不同浓度红景天苷对γ射线和质子辐照质粒DNA的影响

利用14．2MeV的质子和60↑Co产生的γ射线在200Gy的剂量下分别对添加了不同浓度红景天苷的pUC19质粒DNA样品进行了辐照,凝胶电泳分析结果表明,红景天苷在两种辐照过程中均对DNA具有一定的保护作用,并且随着浓度的增加保护作用增强。同时还发现质子辐照后DNA样品中出现了线性形态的,而γ射线辐照后则没有出现,再次证实质子对DNA的损伤作用强于γ射线,这应该和质子与物质相互作用复杂以及质子对物质的直接电离作用相关。     

7种方法提取质粒DNA用于序列分析的比较

对取自同一摇瓶内的菌体,采用7种不同提取质粒的方法分离DNA,将分离的DNA做电泳观察、紫外吸收及序列分析,结果表明CTAB法具有快速、方便、可行的特点。     

γ辐射诱导质粒DNA单链断裂的反向氧效应

以凝胶电泳法研究了γ辐射引起质粒ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢ）的氧效应,发现含自由基清除剂－甘露醇的ＤＮＡ溶液在Ｎ２饱和条件下的ＳＳＢ产额大于空气饱和时的产额,使得Ｓ析氧增比（ＯＥＲ）小于１,即ＤＮＡ之ＳＳＢ存在反向氧效应,同时,Ｇ（ＳＳＢ）及其氧增比均随甘露醇浓度的增大而减小。     

γ射线辐射诱导质粒DNA单链断裂:与DNA和自由基清除剂浓度的关系

凝胶电脉扫描法研究表明,γ射线辐照下,超螺旋ｐＢＲ３３２ＤＮＡ分子的残余率随剂量的增大而按指数规律减小,而辐射诱导单链断鲜明（ＳＳＢ）数则与剂量线性相关,由于ＯＨ与ＤＮＡ反应遵循非均一动力学过程,平均引起一个ＳＳＢ所需的剂量Ｄ０随自由基清除力的增加而非线性地增大,对含一定浓度甘露醇的ＤＮＡ溶液,Ｇ（ＳＳＢ）与Ｃ（ＤＮＡ）的双倒数具有线性关系,并以二级动力学描述了ＤＮＡ和甘露醇分子对ＯＨ的竞争反应,     

大豆11S球蛋白Gy5(A3B4)的基因克隆和序列分析

大豆11Ｓ球蛋白(Ｇｌｙｃｉｎｉｎ)是大豆种子的主要贮藏蛋白,分子量为360ｋＤ,由6对相同的蛋白亚基(每对亚基的分子量约60ｋＤ)构成。每对亚基又是由一个酸性Ａ肽(35～45ｋＤ)和一个碱性Ｂ肽(22ｋＤ)通过二硫键连接而成。Ａ肽和Ｂ肽源自同一个基因,即首先由一个大的ｍＲ?..     

基于CGR的DNA序列的时间序列模型(英文)

利用DNA序列的混沌游戏表示(chaos game representation,CGR),提出了将2维DNA图谱转化成相应的类谱格式的方法。该方法不仅提供了一个较好的视觉表示,而且可将DNA序列转化成一个时间序列。利用CGR坐标将DNA序列转化成CGR弧度序列,并引入长记忆ARFIMA(p,d,q)模型去拟合此类序列,发现此类序列中有显著的长相关性且拟合度很好。     

中国不同临床型来源的丁型肝炎病毒(HDV)部份基因组序列的分析比较

从我国河南、内蒙、北京等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中,筛选获得４份ＨＤＶ—ＲＮＡ阳性血清。经逆转录—聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ—ｃＤＮＡ片段（６５１—１６６０ｎｔ,按Ｍａｋｉｎｏｅｔａｌ定位）,并克隆到ＰＧＥＭ—３ｚｆ（－）或ＰＧＥＭ－Ｔ载体上。经序列分析研究其基因结构特点,结果表明,同属基因Ⅰ型的４株中国丁型肝炎病毒,在基因序列上具有相似的保守区域,但与同亚型ＨＤＶ健康携带者相比,重症肝炎病人与慢性丁肝病人来源的ＨＤＶ毒株,在多个位点上发生了核苷酸的改变,由此推导的抗原编码区相应的氨基酸发生了替换。这些核苷酸与氨基酸的改变位点散在,但多集中于抗原编码区的羧基端。如慢性丁肝发生的６个氨基酸改变中,５个位于１６６—１８８位;重症肝炎发生的１２个氨基酸改变中,８个位于１７０—２１４位。有趣的是,在１７５位上发生了由脯氨酸向丝氨酸的共同替换。提示ＨＤＶ的感染致病可能与ＨＤＶ的基因结构相关。     

