心室肌Cl—通道电流的性质及其意义

近年来,在豚鼠,兔心室肌上发现了一种由β－肾上腺素能激活的Ｃｌ＾－电流。此种ＩＣｌ的主要特点为：外向整流性质,时间不依赖性,对细胞外Ｎａ＾＋变化敏感,Ｃｌ＾－通道的活动受细胞内ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶Ａ的调节。     

单羧酸类Cl-通道阻断剂对心室肌CFTR Cl-通道的影响

本文采用全细胞膜片箝与细胞内灌注技术,观察了单羧酸类Ｃｌ＾－通道阻断剂对豚鼠心室肌囊性纤维变性膜透性调节蛋白（ＣＦＴＲ）Ｃｌ＾－电流的影响,细胞包９－ＡＣ以可逆方式增强异丙肾上腺素（ＩＳＯ）激发的ＣＦＴＲＣｌ＾－的外向电流成分,５－ｎｉｔｒｏ－２－（３－ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ）－ｂｅｎｚｏａｔｅ（ＮＰＰＢ）和二苯胺羧酸（ＤＰＣ）对ＩＳＯ发的ＣＦＴＲＣｌ＾－电流的作用呈现先增强后抑制的双     

异丙酚抑制豚鼠心室肌细胞异丙肾上腺素诱发的氯离子电流

异丙酚抑制豚鼠心室肌细胞异丙肾上腺素诱发的氯离子电流周军田鸣１周兆年（中国科学院上海生理研究所,上海２０００３１;１徐州医学院麻醉医学研究所）异丙酚（Ｐｒｏｐｏｆｏｌ）是一种临床常用的新型静脉复合麻醉药,全身应用时可明显降低人和动物的动脉舒张压,不影...     

葛根素对大鼠心室肌细胞动作电位及钾通道电流的影响

目的:观察葛根素对大鼠心室肌细胞动作电位及钾通道电流的影响。方法:用常规微电极方法记录大鼠心室肌细胞动作电位,用全细胞膜片钳技术记录游离心室肌细胞钾离子流。结果:不同浓度的葛根素均能延长大鼠心室肌细胞动作电位时程(APD)及抑制内向整流钾电流,具有明显的浓度依赖关系。结论:葛根素延长APD,抑制内向整流钾电流,可能是其抗心律失常的机制。     

丹参酮Ⅱ—A磺酸钠对分离的豚鼠心室肌单细胞慢反应...

The sodium channels of dissociated single ventricular cells of adult guinea pig heart were inactivated by partial depolarization in high K+ (25 mmol/L) Tyrode's solution and slow response action potential was elicited by intracellular stimulation. An obvious inhibition of the response was observed in the presence of 20 mumol/L sodium tanshinone II-A sulfonate (DS-201). In the concentration range from 1 mumol/L to 20 mumol/L, the inhibition effect of sodium tanshinone II-A sulfonate on the slow response action potentials enhanced by 0.28 mumol/L isoprenaline is concentration-dependent. Moreover, the inhibition effects of sodium tanshinone II-A sulfonate become stronger with the increase (in the range of 6.9 nmol/L to 0.55 mumol/L) of isoprenaline. The above-mentioned results suggest that sodium tanshinone II-A sulfonate may be a kind of effective calcium channel blocker. Under the effect of high concentration (50-100 mumol/L) of sodium tanshinone II-A sulfonate, the amplitude of fast response action potential of dissociated ventricular myocytes of adult guinea pig was decreased and the time to reach the peak was prolonged. All these results indicate that sodium channels were blocked to a certain extent by the high concentration of sodium tanshinone II-A sulfonate.     

