缺血后处理对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的影响

目的：探讨缺血后处理对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响。方法：健康雄性sD大鼠24只,随机分为对照组（C组）、缺血／再灌注组（I／n组）和缺血后处理组（IPostC组）（n=8）。对比观察各组血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）活力及含量变化,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况,免疫组化及RT-PCR法检测肺组织中Bax、Bcl一2蛋白和基因的表达。结果：I／R组与c组相比,MDA含量、MPO活力明显升高,SOD活力明显下降（均P〈0．01）,肺组织原位细胞凋亡检测示I／R组凋亡指数（AI）（39．03±3．46）显著高于C组（2．88±0．34）,Bcl-2／Bax比值在蛋白和基因水平明显降低（均P〈0．01）;IPostC组与I／R组相比MDA含量显著降低（P〈0．05）,MPO活力显著降低（P〈0．01）,SOD活性升高（P〈0．01）,AI为8．03±0．88显著低于L／R组,并能明显升高Bcl-2／Bax比值（均P〈0．01）。结论：缺血后处理通过减轻脂质过氧化反应及中性粒细胞聚集,降低Bax／Bel．2比值,使肺组织细胞凋亡减少,从而有效地减轻肺缺血／再灌注损伤。     

缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

目的：探讨缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：制备缺血预处理（IP）和缺血再灌注损伤（I／R）模型,采用末端标记技术（TUNEL）检测心细胞凋亡,应用免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达,结果：缺血再灌注组心肌细胞凋亡率明显比正常对照组高（P＜0．05）,而缺血预处理组心肌细胞凋亡率明显比缺血再灌注组低（P＜0．05）,缺血再灌注组Bcl-2表达阳性细胞率明显比正常组低（P＜0．05）,而缺血预处理组Bcl-2表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组高（P＜0．05）。缺血再灌注组Bax表达阳性细胞率明显较正常组高,而缺血预处理组Bax表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组低（P＜0．05）。结论：缺血再灌注可诱导心肌细胞凋亡,缺血预处理可减少心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡发生中起重要作用,缺血预处理可上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达。     

siRNA沉默过度内质网应激下DⅨ基因在缺血／再灌注肺损伤中的作用

目的：探讨siRNA沉默过度内质网应激（ERS）下C．Jun氨基末端激酶（州K）通路在缺血／再灌注肺凋亡中的作用。方法：采用C57BIM6J小鼠左侧肺原位缺血／再灌注（IVR）损伤模型。实验随机分为7组（／7,=10）,包括假手术组（Sham组）,缺．tk／再灌注组（I／R组）,PBS＋Lipofectamine2000TM转染试剂组（VR＋PBS＋Lipo组）,阴性对照组（VR＋SCR组）,JNK-siRNA~g（VR＋siRNAJNl（1组、I／R＋siRNAJ眦组、I／R＋si时忱JNl。组）。各组实验结束后处死小鼠,留取左肺,分别检测肺湿干重比（W／D）和总肺水含量（TLW）;光镜观察肺组织形态结构变化,并进行肺组织损伤评估（IQA）;RT-PCR、检测JNK和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的基因表达;Westernblot检测磷酸化JNK（p-JNK）和GRP78的蛋白表达;原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测肺细胞凋亡指数（AU。结果：与Sham组相比,I／R＋PBS＋Lipo组和SCR组各组W／D、’ILw、IQA、JNK与GRP78mRNA和p-JNK、GRP78蛋白质表达量及AJ均明显升高（P〈0．01）,光镜显示肺组织结构出现明显损伤性变化,且各组两两比较,上述各指标均无统计学差异;与I／R＋PBS＋Lipo组和SCR组相比,JNK-siRNA各组GRP78表达水平无明显变化,余各指标均降低（P〈0．05,P〈0．01）且肺组织损伤减轻。结论：I／R引起肺组织细胞发生过度的ERS,并通过JNK通路引起细胞凋亡,损伤肺组织。     

