合体4例、杂合体12例;锡伯族中发现AγT杂合体6例。蒙古族中AγT基因频率(fAγT)为0.128,锡伯族为0.05。 Abstract: Gγ/Aγ、AγI/Aγ Ratios of fetal hemoglobin(HbF) in 138 cases of newborns of Megnol (n=78)and Sibo(n=60)ethnic groups in Urumuqi,Xinjiang were determined by HPLC.The means of % Gγ of Mongol and sibo ethnic groups were 73.99% and 7459% respectively.12 Aγ/T cases of heterozygotes in Mongol,6 in Sibo and 4 cases of AγT homozygotes in Mongol were found.The frequencies of AγT gene were 0.128 in Mongol and 0.05 in Sibo respectively.The means of AγT of Mongol and Sibo ethnic groups were 56.04% and 64.33% respectively.     

深黄被孢霉发酵生产γ-亚麻酸的研究

以深黄被孢霉AS 3.3410(Mortierella isabellina AS 3.3410)的变异株M_6为出发菌株,γ—亚麻酸含量210mg/L,经紫外线和微波处理得到变异株M_(6-22),摇瓶发酵γ-亚麻酸含量1181mg/L,200升发酵罐发酵γ-亚麻酸含量达到1350mg/L。对200升罐发酵的后提取工艺进行了研究,以乙醇和正己烷分步抽提效果最好。脲素包合法的实验结果表明,在70～75℃、3h的条件下可以使γ-亚麻酸由7.2％浓缩到72％。     

新疆蒙古族、锡伯族新生儿HbF中~Gγ/~Aγ、~Aγ~I/~Aγ~T比值测定及基因图谱分析

用HPLC法测定新疆蒙古族78例、锡伯族60例新生儿胎儿血红蛋白（HbF）中Gγ／Aγ以及AγI／AγI比值。％Gγ均值为：蒙古族73.99％,锡伯族74.59％。％GγI均值分别为蒙古族56.04％和锡伯族64.33％。在蒙古族中发现AγT纯合体4例、杂合作12例;锡伯族中发现AγT杂合体6例。蒙古族中AγT基因频率（ρAγT）为0.128,锡伯族为0.05     

满族新生儿血红蛋白F中Gγ／Aγ比值测定及其异常者γ—珠蛋白基…

以聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定了３３１例辽宁满族新生儿脐带血血红蛋白Ｆ中Ｇγ／Ａγ比值。结果显示：高Ｇγ（＞８０％）者４例,占１．２１％,其基因频率（ｆ）为０．００６０４,低Ｇγ（３０－４８％）者６例,占１．８１％,其基因频率为０．００９０６,其余正常,Ｇγ平均值为６５．２３±６．３８％。未发现ＡγＴ链。对其中八例异常者（４例高Ｇγ值,４例低Ｇγ值）的染色体ＤＮＡ进行了基因图谱分析,确定４例高Ｇγ值     

产γ_内酰胺水解酶菌株的筛选及发酵条件研究

(-)γ-内酰胺是合成两种抗艾滋病药物(-)carbovir和(-)abacavir的重要原料,具有重要的应用价值,微生物酶法拆分( /-)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法具有良好的应用前景。以N-乙酰苯丙氨酸为唯一碳源,从土壤中筛选得到了69株具有酰胺水解酶活性的菌株,利用液相色谱分析方法确定了其中20株有较高的酰胺水解酶活性,利用手性色谱分析的方法进一步得到了一株具有较高立体选择性,能拆分( /-)γ-内酰胺而获得(-)γ-内酰胺的菌株L29-9,对该菌株的产酶培养基的碳、氮源及初始pH值等进行了研究。结果表明:当选择碳源柠檬酸2g/L、氮源酵母提取物5g/Lp、H 7.0、培养时间40h时,通过完整细胞转化,在30℃下经过12h的反应,产物(-)γ-内酰胺产率达40%,ee值99.5%。     

蓖麻蚕中肠γ-谷氨酰转肽酶和底物的相互作用及其生理功能

蓖麻蚕Philosamta cynthia ricini,高度提纯的中肠γ-谷氨酰转肽酶(γ-GTP)体外转肽作用表明:L-苯丙氨酸、L-甲硫氨酸,L-半胱氨酸、L-色氨酸,L-精氨酸和L-赖氨酸是最好的γ-谷氨酰的受体,而L-谷氨酸和L-谷氨酰胺(L-Gln)系该酶良好的γ-谷氨酰供体.酶对γ-谷氨酰对硝基苯胺(γ-GNA)的K_m为0.13mmol/L(含L-苯丙氨酸)和0.29mmol/L(无L-苯丙氨酸).谷胱甘肽(GSH)和L-Gln与γ-GNA竞争酶的γ-谷氨酰结合部位,其抑制常数K₁值分别为0.5mmol/L和1.1mmol/L.Γ-GTP催化L-Gln的酰胺键水解和转肽,其催化速率相当于对γ-GNA的38%.     

