重组人成骨生长肽的表达、纯化和活性的研究

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide ,rhOGP) .体外实验证明 :rhOGP对成纤维细胞 (NIH3T3)的增殖有促进作用 .体内实验证明 :rhOGP加速兔移植骨成活 ,使血清中碱性磷酸酶活性增高 ,骨钙素增高 .重组人成骨生长肽促进成骨 ,有可能成为治疗骨移植及骨折愈合的有效药物     

合成成骨生长肽的骨内外成骨活性

利用固相多肽合成人成骨生长肽（sOGP),纯度达99．2％,HPLC及毛细管电泳均一,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值。在体内我们观察了sOGP对兔胫骨骨折愈合的药效。用血生化、X射线、骨密度、组织学外骨痂分析、生物力学等方面测得sOGP能显著促进新生骨形成,明显增加成骨活性蛋白碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（BGP）的血清水平,对兔胫骨不稳定的横断骨折愈合具有一定的促进作用。尤其是实验组骨密度和外骨痂中小梁骨成分显著地加的数据,具有统计学意义。还观察了sOGP在没介质中对原代成骨细胞的成骨活性。在体外sOGP低剂量(10^-11mol/L）对原代成骨细胞有明显的增殖作用,表现双向调节。有趣的是sOGP在体外的成骨活性作用必须有血清白蛋白（BSA）和血清中某些因子的参与。     

骨生长肽与骨质疏松症

骨生长肽（OGP）是一个由14个氨基酸组成的多肽,广泛存在于人和哺乳动物血清中,现已发现OGP有两个重要功能;促进成骨细胞和成纤维细胞的生长及促进造血作用。目前,动物实验已表明OGP可用于骨质疏松症的治疗。     

成骨细胞移植和成骨生长肽对股骨头坏死修复作用的实验研究

目的：研究成骨细胞移植和成骨生长肽（OGP）对激素性股骨头坏死的影响。方法：25只健康成年日本大耳白兔,随机分为正常组（5只）,实验组（10只）和对照组（10只）。实验组和对照组注射醋酸泼尼松龙致使激素性股骨头坏死后,前者成骨细胞移植于动物股骨头并且OGP注射4、8周,后者注射等量生理盐水。测定血清碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）,测试股骨头力学性质,通过光镜和扫描电镜观察股骨头的形态结构。结果：实验组血清ALP、BGP明显高于对照组（P〈0．05）。实验组股骨头的最大压缩载荷及载荷／位移较对照组高（P〉0.05）。光镜、扫描电镜观察到实验组股骨头中骨小梁形态及胶原纤维排列有序性明显好于对照组。结论：成骨细胞移植和OGP注射对股骨头坏死具有一定的修复作用。     

仙灵骨葆胶囊联合注射用骨肽治疗骨折74例疗效观察

目的探讨仙灵骨葆胶囊联合注射用骨肽对骨折愈合的疗效。方法对我院2009年5月-2010年8月收治的74例骨折患者进行分组治疗。治疗组在骨折常规处理后,口服仙灵骨葆胶囊联合注射用骨肽;对照组在骨折常规处理后,采用一般活血化瘀药物治疗。观察两组治疗后骨折愈合时间、效果。结果治疗组的治愈率（89．19％）明显优于对照组（48．65％）,两组比较差异有非常显著性（P〈0．01）。结论仙灵骨葆胶囊联合注射用骨肽对骨折的愈合率明显提高。     