内源性硫化氢体系与低O2高CO2性肺动脉高压的相关性研究

目的：研究低O2高CO2性肺动脉高压（HHPH）时大鼠肺组织内硫化氢（H2S）体系变化的改变及相关性,并探讨其机制。方法：20只SD大鼠随机分为正常对照组（C组）和低O2高CO2组（HH组）（n=10）。监测其血流动力学变化,光镜观察肺细小动脉管壁面积／管总面积比值（WA／TA）,测右心室／左心室＋室间隔（RV／LV＋SP）比值。原位缺口末端标记法（TUNEL法）观测肺细小动脉凋亡情况,并计算凋亡指数（AI）,免疫组化检测肺细小动脉Bcl-2、Bax蛋白表达。敏感硫电极法测定血浆H2S含量及肺组织匀浆胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）活性变化。RT-PCR法测定肺组织中CSE基因表达。结果：HH组肺平均动脉压（mPAP）、WA／TA、RV／LV＋SP明显高于C组（P〈0．05或P〈0．01）。与C组相比,HH组AI显著下降（P〈0．01）,Bcl-2表达加强,Bax减弱,Bax／Bcl-2比值上升（均P〈0．01）。血浆H2S含量、肺组织匀浆CSE活性、肺组织CSE基因表达水平HH组明显低于C组（P〈0．01）。血浆H2S、肺组织CSE活性、肺组织CSE mRNA相对含量与mPAP,Bcl-2／Bax比值均呈显著负相关,与AI呈显著正相关。结论：H2S／CSE体系与低O2高CO2性肺动脉高压关系密切,HHPH时H2S／CSE体系的明显受抑,可使Bcl-2／Bax比值升高,肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,促进肺血管重建和肺动脉高压的形成。     

吡那地尔对缺血缺氧PC12细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨吡那地尔对缺血缺氧PC12细胞凋亡及对Bcl-2蛋白表达的影响。方法取传代后3d PC12细胞,分为A（对照组）,B（缺血缺氧组）,C（KATP通道开放剂）,D（KATP通道开放剂＋阻断剂组）。采用Annexin—v FITC／PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,应用免疫荧光染色和Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果缺血缺氧后B,C,D组细胞凋亡率随时间点增加而增加,24h达高峰。B,C,D组与A组比较均有显著性差异（P〈0．01）,C组和B,D组比较有统计学意义（P〈0．01）,B,C,D组细胞Bcl-2蛋白表达随时间点增加而增加,12h达高峰。B,C,D组均显著高于对照组（P〈0．01或P〈0．05）。C组表达显著高于B和D组（P〈0．01）。B与D组各时间点细胞凋亡及Bcl—2蛋白表达均无显著性差异（P〉0．05）。结论KATP通道开放剂能抑制缺血缺氧PC12细胞凋亡,这一作用机制可能与增加Bcl—2蛋白表达有关。     

右美托咪定对肺缺血/再灌注损伤小鼠内质网应激相关分子Caspase-12表达的影响

目的：探讨右美托咪定（DEX）对肺缺血/再灌注（I/R）损伤小鼠内质网应激（ERS）相关分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的影响。方法：选用C57BL/6J小鼠复制在体左肺原位I/R损伤模型。随机将40只小鼠分为4组（n=10）：假手术组（sham组）,I/R损伤组（I/R组）,生理盐水对照组（NS组）,右美托咪定干预缺血/再灌注组（DEX组）。DEX组在夹闭小鼠左肺门30 min前经腹腔注射DEX 25 μg/kg,NS组为用同DEX组等体积的生理盐水替代DEX,其余操作同DEX组。3 h肺再灌注结束后,留取左肺。测定肺组织湿/干重比（W/D）及总肺含水量（TLW）,光镜观察肺组织形态学改变,对肺组织进行损伤评估（IQA）。原位末端标记（TUNEL）法检测组织细胞凋亡指数（AI）,蛋白免疫印迹法（Western blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78（grp78）蛋白和mRNA表达水平。结果：与sham组比,I/R组和NS组肺W/D、TLW、IQA、AI均明显升高（P<0.01）,肺组织形态结构破坏明显,Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量增加（P<0.01）;I/R组与NS组相比,两组Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量无明显差异（P>0.05）。DEX组与I/R组比,W/D、TLW、IQA和AI均有下降（P<0.01或P<0.05）,肺组织形态学改变明显减轻,Caspase-12和grp78蛋白和mRNA表达量下降（P<0.01）。结论：DEX可有效缓解小鼠肺缺血/再灌注性损伤,其机制可能与其对抗ERS中Caspase-12引起的细胞凋亡有关。     

