烟曲霉基因组与致病机制

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)是环境中普遍存在的丝状腐生真菌,也是重要的机会致病菌。随着免疫受损人群的增多,由烟曲霉引起的系统性感染发病率不断升高,已成为重症免疫受损患者死亡的主要原因之一。文章结合烟曲霉全基因组序列信息对烟曲霉感染过程、致病机制等做一概述。     

压力应激影响烟曲霉致病力的研究进展

烟曲霉是环境中广泛存在的腐生真菌,是重要的机会致病菌。近年来随着免疫受损人群的增多,烟曲霉引起侵袭性曲霉病不断增加,在深部丝状真菌感染中居于首位。由于宿主体内环境与自然环境存在诸多差异,使得烟曲霉孢子适应体内环境条件是其能够生存并致病的前提。研究发现烟曲霉适应宿主环境的能力,如温度、氧化应激、渗透压、缺氧、营养缺乏等,与其致病力密切相关。对压力应激与致病力关系的研究有助于解析烟曲霉的致病机制,可为研发烟曲霉感染诊治的新途径提供理论基础。本文对烟曲霉的压力应激与其致病力的关系进行了综述。     

胞浆识别受体NODs及其信号通路在侵袭性肺曲霉病中的作用

【目的】研究天然免疫系统中胞浆识别受体NODs及其信号通路在小鼠侵袭性肺曲霉病(IPA)中的作用。【方法】小鼠随机分为正常对照组、正常+接种烟曲霉菌组(正常感染组)和免疫抑制+接种烟曲霉菌组(IPA组),经鼻吸入烟曲霉孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织分别进行病理切片,烟曲霉菌落计数,RT-PCR法、Western blot法动态检测小鼠感染烟曲霉菌过程中肺组织NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达,促炎细胞因子TNF-α含量的变化规律。【结果】鼻吸入烟曲霉菌后72 h时,IPA组肺组织出现严重炎症反应,并有大量的菌丝生成,同时各时相点的烟曲霉菌负荷均高于正常感染组;与正常感染组比较,IPA组NOD1、RIP2 mRNA持续低表达,而NOD2 mRNA则在感染最早期(24 h)异常高表达,而在随后的感染过程中一直处于低表达状态;正常小鼠感染烟曲霉菌后,肺组织中促炎细胞因子TNF-α在感染前期皆呈高表达,且最高表达量均出现在48 h或72 h,之后下降并恢复至正常水平。而IPA小鼠促炎症细胞因子TNF-α缓慢且低水平释放。【结论】NOD1、RIP2的表达受到长期抑制,NOD2在感染最早期的过度激活以及随后的抑制表达,引起促炎细胞因子低表达,可能导致了侵袭性肺曲霉的发生发展。     

不同生长阶段的烟曲霉对果蝇自噬水平的影响

目的探究不同生长阶段的烟曲霉对果蝇自噬水平的影响。方法用沙保弱平板培养烟曲霉,收获静息孢子;用沙保弱液体培养基震荡培养烟曲霉,在不同时间收获膨胀孢子、菌丝。以3种形态的烟曲霉分组处理转基因果蝇,组织切片观察烟曲霉形态,Rt-PCR(逆转录PCR)检测自噬相关蛋白LC3BⅡ、Beclin-1mRNA的转录水平,Western blot检测LC3BⅡ、Beclin-1的表达量。结果组织切片观察菌的形态与注入时的形态相符,Rt-PCR检测LC3BⅡ、Beclin-1mRNA的转录水平升高,同时,感染膨胀烟曲霉孢子及菌丝组的果蝇LC3BⅡ、Beclin-1蛋白的表达水平升高。结论烟曲霉膨胀孢子及菌丝能显著提高果蝇自噬水平,而静息孢子不能引起果蝇自噬应答。     

烟曲霉Asp f3和Asp f4线性B细胞抗原表位最小基序鉴定

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)是一种广泛存在于自然界中的条件致病菌,其产生的分生孢子被易感人群吸入后定植于肺部,引起3种曲霉病:致咯血的曲霉肿、致肺纤维化的变应性支气管肺曲霉病、致较高死亡率的侵袭性曲霉病。目前临床上用于诊断烟曲霉感染的血清免疫学指标有半乳甘露聚糖和1,3-β-D-葡聚糖,但特异度和灵敏度方面存在一定的局限性。Asp f3和Asp f4为烟曲霉主要抗原,在感染者血清中存在相应的循环抗体。本研究分别用兔抗Asp f3和Asp f4抗血清对其进行抗原表位扫描,鉴定了8个Asp f3和6个Asp f4最小表位基序肽。用所鉴定的最小表位基序与烟曲霉其他抗原的最小表位基序构建嵌合肽,可能有助于提高烟曲霉感染诊断的特异度和灵敏度。     