新疆汉、回、维吾尔、哈萨克族新生儿HbF中~Gγ／~Aγ、~Aγ~I／~Aγ~T比值测定及两例异常者的γ基因图谱分析

作者用高效液相层析（ＨＰＬＣ）法测定了汉、回、维吾尔（维）、哈萨克（哈）族新生儿胎儿血红蛋白（ＨｂＦ）中~Ｇγ／~Ａγ、~Ａγ~Ｉ／~Ａγ~Ｔ比值,共３７２例,其中汉族和回族各１０２例、维族９９例、哈族６９例。％~Ｇγ（~Ｇγ／~Ａγ）均值：汉、回、维、哈族分别为６６．８３％、６８．３３％、７０．４４％和６９．７０％。低~Ｇγ者（＜５０％）４例：其中回族３例、哈族１例。高~Ｇγ者（＞８０％）２５例：汉和哈族各５例、回族４例,维族１１例。发现~Ａγ~Ｔ杂合子９９例分别为：汉２１例、回２３例、维２６例、哈族２９例。４个民族各发现１例~Ａγ~Ｔ纯合子。％~Ａγ~Ｉ（~Ａγ~Ｉ／~Ａγ~Ｔ）均值：汉５６．８３％、回５５．５８％、维５０．９４％、哈５４．６８％。~Ａγ~Ｔ基因频率依次为０．１１３、０．１２３、０．１４１及０．２２５。两例比值异常者（１例维族高~Ｇγ８５．４２％、~Ａγ~Ｔ杂合体。１例回族低~Ｇγ４３．４％,~Ａγ~Ｉ纯合体）经γ基因图谱分析,确定高~Ｇγ值者γ珠蛋白基因型为－~Ｇγ－~（ＡＧ）γ－~Ａγ~Ｔ（~Ａγ~Ｉ）－／－~Ｇγ－~Ａγ~Ｉ,（~Ａγ~Ｔ）－;低~Ｇγ值者为－~（ＧＡ）γ~Ｉ－／－~Ｇγ－~Ａγ~Ｉ－。     

南瓜叶中γ-氨基丁酸的提取及薄层扫描测定

本文在单因素试验基础上,通过正交试验优化了南瓜叶中γ-氨基丁酸的提取条件,并对γ-氨基丁酸的薄层扫描测定方法进行了探索.结果表明,南瓜叶中γ-氨基丁酸的最佳提取条件为:以20％乙醇为溶剂、料液比1∶17(w/v)、提取时间1h,此条件下得到的γ-氨基丁酸的含量为209 mg/100 g.所建立的薄层扫描测定方法在0.125 ～2.0 mg/mL范围内呈良好线性关系(R2=0.9991),平均加样回收率(n=4)为99.61％.     

微生物来源的γ内酰胺酶研究进展

γ-内酰胺酶属于酰胺酶,其中的(+)γ-内酰胺酶能够高效率的动力学拆分外消旋体γ-内酰胺,获得光学纯的(-)γ-内酰胺。光学纯的(-)γ-内酰胺是制备抗病毒药物碳环核苷化合物的重要手性中间体。目前报道共有7个来源于微生物的γ-内酰胺酶,其中来源于Aureoacterium sp.的(-)γ-内酰胺酶的晶体结构获得了解析。根据晶体结构推测的(-)γ-内酰胺酶的催化机理与α/β水解酶超家族的催化机理是类似的。但是,目前还没有(+)γ-内酰胺酶的晶体结构模型的数据及机理的描述。γ-内酰胺酶的研究方向主要包括γ-内酰胺酶的蛋白质工程改造,对不同对映体选择性的γ-内酰胺酶的催化机理的阐述,以及γ-内酰胺酶在生物体内的功能研究。     