急性低氧对心室肌ATP敏感钾电流的影响

目前,ＡＴＰ敏感钾通道在心律失常发生中的作用还不十分清楚,在心肌缺血时,细胞内钾丢失及其引起的细胞外钾积聚可导致严重的室性心律紊乱。本实验观察到,在正常细胞外钾离子水平下,急性低氧只能引起 部分钾离子外流减少,该部分电流对ＡＴＰ敏钾通道阻断剂优降糖不敏感。     

应激对大鼠心室肌细胞L-型钙离子通道的影响

目的 :研究应激对心室肌细胞L 型钙离子通道电流及激活、失活门控动力学特性的影响。方法 :制备离体心室肌细胞并用去甲肾上腺素 (NE)诱导建立应激心肌细胞模型 ,应用流式细胞术 (FCM )和Fura 2荧光分光光度法测定应激心室肌细胞的凋亡率和心肌细胞内游离钙浓度变化。利用膜片钳全细胞钳制记录法记录应激心室肌细胞L 型钙离子通道电流I V曲线图及稳态激活、失活曲线图。结果 :FCM检测发现 1 0 - 4mol/L的NE模拟应激可导致心室肌细胞凋亡率明显上升 ,对照组 :0 .36 % ,应激组 :2 .1 7% (P <0 .0 1 )。 1 0 - 4mol/L的NE干预使Ica L峰电流幅值显著性上升 ,激活曲线分析发现应激后曲线明显左移 ,半数最大激活膜电位 (V1 /2 )为 (- 1 4 .59± 0 .2 4 )mV ,较之于对照组 :(- 0 .69± 0 .36)mV ,差异显著 ,而稳态失活曲线特性未发生有意义的改变。实验组心肌细胞内游离钙浓度较对照组升高 1 6 .7%。结论 :应激可导致L 型钙离子通道电流增加 ,通道更易于激活 ,通道的这种异常活动可能导致钙超载 ,从而引起心肌细胞凋亡 ,介导应激性心肌损伤的发生     

幼鼠和成年大鼠心室肌细胞起搏电流的改变

目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),探讨幼鼠和成年大鼠心室肌细胞起搏电流(If)及超极化激活的环核苷酸门控通道(HCN)亚型的改变。方法:分离3d的幼鼠和成年大鼠的心室肌细胞;测定HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA的表达;记录If并研究其特性。结果:在新生大鼠心室肌细胞记录到If并得到电流密度-电压曲线,其激活电压约为-75mV;实时定量PCR检测HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA在总HCN mRNA的表达中所占比例分别为0.23%±0.01%、83.58%±0.04%、0.79%±0.01%和15.44%±0.01%。在成年大鼠心室肌细胞也记录到超极化激活、并可以被4mmol/LCsCl阻断的If,其激活电压约为-115mV;HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA在总HCN mRNA中所占比例分别为0.72%±0.02%、91.58%±0.08%、0.27%±0.02%和7.12%±0.02%。HCN2∶HCN4为(13.06±0.21)∶1。结论:随着年龄的增长,大鼠心室肌细胞HCN2所占比例增加;If值减小,激活电压变负。     

银杏苦内酯B对豚鼠模拟缺血心室肌细胞L-型钙电流及胞内游离钙的影响

应用全细胞膜片钳及激光共聚焦技术 ,研究银杏苦内酯B(ginkgolideB ,GB)对豚鼠心室肌细胞L 型钙电流及胞内游离钙的作用 ,并探讨GB心肌保护作用的机制。实验结果显示 ,在指令电压为 0mV时 ,GB对生理状态下豚鼠心室肌细胞L 型钙电流无明显作用。在模拟缺血状态下 ,L 型钙峰值电流减小 3 7 71% ,但加入 1μmol/LGB后 ,可逆转缺血引起的L 型钙电流的降低 ,与缺血对照组比较 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。 1μmol/LGB能使由于模拟缺血而上移的L 型钙电流 电压曲线回复正常。在生理状态下 ,0 1、1、10mol/LGB分别使心肌细胞内游离钙降低 10 5 8%(n =12 )、17 2 7% (n =12 )、16 3 5 % (n =10 ) ,与对照组相比有非常显著性差异。模拟缺血液灌流 12min时 ,细胞内游离钙浓度增加 2 0 15 % ,在模拟缺血液中分别加入 1μmol/Lnifedipine或 5mmol/LNiCl2 ,结果显示 :模拟缺血液灌流 12min ,与正常对照组相比细胞内钙分别增加 18 18% (P >0 0 5 )与 11% (P <0 0 5 )。在模拟缺血液中加入1mol/LGB灌流 12min时细胞内钙仅增加 9 60 % (n =12 ,P <0 0 0 1) ,与缺血对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。结果表明 ,GB可逆转模拟缺血造成L 型钙电流的降低 ,同时可部分减轻由于缺血所造成的细胞内钙的超载     