骨肽注射液对四肢骨折患者骨代谢、红细胞相关指标及炎性因子水平的影响

目的:研究骨肽注射液对四肢骨折患者骨代谢、红细胞相关指标及炎性因子水平的影响。方法:选取2015年4月-2017年4月我院收治的四肢骨折患者84例,将其以随机数字表法分成研究组(n=42)与对照组(n=42)。对照组予以常规治疗,研究组则在常规治疗的基础上予以骨肽注射液治疗。分别比较两组骨折愈合时间、治疗前后骨代谢、红细胞相关指标以及炎性因子水平变化情况。结果:研究组上肢骨折、下肢骨折愈合时间分别少于对照组(P0.05)。治疗4周后研究组骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原羟基端前肽(PICP)、骨钙素(BGP)水平均高于对照组和治疗前,而Ⅰ型胶原羟基端肽β特殊序列(β-CTX)水平低于对照组和治疗前(P0.05)。治疗4周后研究组红细胞积聚指数(EAI)、红细胞电泳指数(EEI)水平均低于对照组和治疗前,而红细胞免疫促进因子(RFER)、直向肿瘤红细胞花环率(DTER)水平较对照组和治疗前均升高(P0.05)。治疗4周后两组患者C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均低于治疗前,且研究组CRP、TNF-α水平较对照组降低(P0.05)。结论:骨肽注射液应用于四肢骨折患者中可促进骨折愈合,改善骨代谢、红细胞相关指标以及炎性因子水平,值得临床推广应用。     

鲑鱼降钙素与骨生长肽融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

降钙素 (Calcitonin ,CT)和骨生长肽 (Osteogenicgrowthpeptide ,OGP)是两种治疗骨质疏松症的药物 ,设想通过这两种基因的融合表达来达到治疗骨质疏松的目的。体外合成OGP和sCT的基因 ,经过DNA体外重组构建酵母表达质粒 ,实现了在毕赤酵母中的表达 ,通过纯化后进行氨基酸N端测序 ,证明表达的蛋白序列正确。     

CGRP和NPY 在大鼠股骨闭合骨折愈合不同阶段的变化及意义

目的:探讨交感神经分泌的神经肽Y(NPY)和感觉神经分泌的钙基因相关肽(CGRP)在体内骨折愈合的不同阶段的变化及意义。方法:选择6-8月龄的雄性大鼠,建立大鼠的股骨闭合骨折模型,术后2、4、8、12周取材。进行扫描电镜,免疫组织荧光染色和血清Elisa检测。结果:1骨折愈合不同时期感觉神经肽类物质CGRP和交感神经肽类物质NPY都有表达,且其含量有先增加后减少的趋势,并在骨折后8周含量达到最高。2骨折愈合不同阶段的大鼠血清感觉神经肽类物质CGRP和交感神经肽类物质NPY均呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05),且NPY的含量比CGRP的含量高。骨折后2-4周,CGRP含量增加较快;骨折后4-8周NPY含量增加较快。结论:骨折愈合的不同阶段,感觉神经肽类物质CGRP和交感神经肽类物质NPY含量先升后降,对不同阶段的骨形成及骨吸收产生影响。     

SCT-OGP的融合表达与活性的初步研究

根据天然鲑鱼降钙素(Salmoncalcitonin,SCT)和骨生长肽(OsteogenicGrowthPeptide,OGP)的序列,人工合成了6个DNA片段,进行退火、连接和转化后,获得含有SCT与OGP融合基因的pPIC9-SCT-OGP表达载体,经测序后将此重组质粒电击转化毕赤酵母GS115,通过培养、筛选以及SDS-PAGE鉴定,在毕赤酵母中获得了SCT-OGP融合蛋白的可溶性表达,经分子筛纯化后在5kD左右可见单一条带。将此条带进行了N端氨基酸组分分析,证实此目的蛋白为SCT-OGP融合蛋白。MTT法显示SCT-OGP融合蛋白在体外可以促进成骨细胞和成纤维细胞增殖,以小鼠为模型的试验显示SCT-OGP融合蛋白在体内可以提高碱性磷酸酶活性和降低血钙,表明该融合蛋白具有抑制破骨细胞的活性和刺激成骨细胞增殖的活性,从而提示该融合蛋白具有治疗骨质疏松症的药用潜力。     

成骨蛋白-1的研究及应用进展

成骨蛋白-1（OP-1）是骨形态发生蛋白家族（BMPs）中的一员,具有较强的骨诱导活性,能够在体内、外诱导骨、软骨形成,完成骨修复能力。研究发现OP-1能治愈自体骨不能愈合的缺损,加速骨折愈合,能有效地促进横突体内融合发挥脊柱融合作用。OP-1用作盖髓剂,可以减轻炎症反应,诱导牙本质再生。此外,OP-1还具有抗肾脏纤维化作用,保护肾小球的完整性。     