临床罕见曲霉菌属的研究进展

全世界每年有超过20万例危及生命的曲霉病感染,其中以烟曲霉感染最为多见。近年来,分子技术的进步发现曲霉病也可以由表型与烟曲霉相似,遗传上截然不同的新菌种引起。临床上,超过20%的曲霉分离株是未被识别的或不常见的菌种,我们称其为罕见曲霉菌种。越来越多侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis, IA)的病例报道与它们相关。这些菌种表现出与烟曲霉不同的毒力和药物敏感性,其临床菌株基因组序列和表型图谱的缺乏,导致其研究受到阻碍。本文就临床罕见曲霉菌属的流行病学、鉴定方法、药敏情况等方面进行文献综述。     

1935例深部曲霉临床分离株资料回顾性分析

目的了解我院深部分离的曲霉菌种构成和临床分布特点,了解烟曲霉感染患者的基础疾病,指导临床烟曲霉深部感染的防治。方法收集2012年1月～2018年12月我院真菌室分离自临床深部标本的曲霉菌株以及其宿主的临床资料进行统计分析。结果 2012～2018年我院真菌室临床深部标本分离的曲霉菌株共计1935例,其中烟曲霉863例,黑曲霉159例,黄曲霉77例,未分类曲霉836例。烟曲霉主要分离自呼吸道标本,标本来源患者主要分布在传染科、呼吸科、老年高干科、ICU、抗生素科以及神经外科等科室。这些患者常见基础疾病为感染性疾病、肿瘤、非感染性的呼吸系统疾病、皮肤及风湿免疫系统疾病、内分泌系统疾病。结论我院深部标本分离的曲霉菌种主要为烟曲霉,主要引发肺部感染。我院分布于上述科室并合并上述基础疾病患者需警惕烟曲霉感染的发生。     

肝移植患者易感烟曲霉菌的致病因素及预防策略

肝移植是治疗终末期肝病的有效手段.而患者术后感染烟曲霉的发生率呈现逐年增高趋势.烟曲霉病与烟曲霉诸多致病因素和机体的防御之间的平衡有关.本文对这些致病因子、防御机制及预防策略进行了综述,为进一步研究烟曲霉病的发病机制和临床干预提供参考资料.     

烟曲霉引起肺部感染致患者死亡2例

近年来,随着新药物和新方法的广泛应用,医院内部深部菌感染（DFI）的发病率目益增高。就曲霉病而言,在过去的10年里,发病率上升了300％,其中烟曲霉是主要的致病菌,占曲霉类真菌所致人类感染的80％～90％。由于烟曲霉病无特异的临床表现,CT扫描和X片无明显特异性。通常的感染途径是通过呼吸道吸入侵入肺部,在免疫缺陷患者中可进一步播散,导致全身多个系统受损。烟曲霉毒力大,且容易被忽视,以致误诊漏诊,危及患者生命。2004年嵊州市人民医院收治2例肺部烟曲霉感染患者,现报道如下。     

维生素D对烟曲霉感染的肺巨噬细胞 自噬机制的初步研究

目的探究维生素D在鼠肺细胞感染烟曲霉后对细胞自噬的影响。方法用一定量的烟曲霉活化孢子感染细胞后,一组细胞加入维生素D(维生素D组),一组细胞加入生理盐水,感染一定时间后用溶酶体探针检测自噬相关分子的表达;收集各组细胞并裂解细胞,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的LC3BII、Dectin-1及ROS的表达水平。结果活化的孢子感染肺巨噬细胞后,维生素D组自噬体与溶酶体共定位减少、吞噬孢子的速率在减少以及ROS水平降低,其对应的胞内Dectin-1、ROS、LC3BII减少且差异有统计学意义。结论烟曲霉感染肺巨噬细胞后,维生素D可通过减弱细胞自噬体与溶酶体的融合并下调自噬信号通路蛋白的表达以达到抵抗烟曲霉感染的作用。     

烟曲霉对人支气管上皮细胞作用及机制的初步研究

目的建立烟曲霉与人支气管上皮细胞的共培养模型,观察不同感染时间人支气管上皮细胞生理特性的变化规律,探讨烟曲霉对人支气管上皮细胞的作用机制。方法用烟曲霉在体外感染人支气管上皮细胞,观察人支气管上皮细胞细胞形态改变,用流式细胞仪测支气管上皮细胞的凋亡率及用real-time PCR测人支气管上皮细胞凋亡基因的表达。结果随烟曲霉作用于人支气管上皮细胞时间的延长,人支气管上皮细胞的生物学形态发生改变,其回缩、变圆量逐渐增加,凋亡率亦逐渐增加,凋亡基因BaK表达明显上调。结论烟曲霉与人支气管上皮细胞共培养可以影响人支气管上皮细胞的形态,诱导细胞凋亡、影响凋亡基因的表达。共培养模型可进一步用于烟曲霉的致病机制研究。     