猪心室肌细胞膜K+通道在人工磷脂双层的重装

目的：将提取的猪心室肌细胞膜上K^ 通道重装在磷脂双层上,用电压嵌方法研究离子通道。方法：将猪心室肌制成匀浆,通过蔗糖梯度离心,分离出通道蛋白成分,利用双室系统将其重装在人工膜上,在电压籍位下记录通道电流。结果：提取的通道蛋白成分优势电导为27～31ps,此外还记录到有15,50和100ps的几种通道活动,其中以27～31ps最为常见。经测定反转电位,确定它们为K^ 选择性通道。结论：本研究在国内首次完成了心肌钾通道在人工脂双层膜上的重装,为在单通道基础上研究K^ 通道提供了重要手段。     

蛇肌果糖1，6－二磷酸酯酶、果糖2，6－二磷酸、AMP的结合部位关系

腺苷－磷酸（ＡＭＰ）对４个快反应巯基被修饰的蛇肌果糖１,６－二磷酸酯酶活性的抑制作用增强,而该修饰的酶受果糖２,６－二磷酸的抑制脱敏。ＡＭＰ对酶抑制为半部位反应,酶受果糖２,６－二磷酸抑制的脱敏则表现为全部位反应。经枯草杆菌蛋白酶限制性酶解的果糖１,６－二磷酸酯酶的Ｋｉ（ＡＭＰ）增大１０倍,但受果糖２,６－二磷酸抑制的性质不变。经胰蛋白酶限制性酶解的果糖１,６－二磷酸酯酶的活性不再为ＡＭＰ抑制,但果糖２,６－二磷酸对该形式酶的抑制作用则明显增强,由于该酶失去受ＡＭＰ的抑制作用,因此ＡＭＰ促进果糖２,６－二磷酸抑制的性质亦随之丧失。据此提出在蛇肌果糖１,６－二磷酸酯酶中果糖２,６－二磷酸不是结合在ＡＭＰ结合部位上的看法。     

细胞外低钠灌流对豚鼠心室肌细胞内钾离子活度的影响

本实验应用钾离子选择微电极观察了不同浓度的低钠对豚鼠心室肌细胞内钾离子活度（ａｉＫ）的影响。发现细胞外低钠（低［Ｎａ］ｏ）灌流引起明显的ａｉＫ下降,下降幅度随灌流液中Ｎａ＋浓度的降低而加大。Ｃｓ＋（５ｍｍｏｌ／Ｌ）及低钾（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）灌流均可明显减小这种ａｉＫ的下降。Ｃａ２＋通道阻断剂Ｃｄ２＋、Ｎｉ２＋、Ｍｎ２＋及Ｖｅｒａｐａｍｉｌ对此无影响;而长时间的Ｃａｆｅｉｎｅ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ,３０ｍｉｎ）灌流可减小低钠引起的ａｉＫ下降。鉴于上述结果,我们认为：低［Ｎａ］ｏ引起的ａｉＫ下降与细胞膜钠泵活动的改变关系不大,而很可能与细胞膜对Ｋ＋的通透性及细胞膜上钙调节Ｋ＋通道的活动改变有关。     

心室压力瞬时加速度的测定及其意义

本工作对国产SJ-42型四道生理记录仪进行改进,增加了记录压力二阶微分曲线的功能。经比较研究家兔左心室压力一阶微分与二阶微分指标后发现,(d~2p/dt~2)max对心肌变力作用的敏感性比(dp/dt)max高出1/3左右,两项指标对心脏前后负荷和心率均具有一定的依赖性,但两者间无明显差异,提示用心室压力瞬时加速度指标评价心脏收缩性能比用压力瞬时速率指标更为灵敏可靠。     

丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对分离的豚鼠心室肌单细胞慢反应动作电位的作用

分离的成年豚鼠心室肌单细胞在高钾(25mmol/L)溶液中部分除极化使钠通道失活,用细胞内刺激诱发慢反应动作电位。20μmol/L 的丹参酮Ⅱ-A 磺酸钠对这种慢反应动作电位有明显的抑制作用。在1—20μmol/L 浓度范围内,丹参酮Ⅱ-A 磺酸钠对0.28μmol/L 的异丙肾上腺素强化的慢反应动作电位有浓度依赖性抑制作用。而且,随异丙肾上腺素浓度的增加(69 nmol/L—0.55μmol/L)抑制作用更加明显。以上结果提示丹参酮 Ⅱ-A 磺酸钠可能是一种钙拮抗剂。50—100μmol/L 的丹参酮 Ⅱ-A 磺酸钠使分离的成年豚鼠心室肌单细胞快反应动作电位的幅度降低,达峰值的时间延长。提示高浓度的丹参酮 Ⅱ-A 磺酸钠对钠通道也有一定的阻断作用。     

氨甲酰胆碱(Carbamylcholine)对大鼠缺血心室致颤阈值的影响及其与cAMP、cGMP的关系

本实验以心室颤动阈(VFT)作为心室易颤性的指标,观察胆碱类物质氨甲酰胆碱对大鼠缺血心室 VFT 的影响及其与心肌 cAMP 和 cGMP 水平的关系。实验结果表明,氨甲酰胆碱可提高正常心脏和急性局部缺血心脏的 VFT,提高缺血和未缺血心肌的 cGMP 水平,但明显降低缺血心肌 cAMP 水平,使缺血和未缺血心肌的 cAMP/cGMP 比值显著降低,其作用与肾上腺素正好相反。实验结果还表明,急性局部缺血心脏的 VFT 与缺血心肌 cAMP/cGMP 比值之间有密切的负相关关系,相关系数 r=-0.905(n=22,P<0.001)。上述结果提示缺血心肌 cAMP/cGMP 比值的提高可能是急性心肌梗塞早期发生心室纤维性颤动的重要因素。     

心室钾通道电流对室性心律失常的影响及调控

本文采用犬心室外膜细胞模型,仿真模拟了不同剂量药物阻滞钾通道电流(iKr和iKs)对室性心律失常产生的影响及调控作用。结果发现,适当阻滞钾电流可减轻室性心律失常,甚至使心律恢复正常。然而,若药物剂量使用过大,过度阻滞钾电流,则会引起早期后除极(earlyafterdepolarization,EAD)的产生,导致室性心律失常症状的加重。此时,我们可以通过调节细胞外钠离子浓度([Na+]o)和晚钠电流(iNaL)等方法来减轻或消除这种负面影响。     

甲磺胺心定对心肌梗塞后狗心室肌与浦氏纤维细胞动作电位的影响

结扎冠脉左前降支3—5d的狗左心室外壁标本(EPI)和心内壁标本(ENDO),具有正常区(NZ)和梗塞区(IZ)。用两根微电极在两区同时记录EPI心室肌细胞(VM)和ENDOPurkinje 纤维(PF)的动作电位(AP)。 甲磺胺心定(Sotalol; 5×10~(-5)—2×10~(-4)M)对12个ENDO标本NZ与IZ PF的静息电位(RP)、动作电位振幅(APA)、O 相最大上升速度(V_(max))以及传导速度(CV)均无显著影响。在12个EPI标本上,Sotalol 除轻度延缓两区CV外,对VM的RP、APA、V_(max)也无显著影响。Sotalol显著延长NZ与IZ区VM及PF的动作电位时程(APD_(95))和有效不应期(ERP),并且延长ENDO的APD_(95)与ERP的程度超过EPI。比较正常区和梗塞区,APD_(95)的增加是NZ>IZ,而ERP的增加是IZ>NZ。此外,在另外11个EPI和14个ENDO 标本上比较了β-受体阻断剂甲氧乙心安(Metoprolol;1.2×10~(-7)—1.2×10~(-5)M)对NZ 和 IZ细胞 AP的影响。Metoprolol不能显著延长两区的 APD_(95)与ERP。说明 Sotalol有别于一般β-受体阻断剂,尚具有第三类抗心律失常的特性,即延长心肌细胞复极化过程和不应期的作用。     