小鼠子宫颈部位输卵管蛋白表达的初步研究

用RT-PCR及免疫印迹法检测证实小鼠子宫颈粘膜上皮细胞具表达输卵管蛋白的能力,宫颈部所获得的输卵管蛋白转录产物, 310到 714的405bp的cDNA片段经序列测定及blast比较表明与输卵管部位表达的输卵管蛋白完全一致(100%)。小鼠子宫颈输卵管蛋白在动情周期的表达波动情况与输卵管粘膜上皮的类似,其表达于小鼠动情期明显增加。Westernblot显示小鼠子宫颈提取物中存在两种不同分子量(60KD,30KD)的输卵管蛋白。原位杂交结果则提示子宫颈粘膜上皮细胞含丰富的输卵管蛋白mRNA信号。通过"原体中风"实验未发现输卵管蛋白在体外对精子活动有影响,其功能尚须进一步分析。     

Isolation of osteogenic growth peptide from osteoblastic MC3T3 E1 cell cultures and demonstration of osteogenic growth peptide binding proteins

The osteogenic growth peptide (OGP) was recently characterized in regenerating bone marrow. In experimental animals it increases osteogenesis and hemopoiesis. In stromal cell cultures OGP stimulates proliferation, alkaline phosphatase activity, and matrix mineralization. OGP in high abundance is present in normal human and animal serum mainly complexed to OGP binding protein (OGPBP) or proteins. Here we show the presence of two OGPBPs, OGPBP-1, and OGPBP-2, in cultures of osteoblastic MC3T3 E1 cells. Immunoreactive OGP (irOGP) also accumulates in the medium of these cultures and in cultures of NIH 3T3 fibroblasts. A large amount of irOGP was released by heat inactivation of OGPBP-2 and purified by ultrafiltration and hydrophobic HPLC. The purified irOGP was identical to OGP obtained previously from rat regenerating bone marrow and human serum in terms of its amino acid sequence, immunoreactivity, and mitogenicity. Osteoblastic and fibroblastic cell proliferation can be arrested by anti-OGP antibodies and rescued by exogenous OGP, indicating that in the absence of serum or other exogenous growth stimulators the endogenously produced OGP is both necessary and sufficient for baseline proliferation. The OGP production is up- and down-regulated, respectively, by low and high doses and exogenous OGP in a manner consistent with an autoregulated feedback mechanism. The most effective OGP dose in MC3T3 E1 cells is at least two orders of magnitude lower than that in non-osteoblastic cell systems. This differential sensitivity of the osteoblastic cells could result in a preferential anabolic effect of OGP in bone. J. Cell. Biochem. 65:359–367. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

A basic peptide derived from the HARP C-terminus inhibits anchorage-independent growth of DU145 prostate cancer cells

Heparin affin regulatory peptide (HARP) is an 18 kDa heparin-binding protein that plays a key role in tumor growth. We showed previously that the synthetic peptide P(111-136) composed of the last 26 HARP amino acids inhibited HARP-induced mitogenesis. Here, to identify the exact molecular domain involved in HARP inhibition, we investigated the effect of the shorter basic peptide P(122-131) on DU145 cells, which express HARP and its receptor protein tyrosine phosphatase beta/zeta (RPTPbeta/zeta). P(122-131) was not cytotoxic; it dose-dependently inhibited anchorage-independent growth of DU145 cells. Binding studies using biotinylated P(122-131) indicated that this peptide interfered with HARP binding to DU145 cells. Investigation of the mechanisms involved suggested interference, under anchorage-independent conditions, of P(122-131) with a HARP autocrine loop in an RPTPbeta/zeta-dependent fashion. Thus, P(122-131) may hold potential for the treatment of disorders involving RPTPbeta/zeta.     