蓝莓花色苷预处理对大鼠心肌梗死的保护作用

目的观察蓝莓花色苷（blueberryanthocyanin,BBA）预处理对实验性急性心肌梗死大鼠心肌梗死面积,心肌肌钙蛋白-T（cTn-T）表达,Bax、Bcl-2mRNA表达的影响,探讨其干预心肌梗死的机制。方法40只Wistar大鼠随机分为假手术组,心肌梗死模型组,BBA低、中、高剂量组,药物干预4周,末次给药30min后结扎左冠状动脉前降支建立心梗动物模型。24h后,TTC检测心肌梗死面积;Westernblotting方法检测心肌细胞cTn-T蛋白表达;realtimePCR方法检测Bcl-2mRNA、BaxmRNA表达。结果模型组和假手术组相比,模型组心肌梗死面积显著升高（P〈0．01）,心肌细胞cTn．T蛋白表达下降（P〈0．05）,Bcl-2mRNA表达下降（P〈0．05）,BaxmRNA表达显著升高（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值显著降低（P〈0．01）。BBA干预给药组和模型组相比,中剂量组心肌梗死面积低于模型组（P〈0．05）,低剂量组心肌细胞cTn-T蛋白表达升高（P〈0．05）,中剂量组Bcl-2mRNA表达升高（P〈0．05）,低、中剂量组BaxmRNA表达下降（P〈0．05）,中剂量组Bcl-2／Bax比值升高（P〈0．05）。结论蓝莓花色苷对心肌梗死后心肌细胞具有明确的保护作用,其机制可能与减少心肌梗死面积,上调心肌细胞eTn-T蛋白的表达,上调Bcl-2mRNA表达、下调BaxmRNA表达,抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡有关。     

线粒体通透性转换孔在缺血预处理脑保护中的作用及机制

目的：线粒体通透性转换孔通透性改变是导致缺血再灌注损伤的原因,线粒体功能的致命性改变最终引起细胞凋亡,本研究旨在观察线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）在缺血再灌注及缺血预处理脑保护中的作用;方法：将体外培养8天的海马神经元细胞分为五组,正常对照组（A组）,缺血再灌注组（B组）,缺血预处理＋缺血再灌注组（C组）,苍术苷＋缺血再灌注组（D组）,缺血预处理＋苍术苷＋缺血再灌注组（E组）。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位,Western-blot检测Bcl-2,Bax的表达。结果：与A组比较,其余四组线粒体膜电位均降低,神经元凋亡率升高（P〈0．05）;与B组比较,c组线粒体膜电位升高,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达上调,Bax表达下调（P〈0．05）;与c组比较,E组粒体膜电位降低,神经元凋亡率升高,Bcl．2表达下调,Bax表达上调（P〈0．05）。结论：我们在细胞及分子生物学水平对MPTP及缺血预处理的研究后发现,缺血预处理能有效减轻海马神经元缺血再灌注损伤,抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡,其机制与抑制MPTP的开放有关。     