蛇肌果糖1，6－二磷酸酯酶的R态和T态的构象

几种高活性形式的蛇肌果糖１,６－二磷酸酯酸的紫外差光谱与酶在尿素或盐酸胍中差光谱相似,它们的酶学性质及巯基暴露的程度各不相同,提示这些高活性形式的酶的构象呈稳定的松驰状态（Ｂ态）,构象松驰的程度也各不相同。受果糖２,６－二磷酸、ＡＭＰ和过量底物抑制的酶处于三种不同的低活性状态,它们的构象特征与Ｒ态相反,提示此三种低活性酶构象处于较紧凑状态（Ｔ态）。这几种Ｔ态酶流基暴露的程度,受蛋白水解酶限制性酶解的速度不同,说明这些Ｔ态酶的构象的紧凑程度是有差异的。蛇肌酶的不同的活化状态所具有不同的稳定的构象状态,在能量上可能相差很小,便于受到多种因子的调节。这可能是别构酶所普遍具有的现象。     

低钾与哇巴因诱发经低温处理的心室肌节律活动

65个猪心室肌标本经24或48h低温处理后,用玻璃微电极进行细胞内动作电位记录。在经低温处理 48h的心室肌上,电刺激均能诱发节律性电活动,而在经低温处理 24h的标本上,节律性电活动的发生率只有8.3％。经24h低温处理后仍无节律性电活动的标本对低钾与哇巴因的反应和新鲜标本不同。低钾(0.35—0.7mM)台氏液能诱导所有低温处理标本的动作电位出现舒张期自动去极化(SD),从而导致节律性电活动。低温处理标本不仅对哇巴因毒性作用的耐受性大大减弱,而且在哇巴因(2×10~(-7)M)作用下,均出现叠加在缓慢 SD上的振荡电位,这种振荡电位的幅度一般小于10mV。低钾(1.4mM)台氏液灌流能使这种振荡电位增大,并在SD基础上导致自发活动。 实验结果提示,钠钾泵活动的抑制可能与心室肌细胞的节律性电活动有关。     

心房肌胞内钙浓度变化对心房颤动患者小电导钙激活钾通道电流的影响

目的：SK通道存在于心肌细胞上,其中SK2亚型主要表达在心房。SK2通道对胞内游离钙离子高度敏感,可快速将钙离子浓度的变化转换成细胞膜电位变化。本实验应用穿孔膜片钳技术记录人心肌细胞SK2电流,观察心房肌细胞SK2电流在窦性患者和心房颤动患者之间的差别,以及电极液中不同的钙浓度对两组细胞SK2电流的影响。方法：将接受体外循环手术的患者分为两组：心房颤动组和窦性心律组。以心房肌细胞为研究对象,用穿孔膜片钳技术记录人心肌细胞电流,观察窦性组与房颤组SK2通道电流的差异以及两组细胞SK2电流对电极液中钙敏感性的不同。结果：在全细胞穿孔膜片钳模式下,电极液中游离钙离子浓度为5×10-7mol/L时,记录到房颤组SK2通道电流明显大于窦性组,尤其是在超极化水平。膜电位在-130 mV时,窦性组与房颤组的SK2通道电流密度分别为（-2.92±0.35）pA/pF（n=6）,（-6.83±0.19）pA/pF（n=3,P〈0.05）。在电极液游离钙离子浓度分别为0 mol/L、5×10-7mol/L、10-6mol/L,膜电位为-130 mV时,窦性组SK2通道电流密度分别为（-1.43±0.33）pA/pF（n=7）,（-2.92±0.35）pA/pF（n=6）,（-10.11±2.15）pA/pF（n=8,P〈0.05）;房颤组SK2通道电流密度分别为（-2.17±0.40）pA/pF（n=4）（-6.83±0.19）pA/pF（n=3）（-14.47±2.89）pA/pF（n=4）（P〈0.05）。结论：人心房肌细胞SK2通道具有电压不敏感、内向整流、apamin敏感的特性。电极液中钙浓度相同的情况下,房颤组的SK2电流密度明显大于窦性组,SK2通道电流对钙离子的敏感性高于窦性组,提示SK2通道钙敏感性增加可能与心房颤动的发生发展密切相关。