一种简便经济制备银染序列分析模板质粒DNA的方法

用改良碱裂解法提取的质粒DNA,经RNA酶消化后做银染列分析的模板,所得测序结果清晰、准确,从而使银染法模板的制备更加经济简便。     

~（60）Co－γ射线诱变钝顶螺旋藻的研究

用不同剂量的６０Ｃｏ－γ射线诱变钝顶螺旋藻Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｐｌａｔｅｎｓｉｓ出发株（Ｓｐ）ＩＳ－９００１０,筛选获得两株抗高光抑制突变株（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０和（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著变短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制,１３０００ｌｘ光强下出发株和两个突变株的代时分别为２９．４、２０．８和２２．２ｈ。（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１的光合作用和呼吸作用与出发株相似,而（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０明显地表现出高光合、低呼吸作用。突变株和出发株都属于中温品系,最适温度为２８℃,具有较广的温度适应范围（２３～３５℃）以及相同的耐盐性,但突变株的生长速率比出发株快、代时短。此外三者的蛋白质含量、氨基酸组成差别不大：（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１的可溶性多糖比出发株减少４０％。而在（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０中其含量提高６０％。     

~（60）Co－γ射线诱变柠檬酸产生菌黑曲霉Co9－6的研究

本试验采用￣（６０）Ｃｏ－γ射线对柠檬酸产生菌黑曲霉Ｃｏ９－６进行辐射,经两次处理后选育出Ｌ１２１７和Ｌ８０１两株优良柠檬酸产生菌。中试结果表明菌株Ｌ１２１７较Ｌ８０１更优：产酸率较菌株Ｃｏ９－６提高１７．６％、发酵周期缩短１３．４％、对糖转化率提高１３．３％。     

红檵木的3′端延长随机引物扩增DNA(3′-ERPAD)标记

为了对116个10－mer随机引物的RAPD分子标记进行深入了解,探讨分子标记与园艺性状的关系,筛出多态性明显、重复性好、亮度大、分子量也较大（1031bp以上）的10－mer随机引物,在其3'端添加一任意碱基,对14个红木材料和2个来源不同的生态型木材料进行3'-ERPAD标记分析。发现在S2和S35的延伸引物中能够得到最佳扩增结果的引物对是S2－G＋S2－C和S35－A＋S35－C,它们的扩增结果都含有与各自基本引物相同的差异扩增带,这些差异带分别是S21500、S21031和S353000、S35900、S35560。通过与园艺性状比较,发现S21500片段可能与控制叶色的基因有关。     

抗辐射茵(Deinococcus radiopugnance)的质粒pUE30的克隆及序列分析

抗辐射菌(Deinococcus radiopugnance)ATCC 19172株中存在约14.6 kb、8.7 kb、7.0 kb、3.65 kb、及2.45 kb等5种以上的隐秘性质粒,对其中的约2.45 kb的小型质粒pUE30进行了序列测定与分析,该质粒由2 467 bp的碱基对组成,其中包含了267 nt及1 068 nt的2个开放阅读框架(open reading frame,ORF)和一个AT-rich领域。经过与GenBank的数据库分析,其中267 nt的ORF(repC)与豆科根瘤菌(Rhizobium leguminosa-rum)及根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)由来的质粒的RepC蛋白质具有一定的同源性;1 068 nt的ORF(repD)与抗辐射菌(Deinococcus radiodurans)Sark株的质粒pUE10的RepU蛋白质、嗜热菌(Thermus sp.)ATCC27737株由来的质粒pMY1的RepA蛋白质具有较高的同源性。研究结果对于利用该小型质粒构建大肠杆菌-抗辐射菌属间的穿梭载体,表明抗辐射菌高效正确的DNA损伤修复机理等具有重要的意义。     

拟南芥AtPSK3基因的克隆及序列分析

根据拟南芥基因组数据库提供的信息,首次以特异引物经PCR技术克隆到拟南芥硫肽激素α的一个前体基因———AtPSK3,并对其进行了测序。序列分析表明,所获得的AtPSK3基因全长为505bp,含有一个内含子和两个没有3′或5′非转译区的外显子,与数据库提供的序列比较,同源性为100%。     

