一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简单电洗脱装置

我们设计了一种简单电洗脱装置,从琼脂糖胶中回收ＤＮＡ。该装置由两个带旋盖的小管、两块透析膜和一个凝胶屏障组成。在电场作用下,ＤＮＡ从凝胶中迁移出来,通过凝胶屏障进入由凝胶屏障和透析膜组成的回收小仓。用微量吸样器收集ＤＮＡ,乙醇沉淀和清洗。该法ＤＮＡ的回收率约８５％;回收的ＤＮＡ可用于基因工程常规实验。     

一种从重组质粒快速提纯DNA插入片段的方法

本文介绍一种从重组质粒中快速提纯ＤＮＡ插入片段的方法。质粒ＤＮＡ的制备简单、快速、分离的质粒ＤＮＡ可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯ＤＮＡ插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的ＤＮＡ片段可用于连接和制备杂交探针等。     

一种改进的快速高效DNA回收法

本文介绍了一种简易、高效、快速的ＤＮＡ回收法。该法回收ＤＮＡ效率可达９０％以上,且省时经济、适用范围广。回收的ＤＮＡ片段稍加纯化处理即可用于酶切、连接等多种分子操作。     

一种用于PCR模板制备的电泳产物简易回收方法

为了探索一种简便、有效而且能从琼脂糖凝胶中大量回收用于第2次PCR扩增的DNA电泳条带的方法,采用刀片切胶法和牙签插胶法从琼脂糖中回收DNA,并进行了两种方法的比较．结果显示牙签插胶法回收的DNA用作第2次PCR的模板,获得了清晰、稳定的PCR产物电泳条带,用该法成功地制备了一批DNA微阵列探针．由此可见牙签插胶法是一种简便、快速、有效的用于PCR模板的DNA琼脂糖凝胶回收法．     

一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子

介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速ｍＲＮＡ差异显示技术．其特点是不用同位素标记,操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的ｃＤＮＡ带,便于ＤＮＡ回收和进一步重组克隆．用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子．     

一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子

介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速ｍＲＮＡ差异显示技术。其特点是不用 位素标记操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的ｃＤＮＡ带,便于ＤＮＡ回收和进一步重组克隆。用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子。     

草鱼出血病病毒基因组的cDNA合成、克隆及部分序列分析

采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液。提纯的病毒粒子经蛋白酶Ｋ处理和酚氯仿抽提,在１％琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到１１条ｄｓＲＮＡ,利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段。纯化的ｄｓＲＮＡ溶于９０％的ＤＭＳＯ中,７０℃变性１５ｍｉｎ,然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的ｃＤＮＡ,并平头连接于ｐＺＥｒＯ２．０载体的ＥｃｏＲＶ位点,电转化ＴＯＰ１０感受态细胞。重组质粒经酶切、ＰＣＲ扩增得到大小不等的插入片段,ｃＤＮＡＲＮＡ斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段。采用循环ＰＣＲ测序的方法,对其插入片段进行了序列测定,对其中第１１片段的部分序列作了报道。     

一种改良的从银染的聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA的方法

ＣｌｉｎＣｈｅｍ,１９９８,４４（９）报道了Ｓｔｅｖｅｎ等介绍的从聚丙烯酰胺凝胶上将ＤＮＡ转移到ＤＥＡＥ膜上的技术。此技术能同时进行多个样品的处理和纯化,被纯化的差异显示法（ＤＤＡ）产物电泳条带单一,分离的范围为１００～７００ｂｐ的ＤＮＡ,回收的ＤＮ...     

人琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的几种简便方法

介绍两类从普通琼脂糖电泳凝胶中回收ＤＮＡ的简便,快捷,高效且廉价的方法,第一类为电泳洗脱法,方法ａ．利用１．５ｍＬ微量离心管,１ｍＬ吸头,尼龙网膜和透析膜做成的一个小装置,快速有效回ＤＮＡ,最终回收率为７０％左右,方法ｂ：不用ＤＥＡＥ－纤维素膜,而用透析膜在凝胶中作出横隔挡在ＤＮＡ条带前,最终回收率为５０％左右,第二类为冰冻融解法,最终回收率也在５０％左右,如果联合使用冰冻融解法和电泳洗脱法,回收     

用透析膜从琼脂糖胶中回收DNA片段

分离与回收DNA片段是基因操作的重要环节之一。本文介绍了一个用透析膜从琼脂糖胶中回收 DNA 片段的改进方法。利用本法回收DNA片段洗脱容易、节约时间、回收率在80％ 左右。回收的 DNA片段可用于酶切反应、连接反应和用缺口位移反应制备32p标记DNA探针。     

用DNA酶切小分子片段在非洲爪蟾卵中提取物中实现非细胞体系核装配

用质粒ｐＢＲ３２２的ＤＮＡ酶切片段,长度分别为７５０,３７５和１８６ｂｐ作为外源ＤＮＡ在非洲爪蟾卵撮以物中实现了非细胞体系的核装配。将分离纯化得到的ｐＢＲ３２２ＤＮＡ酶切后经低熔点琼脂糖回收ＤＮＡ片段,长度为７５０,３７５和１８６ｂｐ,分别加入到爪蟾卵提取物再生系统中温育,经ＤＡＰＩ染色,孚尔根染色及电子显微镜观察发现能装配量的重建核。     

从琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的几种简便方法

介绍两类从普通琼脂糖电泳凝胶中回收ＤＮＡ的简便、快捷、高效且廉价的方法．第一类为电泳洗脱法．方法ａ：利用１．５ｍＬ微量离心管、ｌｍＬ吸头、尼龙网膜和透析膜做成的一个小装置,快速有效回ＤＮＡ,最终回收率为７０％左右．方法ｂ：不用ＤＥＡＥ－纤维素膜,而用透析膜在凝胶中作出横隔挡在ＤＮＡ条带前,最终回收率为５０％左右;第二类为冰冻融解法,最终回收率也在５０％左右．如果联合使用冰冻融解法和电泳洗脱法,回收率可进一步提高至９０％．     

盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验的几点改进

对盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验提出了几点改进,以满足本科生实验的要求。实验主要比较和分析了两种封胶方法（原胶布封胶与改进的琼脂糖封胶）和两种染色方法（原考马斯亮蓝染色法与改进的考马斯亮蓝染色法）对凝胶分离血清蛋白实验的影响。结果显示,改进的盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法是一种灵敏、快速、简便、安全、分辨率高的实验方法。结论：改进的盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验非常适合本科生实验。     

植物发育基因克隆技术的新进展

过去２０年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因,这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算要应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从ＣＤＮＡ文库或基因组文库中筛选出目的基因,而未知其编码产物的发育基因的分离克则是非常困难的工作,以前物主要方法有ＤＮＡ标签法,作图克隆法,差别筛选法和扣除发交法这些方法虽然都取得一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更广泛的应用,     

一种改良制备磷酸钙-DNA共沉物的方法

一个基因被克隆后,人们总希望将其导入不同类型细胞内,以研究基因调控、基因表达、分离特定蛋白质产物等。要完成这些目的,都必须将ＤＮＡ有效地导入细胞。磷酸钙法是当前较为常用的将ＤＮＡ导入真核细胞的方法之一。此法成功的关键在于制备理想的磷酸钙—ＤＮＡ共沉物...     

从土壤中分离DNA的研究进展

从土壤中分离ＤＮＡ用于各种分析有着重要的意义。本文论述了土壤中存在的生物活笥抑制因子及其对策,讨论了从土壤中分离ＤＮＡ的基本步骤注意的问题,并列举了现任中从土壤中分离ＤＮＡ的简便方法     

一株中华绒螯蟹呼肠孤病毒RNA1 cDNA文库构建及其RNA聚合酶基因部分序列分析

在中华绒螯蟹体内分离一株呼肠孤病毒（命名为EsRV905株）,采用Trizol试剂提取病毒核酸,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,碎胶法回收基因组各节段。随机引物法合成第一节段的cDNA文库,胶回收试剂盒去除小片段,平端连接于载体,化学转化,利用蓝白斑筛选阳性克隆子,酶切鉴定重组质粒。从基因组第一节段的重组质粒中选择2个插入片段为1.5kb的质粒测序,结果得到包括RNA聚合酶主要特征性结构的一段序列。结果说明,这株蟹呼肠孤病毒的RNA聚合酶定位于基因组第一节段。     

一株中华绒螯蟹呼肠孤病毒RNA1 cDNA文库构建及其RNA聚合酶基因部分序列分析

在中华绒螯蟹体内分离到一株呼肠孤病毒(命名为EsRV905株).采用Trizol试剂提取病毒核酸,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,碎胶法回收基因组各节段.随机引物法合成第一节段的cDNA文库,胶回收试剂盒去除小片段,平端连接于载体,化学转化,利用蓝白斑筛选阳性克隆子,酶切鉴定重组质粒.从基因组第一节段的重组质粒中选择2个插入片段约为1.5kb的质粒测序,结果得到包括RNA聚合酶主要特征性结构的一段序列.结果说明,这株蟹呼肠孤病毒的RNA聚合酶定位于基因组第一节段.     

简单快速分离无RNA的大肠杆菌质粒DNA的方法

本文介绍一种简单快速分离质粒ＤＮＡ方法。此方法有两个主要步骤。用这种方法分离的质粒ＤＮＡ纯度高、无ＲＮＡ,并可用于酶切、连接等操作。     

不经染色直接从SDS-PAGE制备凝胶中准确切下所需蛋白条带的方法

蛋白样品的垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)不但是一种最常用的蛋白分析方法,也经常用于蛋白质的制备。从电泳凝胶上纯化蛋白,一般都要先用考马斯亮蓝染色,然后切下所需的蛋白条带。这里介绍一种可以不染色,直接从SDS-PAGE制备凝胶上准确切割所需蛋白条带的方法。与染色后切胶的方法相比,这种方法简单、省时,分离到的蛋白容易从胶中洗脱回收,并可明显提高回收率,而且省去了令人烦怖的从回收的蛋白中脱去染色时结合的染料的问题。作者曾用此方法分离过多种蛋白,屡试不爽。这种方法与一般的SDS-PAGE制备电泳的差别主要在电泳结束后对凝胶的处理上。