外源表达γ-内酰胺酶菌株的构建及发酵条件优化

我们构建了重组γ-内酰胺菌株E. coli BL21/pCDFDuet-γ-lactam,研究了发酵产γ-内酰胺酶的条件并进行了优化。研究结果表明,将pCDFDuet-1表达载体转化到含有γ-内酰胺酶基因的感受态E. coli中,得到重组γ-内酰胺菌株E. coli BL21/pCDFDuet-γ-lactam,通过IPTG诱导表达和HPLC检测发现,重组酶可以水解(+)γ-内酰胺,其e.e.值比E. coli BL21/γ-lactam表达提高了约30%。重组菌中(+)γ-内酰胺酶蛋白表观分子量为50 kD。对重组菌株发酵条件进行了初步研究,结果进一步表明,当选择碳源葡萄糖5 g/L、温度30℃、接种量4%、装液量100 mL/500 mL,转速180 r/min条件下,(+)γ-内酰胺酶含量最高,e.e.值约98%。本研究为探索出一条适合规模化生产的酶催化反应工艺提供参考,该工艺的意义不仅可以节约经济,而且对环境友好,可以替代化学工艺。     

IL-18及γ-IFN与过敏性皮炎患者的相关性研究

目的:探讨血清IL-18和γ-IFN水平及IL-18编码基因-137G/C、-607C/A多态性与过敏性皮炎的相关性.方法:提取受试者白细胞DNA,等位基因特异性引物PCR技术检测28例过敏性皮炎病人和52例正常对照IL-18基因多态性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组IL-18和γ-IFN血清含量.结果:过敏性皮炎组与对照组比较,两者-137G/C、-607C/A基因型频率和等位基因频率均无显著性差异(P＞0.05).过敏性皮炎组的血清IL-18和γ-IFN水平明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.001).不同基因型皮炎组患者间的血清IL-18水平均无统计学差异(P＞0.05).结论:过敏性皮炎患者IL-18和γ-IFN的表达降低,提示过敏性皮炎的发生可能与本身血清IL-18和γ-IFN水平低下有关.     

γ-干扰素对膀胱癌T24细胞增殖影响及分子机制研究

探讨γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)对膀胱癌细胞株T24增殖影响及其分子机制.5种不同终浓度(125、250、500、1 000、2 000 U/mL)重组人细胞因子IFN-γ处理人膀胱癌T24细胞,分别在24、48、72 h采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)法检测T24增殖抑制率;以作用浓度为500 U/mL IFN-γ作用T24细胞,并设为实验组,未经IFN-γ处理设为对照组.流式细胞仪检测T24细胞周期各阶段变化;RT-PCR检测hepaCAM(hepatocyte cell adhesion molecule)基因表达;Western blot检测p21WAF1蛋白表达.结果表明:IFN-γ抑制T24增殖呈时间剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,实验组经流式细胞仪检测提示细胞G0/G1期比例增高(n=5,P<0.01);RT-PCR结果提示hepaCAM基因表达水平升高(P<0.05);Western blot结果提示p21WAF1蛋白表达水平增高,有统计学意义(P<0.01).新基因hepaCAM在IFN-γ对膀胱癌细胞株T24增殖调节中可能起作用,并可能通过上调p21WAF1蛋白表达阻滞T24细胞于G0/G1期,而抑制T24增殖.     

肥料增效剂γ-聚谷氨酸对小青菜产量和品质的影响

研究了γ-聚谷氨酸(γ-PGA)肥料增效剂对盆栽小青菜产量和品质的影响.结果表明:正常施肥条件下,施用50 mg/kg的γ-PGA可以显著提高小青菜叶绿素、地下部鲜质量,使小青菜地上部鲜质量最大增产幅度达8.8％,与对照相比差异显著;同时还可以明显提高土壤铵态氮的含量,氮肥利用率增加10.6％.施用100 mg/kg的γ-PGA与对照相比,可降低小青菜中的硝酸盐含量44.8％,维生素C(Vc)含量提高18.1％,小青菜品质达到最好;当减施15％质量的氮肥时,20 mg/kg的γ-PGA可提高氮肥利用率10.2％～11.6％,说明在肥料缺乏时γ-PGA对小青菜产量、品质的改善效果显著.     

猪γ干扰素的表达及其抗病毒活性的安全检测

为了提高干扰素抗病毒活性测定的生物安全性,本研究使用含有GFP的复制缺陷型水疱性口炎病毒(VSV△G*G)为指示病毒,分别对经原核表达系统和杆状病毒表达系统表达的重组猪γ干扰素(PoIFN-γ)在MDBK细胞上进行抗病毒活性测定。结果显示:由杆状病毒表达的重组PoIFN-γ具有高度抗病毒活性,其抗病毒活性为105IU/mL,原核表达的重组PoIFN-γ纯化后经缓慢复性也会产生一定的抗病毒活性,其抗病毒活性为32IU/mL。该方法与利用表达GFP的重组水疱性口炎病毒(VSV*GFP)所检测的干扰素抗病毒活性结果完全一致,表明复制缺陷型病毒VSV△G*G可作为复制型重组病毒的替代品,使得干扰素抗病毒活性检测更加安全、准确。