Caspase-3反义寡核苷酸对γ-射线诱导的HL-60细胞中caspase-3表达与细胞凋亡的抑制作用

γ-射线可诱导人髓性白血病细胞株HL-60细胞凋亡,但其机制尚未完全明了。为了观察caspase-3在这种细胞凋亡模型中的作用,本研究设计合成针对caspase-3mRNA5′-非编码区和编码起始区的反义寡核苷酸(ASODNs),即ASODN-1和ASODN-2,以脂质体介导法将不同浓度ASODN-1和ASODN-2转染进入HL-60细胞,γ-射线照射。应用TUNEL法观察凋亡细胞形态学变化及检测凋亡细胞百分率,免疫细胞化学、Westernblotting和RT-PCR技术分别检测caspase-3及其mRNA在引入ASODNs前后的表达水平,并以错配寡核苷酸(MODN)转染及未转染细胞作为对照组。TUNEL法检测发现,当ASODN-1和ASODN-2转染终浓度≥3μmol/L时,γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡率降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。免疫细胞化学结果显示,与两对照组相比,转染ASODNs后各组caspase-3阳性细胞率显著下降,阳性细胞染色减弱,其平均灰度值显著增高(P<0.01)。Westernblotting检测显示,转染ASODNs组细胞caspase-3蛋白酶原表达降低,其中ASODN-1组显著低于ASODN-2组。RT-PCR结果显示两对照组细胞caspase-3mRNA均有明显表达,转染ASODNs后caspase-3mRNA表达丰度降低。另外,ASODN-1抑制细胞凋亡和caspase-3表达的作用显著强于ASODN-2(分别为P<0.05和P<0.01)。实验结果表明,caspase-3mRNAASODNs能够抑制γ-射线照射诱导的HL-60细胞凋亡,下调caspase-3蛋白和caspase-3mRNA的表达水平,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性。     

南方鲇生长激素完整cDNA的克隆及其DNA序列分析

采用RT-PCR法和3'、5'RACE(Rapid amplification of cDNA ends）法从南方鲇脑垂体RNA克隆出生长激素(Growth hormone,GH）cDNA。此cDNA全长1087nt(含Rloy(A)),其5'端非编码区长52nt、阅读框（Open rdading frame,ORF）长603nt、3'端非编码区长415nt。其推导的GH由200个氨基酸组成,其中前24个氨基酸为信号肽部分。氨基酸序列比较表明,南方鲇（GH）与Pangasianodon gigas、Ictalurus punctatus 和Heteropneustes fossilis三种鲇类的同源性分别为97.5%和95.0%,与鲢、鳙、草、鲤鱼的GH同源性达76.0%以上,而与人的GH(I、Ⅱ)同源性最低为31.0%和29.5%。     

单克隆抗体ELISA测定UVB诱导的DNA损伤(英文)

本文采用单克隆抗体酶联免疫吸附分析法测定了ＵＶＢ诱导ＤＮＡ产生的ＣＰＤ和６４ＰＰ。经０．５ｍＷ／ｃｍ２ＵＶＢ处理１５ｍｉｎ的小牛胸腺和鲱鱼精ＤＮＡ,ＣＰＤ和６４ＰＰ含量显著增加,而未经ＵＶＢ处理的对照ＤＮＡ则没有二聚体形成。     

水稻(Oryza sativa L.)重复DNA顺序的克隆及序列分析——重复顺序存在意义的探讨

以大肠杆菌启动子选择质粒pKK175-6、pKK232-8为载体,将通过复性动力学方法获得的水稻重复DNA顺序片段进行克隆。阳性克隆菌株表现出对四环素或氯霉素不同程度的抗性。DNA序列分析表明．克隆到的某些水稻重复DNA顺序具有丰富的基因表达调节元件的同源序列。     

花椰菜花叶病毒(新疆分离物)基因组DNA的全部核苷酸序列

用Maxam-Gilbert化学切断法,从含全长病毒DNA的克隆pCaMV C17中,测定了CaMV-XJ基因组的全部核苷酸序列。CaMV-XJ DNA含有8,060个碱基对。在不同的译读相位中,CaMV基因组含有6个主要ORF或可能的基因,与其他巳作全序列测定的三个CaMV分离物比较,有三个显著的差别;(1)ORFⅥ编码的氨基酸变化达16％,显著高于其他区域的变化和其他三个分离物之间的差别,(2)在ORFⅣ的近氨基末端有39bp的插入,它与被插入区的序列几乎是直接重复;(3)由于核苷酸置换而引入了终止信号,所以T.Hohn[2]推测,可能存在的ORFⅦ不可能编码有功能的蛋白。     

絮凝基因(FLOIG)的序列测定及分析

虽然酵母细胞絮凝的确切机制至今尚无定论,但已克隆了多个与絮凝相关的基因,如FLOI、FLO5、FLO11等[1-3].这些基因的表达可以赋予非絮凝酵母细胞以絮凝能力.酵母细胞的絮凝特性在酿造工业、固定化酶、精细化工和物生制药等领域具有广泛的应用价值[4,5].从一株强絮凝酿酒酵母菌株中克隆到一个约4.3kb的NDA片段,酵母转化实验证明该DNA片段能够赋予非絮凝酵母菌株以絮凝能力[6].本文简要报道对该DNA片段进行序列测定和分析的结果.