HO-1在缺血后处理抗肺缺血再灌注损伤中的作用及其对STAT-3表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)在缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)抗肺缺血再灌注损伤中的作用机制及其对STAT-3蛋白表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠(250-280 g)随机分为假手术组(S)、缺血再灌注组(IR)、缺血后处理组(IPO)及缺血后处理+HO-1抑制剂组(IPO+ZnPP)。称重法计算缺血肺组织干/湿比(W/D),试剂盒检测缺血肺组织MDA水平及MPO与HO-1活性,Western Blot检测HO-1,p-STAT-3蛋白表达水平。结果与S组比较,IR组大鼠W/D、MDA、MPO、HO-1活性及蛋白表达水平均显著增加,而p-STAT-3蛋白表达水平显著降低,IPO可以逆转上述变化,而HO-1特异性抑制剂可以消除IPO对上述指标的影响。结论 IPO可以通过促进HO-1活性及蛋白表达的增加从而激活STAT-3信号通路而发挥抗肺缺血再灌注损伤作用。     

Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨人参皂甙Rb1、Rg1在肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中对Bol-2、Bax表达的影响。方法：制备家兔肾缺血／再灌注血清（SIR）和对照组血清（SC）用于HK-2细胞培养,TUNEL法检测细胞凋亡。实验分组：对照组、缺血／再灌注组、Rb1干预组、Rg1干预组,培养24h后免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果：与缺血／再灌注组比较,Rb1干预组和Rg1干预组Bax的表达明显下降（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值增大。结论：人参皂甙Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡具有保护作用。     

G1对EA.hy926内皮细胞内质网应激的抑制作用

目的观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的EA.hy926内皮细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响。方法选用EA.hy926内皮细胞为研究对象,分为3组:正常对照组(Con,17.51mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,33.3mmol/L葡萄糖)、高糖+G1组(HG+G1,HG+1umol/L G1),利用流式细胞术检测3组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子Bip、IRE1、PERK及凋亡分子Bax、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测Bip和CHOP的mRNA表达变化。结果 HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高(P0.01),Bip、IRE1、PERK及凋亡分子Bax表达上调(P0.01,P0.05或P0.001),Bcl-2的表达下调(P0.01),Bip mRNA、CHOP mRNA表达上调(P0.001及P0.01);HG+G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低(P0.05),Bip、IRE1、PERK及凋亡分子Bax表达下调(P0.05或P0.01),Bcl-2的表达上调(P0.05),Bip mRNA、CHOP mRNA表达下调(P0.001及P0.01)。结论 GPR30受体激动剂G1可抑制EA.hy926内皮细胞内质网应激。     

褪黑素对油酸致大鼠急性肺损伤的防护作用及其机制研究

目的：研究油酸（OA）致大鼠急性肺损伤（ALI）时,P-选择素（Ps）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和核因子-κB（NF-KB）在肺组织中的表达及褪黑素（MT）对肺组织的保护作用及其机制。方法：将48只SD大鼠随机分为4组（n=12）,对照组（Control）、油酸组（OA）、MT＋OA组,SB203580＋OA组。采用尾静脉注射油酸的方法建立大鼠Au的模型,测定肺系数,光镜下观察大鼠肺组织形态学改变,并通过免疫组织化学染色技术观察肺组织中Ps、ICAM-1和NF-κB的表达变化。结果：与control组相比,OA组大鼠肺系数明显升高（P〈0．05）;肺组织损伤严重,肺泡间隔明显增宽,肺泡腔及肺间质弥漫性炎细胞浸润;Ps、ICAM-1和NF-κB的阳性表达信号明显增强（P〈0．05）;应用MT和SB203580均显著缓解上述变化（P〈0．05）。结论：MT对ALI时的肺组织起明显的保护作用,其保护机制可能与抑制Ps、ICAM-1和NF-κB的表达有关。     