磷脂酶D缺失对小鼠抗烟曲霉感染过程的影响研究

目的揭示宿主磷脂酶D(phospholipase D,PLD)应对烟曲霉感染过程中的重要作用和可能机制。方法应用滴鼻方式使野生小鼠和磷脂酶D双基因敲除小鼠(pld1~(-/-)pld2~(-/-))感染烟曲霉孢子后,取小鼠肺组织、抽取支气管肺泡灌洗液,应用组织匀桨与菌落计数的方法检测小鼠肺组织中烟曲霉负荷,采用eBioscience公司的多因子检测试剂盒检测肺泡灌洗液中炎症因子分泌情况;分离两种小鼠的骨髓细胞并诱导分化为成熟巨噬细胞(BMDM),制霉菌素法检测其吞噬和杀死烟曲霉孢子的能力。结果感染烟曲霉孢子6 h后,pld1~(-/-)pld2~(-/-)小鼠肺部真菌负荷显著高于野生小鼠,其肺泡灌洗液和肺泡巨噬细胞中均存在大量孢子,肺泡灌洗液中炎症因子浓度显著升高;体外实验证明pld1~(-/-)pld2~(-/-)小鼠的BMDM细胞吞噬和杀死烟曲霉孢子的能力显著减弱。结论小鼠pld1基因和pld2基因同时敲除导致其巨噬细胞的吞噬和杀死烟曲霉孢子的能力显著减弱,进而可能降低小鼠抗烟曲霉感染的能力。同时机体可能通过分泌大量的炎症因子以招募其他免疫细胞杀灭烟曲霉孢子。     

两性霉素B脂质体抗烟曲霉的研究

目的 通过对两性霉素B脂质体（L-AmB）的烟曲霉抵抗实验的研究,初步探讨其抗真菌的机制,为临床的合理使用两性霉素B脂质体提供实验指导。方法 将烟曲霉菌株复苏后,接种于沙保弱平板,恢复正常毒力。用洗液洗脱烟曲霉的孢子,进行两性霉素B脂质体及两性霉素B体外抗真菌的研究;用注射器吸取一定量的含烟曲霉孢子的溶液,注入小鼠的肺部,当确证其肺部感染了烟曲霉后,用L-AmB进行治疗,后期通过观察小鼠肺部的病理结果判断疗效并检测鼠肺部细胞在药物治疗后的细胞自噬相关基因LC3B,Beclin-1的水平。结果 L-AmB组的体内外抑菌作用强于AmB组且L-AmB可显著增加鼠肺部细胞的自噬水平。结论 两性霉素B脂质体可通过显著的增加细胞的自噬水平,来有效的抵抗烟曲霉的感染。     

青蒿琥酯治疗肺烟曲霉感染自噬机制

目的探究青蒿琥酯在鼠肺感染烟曲霉后,对鼠肺自噬相关蛋白的表达影响。方法用一定量的烟曲霉的活化孢子感染鼠肺,建立肺烟曲霉病模型。同时用青蒿琥酯注射一组鼠肺,两性霉素B注射一组鼠肺,剩余的作为感染组。24h后,取各组鼠肺进行病理切片染色,观察各组病理情况;取各组鼠肺的组织并匀浆,收集各组的孢子,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性并将肺巨噬细胞进行分离、裂解,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达水平。结果青蒿琥酯注射组的鼠肺病理切片中的孢子比感染组数量少且聚集在一起,未长出菌丝,而体外分离的真菌孢子,青蒿琥酯组的活性明显受到抑制。经Western-blot显示青蒿琥酯具有增强肺巨噬细胞Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达。结论青蒿琥酯可通过抑制烟曲霉的活性和增强鼠肺巨噬细胞的自噬水平,对抗鼠肺烟曲霉感染。     

烟曲霉黑色素的研究进展

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)是一种分布于世界各地的腐生真菌,属于人类临床常见的三大机会性致病真菌之一,是侵袭性曲霉菌病的主要病原菌。烟曲霉可以产生DHN-黑色素(dihydroxynaphthalene melanin)和脓黑素(pyomelanin)这2种类型黑色素。本综述介绍烟曲霉黑色素产生的遗传代谢途径、功能以及与宿主免疫系统相互作用的最新认识,有助于更好地理解烟曲霉的病理生理特征,为烟曲霉感染快速诊断技术和新型抗真菌药物的研发提供理论依据。     

烟曲霉感染时内在化Dectin-1介导巨噬细胞自噬活化

目的探究在烟曲霉感染时Dectin-1是否内在化表达并介导了巨噬细胞的自噬活化,初步明确其作用机制。方法采用Western blot法和免疫荧光技术,观察经β-1,3-D-葡聚糖酶消化前后的烟曲霉孢子刺激下,RAW264.7细胞内Dectin-1与LC3Ⅱ的表达与定位,通过DCFH-DA探针检测消化β-葡聚糖对活性氧(ROS)生成的影响。结果烟曲霉孢子刺激后RAW264.7细胞的Dectin-1与LC3Ⅱ表达水平显著升高,同时二者呈斑点状聚集并共定位于烟曲霉孢子表面;消化β-葡聚糖后Dectin-1与LC3Ⅱ表达量降低,荧光斑点消失,并且ROS的生成受到抑制。结论烟曲霉感染时Dectin-1提高自身内在化表达并诱导了巨噬细胞自噬功能的活化。     

肝移植术后曲霉的气道定植与侵袭性曲霉病的关系

目的评价肝移植术后曲霉气道的定植及其发生侵袭性感染的风险。方法回顾2003—2004年南京八一医院和上海长征医院56例肝移植患者进行的连续组织学检查和曲霉培养结果。结果24例患者被分离出曲霉,2例发生侵袭性烟曲霉感染。这2例患者在移植后6个月内都有烟曲霉的定植,并且都死亡,占所有移植后死亡的29％。无曲霉定植者都未发生侵袭性曲霉感染。结论肝移植术后的侵袭性曲霉感染较为少见,但常致死,曲霉定植常见但为一过性,由于气管侵袭性曲霉感染只发生在有烟曲霉定植的移植后6个月内的患者,所以在此期间进行预防性的治疗能否有效降低侵袭性曲霉感染值得研究。     

烟曲霉肺部感染的免疫逃逸作用机制研究进展

侵袭性曲霉感染是免疫低下患者死亡重要原因。烟曲霉作为曲霉感染中最为常见的一类是重症患者中常见的肺部真菌感染,具有侵袭性和难治性。其通过吸入宿主体内,通过分泌的蛋白水解酶等定植于肺部。为了对抗宿主体内的保护性免疫反应并持续性生长繁殖,烟曲霉已经开发出了许多复杂且有效的免疫逃逸策略,包括黏附/定植、适应内环境压力、改变营养摄取、逃避宿主补体监视和下调宿主抗真菌反应等多种机制。了解真菌病原体与宿主间复杂的免疫串扰将是研究真菌感染发生机制和治疗标靶的核心内容,为从抗宿主免疫层面探讨烟曲霉治疗方法提供新思路。该文对近年来有关烟曲霉肺部感染的免疫逃逸机制研究进展作一综述。     

单核细胞抗烟曲霉感染作用的研究进展

烟曲霉是临床常见的机会性致病真菌,好发于免疫低下人群,常因吸入孢子导致肺部感染,治疗困难。烟曲霉的致病性与其较强的生存能力有关,但主要取决于宿主免疫状态,尤其是天然免疫功能。单核细胞是天然免疫的重要效应细胞,可分化为树突细胞和巨噬细胞。依据其表面分子分型,单核细胞功能上分别以吞噬抗原、呈递抗原和杀伤抗原为特点,在抗烟曲霉感染中具有较高的抵御能力和诊断价值。现阶段研究基于不断发展的荧光标记、灌流培养、光谱成像、基因敲除等技术,通过体外细胞实验和小鼠体内实验,观察到单核细胞与烟曲霉相互作用。在烟曲霉孢子入侵早期,单核细胞即启动基因表达,直接杀灭孢子,也可通过增强中性粒细胞杀孢子活性间接参与抗感染免疫调节,其中白细胞介素家族可能是关键信号分子。     

烟曲霉与宿主细胞相互作用规律的初步研究

目的研究烟曲霉侵入宿主细胞过程中的基本规律及宿主细胞肌动蛋白骨架的变化情况。方法利用表达绿色荧光的烟曲霉ATCC13073,研究烟曲霉侵入上皮细胞和被巨噬细胞吞噬随时间的变化规律。结果烟曲霉侵入吞噬细胞和非吞噬细胞的量随时间呈现完全不同的规律,烟曲霉侵入上皮细胞A549能力较弱,在7h后侵染量才有明显的增加,为原始接种量的（0.09±0.01）%。前3h,鼠巨噬细胞J774吞噬量迅速升高,然后侵染量缓慢下降。烟曲霉侵入宿主细胞过程中会引起宿主细胞肌动蛋白骨架的重排,侵入过程中伴有吞噬杯的形成。结论巨噬细胞吞噬烟曲霉和烟曲霉侵入上皮细胞规律有明显不同,侵入过程都伴随肌动蛋白骨架的重排。