维生素E对老年大鼠卵巢颗粒细胞保护作用机制的探讨

目的：通过观察维生素E（VE）对老年雌性大鼠卵巢凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响及对其抗氧化能力的影响,探讨VE延缓卵巢衰老的作用和机制。方法：采用自然衰老雌性大鼠,给予不同剂量外源性VE,用免疫组化方法观察卵巢颗粒细胞凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax的表达,用Western Blot法检测卵巢Bcl-2、Bax蛋白含量,用生化法测定血清总超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量。结果：与成年对照组相比,老年对照组Bcl-2表达明显降低、Bax表达明显升高（P〈0．01）,血清中SOD活力下降、MDA含量显著升高（P〈0．01）。与老年对照组相比,VE纽Bcl-2表达升高,Bax表达降低（P〈0．05）,MDA含量显著减少（P〈0．01）。结论：VE可调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达和对抗自由基对颗粒细胞的损伤,对卵巢颗粒细胞具有一定的保护作用。     

损毁或高频刺激丘脑底核对黑质神经元的保护作用

目的：探讨损毁或高频刺激丘脑底核（STN）对帕金森病（PD）大鼠黑质致密部神经元的保护作用及其可能的发生机制。方法：应用每羟基多巴胺（6-OHDA）制备偏侧PD大鼠模型,于丘脑底核（STN）区分别植入刺激电极给以高频电刺激,或注入鹅膏蕈氨酸（IA）进行损毁后,观察PD大鼠行为改变;运用尼氏（Nissl）染色、DNA原位末端标记技术（TUNEL）、免疫组化方法检测并分析黑质致密部（SNc）神经元存活及凋亡发生情况。结果：刺激组黑质致密部凋亡神经元的阳性率显著低于模型组与损毁组（P〈0．05）。与正常大鼠相比,刺激组Bel-2染色呈强阳性,Bel-2／Bax比值较高,模型组、损毁组SNc区的Bcl-2表达有所下调,Bax表达增加,Bcl-2／Bax比值降低（P〈0．05）,虽然损毁组SNc的凋亡阳性神经元少于模型组（P〈0．05）,但二者的Bel-2、Bax的表达及Bel-2／Bax比值无显著性差异（P〉0．05）。结论：损毁或高频刺激SIN对PD大鼠黑质SNc神经元存在保护作用,高频刺激的长期保护作用更为明显。     

Influence of Levosimendan Postconditioning on Apoptosis of Rat Lung Cells in a Model of Ischemia–Reperfusion Injury

Objective

To ascertain if levosimendan postconditioning can alleviate lung ischemia–reperfusion injury (LIRI) in rats.

Method

One hundred rats were divided into five groups: Sham (sham), ischemia–reperfusion group (I/R group), ischemic postconditioning (IPO group), levosimendan postconditioning (Levo group) and combination postconditioning group of levosimendan and 5-Hydroxydecanoic acid (Levo+5-HD group). The apoptotic index (AI) of lung tissue cells was determined using the terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) assay. Expression of active cysteine aspartate specific protease-3 ( active caspase-3), Bcl-2 and Bax in lung tissue was determined by immunohistochemical staining. The morphopathology of lung tissue was observed using light and electron microscopy.

Results

AI values and expression of active caspase-3, Bcl-2 and Bax of lung tissue in I/R and Levo+5-HD groups were significantly higher than those in the sham group ( P<0.05). AI values and expression of active caspase-3 and Bax were significantly lower, whereas that of Bcl-2 was higher significantly in the Levo group, compared with I/R and Levo+5-HD groups (P<0.05). Significant differences were not observed in comparisons between I/R and Levo+5-HD groups as well as IPO and Levo groups.

Conclusion

LIRI can be alleviated by levosimendan, which simulates an IPO protective function. A postulated lung-protective mechanism of action could involve opening of mitochondrial adenosine triphosphate-sensitive potassium channels, relieving Ca2+ overload, upregulation of expression of Bcl-2, and downregulation of expression of active caspase-3 and Bax.