Effect of Copper on Levels of Collagen and Alkaline Phosphatase Activity from Chondrocytes in Newborn Piglets In Vitro

The effects of different concentrations of copper on collagen content and alkaline phosphatase (AKP) activity from chondrocytes in newborn piglets were measured. Chondrocytes were cultured in media containing 15% fetal calf serum supplemented with 0, 15.6, 31.2, and 62.5?μmol/L copper in a 12-well culture plate. Collagen content and AKP activity from the chondrocyte extracellular matrix increased significantly in the culture media with 15.6, 31.2, and 62.5?μmol/L copper and was the highest at 31.2?μmol/L copper (P?相似文献   

唑来膦酸注射液联合骨肽注射液治疗绝经后骨质疏松症的临床疗效及安全性分析

目的:研究唑来膦酸注射液联合骨肽注射液治疗绝经后骨质疏松症的临床效果以及安全性。方法:选择2014年1月～2018年1月我院收治的100例绝经后骨质疏松症患者,将其随机分为两组。对照组采用静脉滴注唑来膦酸注射液5 mg一次,观察组在对照组基础上静脉注射骨肽注射液,每次30 mg,每天1次。治疗6个月后,检测并比较两组治疗前后的骨代谢指标(血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、甲状旁腺素(PTH)、血磷(P)、血钙(Ca)和碱性磷酸酶(ALP))以及骨转换指标(骨钙素(OC)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-1))的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率明显高于对照组(P0.05);两组血清ALP、PTH以及BAP等骨代谢指标均较治疗前明显降低(P0.05),且观察组以上指标明显低于对照组(P0.05);两组的OC均较治疗前明显升高(P0.05),CTX-1均较治疗前明显降低(P0.05),且观察组的骨转换指标改善的程度较对照组更为明显(P0.05)。观察组的不良反应发生率为8.00%(4/50),明显低于对照组[18.00%(9/50)](P0.05)。结论:唑来膦酸注射液联合骨肽注射液治疗绝经后骨质疏松症的效果明显优于单独使用唑来膦酸注射液,其可以显著改善患者的骨代谢及骨转换状态,且安全性更高。     

放牧对小嵩草草甸生物量及不同植物类群生长率和补偿效应的影响

基于小嵩草(Kobresia parva)草甸连续2 a的牦牛放牧试验,研究了暖季和冷季放牧草场地上地下生物量及其分配规律、不同植物类群的绝对生长率生长率,探讨了放牧制度和放牧强度对不同植物类群补偿效应的影响。结果表明,随着放牧强度的增加地上总生物量呈减小趋势,放牧强度对暖季草场地上总生物量的影响极显著（P?0.01）,对冷季草场地上总生物量的影响不显著（P?0.05）;两季放牧草场各土壤层地下生物量随放牧强度的增加呈明显下降趋势,放牧强度对暖季放牧各土壤层地下生物量的影响显著（P?0.05）,对冷季放牧各土壤层地下生物量的影响不显著（P?0.05）;冷季放牧草场牧草生长季地下生物量与地上生物量的比值随放牧强度的增大而减小,暖季放牧草场对照区地下生物量与地上生物量的比值低于轻度放牧和中度放牧、高于重度放牧;暖季放牧草场各放牧处理不同植物类群均存在超补偿生长,但莎草科和禾本科植物的超补偿生长在8月份,阔叶植物的超补偿生长发生在6月和7月份,禾本科植物的超补偿生长效应强于莎草科植物和阔叶植物,轻度和中度放牧的补偿效应更明显;冷季放牧下不同植物类群也存在超补偿生长,但补偿效应不明现。因此,暖季适度（轻、中度）放牧利用更有利于产生超补偿生长,而重度利用对植被的稳定产生潜在的不利影响。     

续断对兔骨折愈合过程中相关基因表达和血钙、磷含量的影响

本研究通过检测中药材续断对家兔骨折模型愈合过程中与成骨密切相关基因的表达,以及血清中钙、磷含量变化,探讨其对骨折愈合的促进机制。构建家兔骨折缺损模型,术后按组分别给予续断和蒸馏水灌胃,并分别检测骨保护素(OPG)、骨保护素配体(OPGL)、局部转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的基因表达以及血清中Ca、P、碱性磷酸酶(ALP)含量。结果表明,续断治疗组中血钙、血磷和ALP的含量在灌胃第2周,第3周和第4周后均有明显升高,且在第三周时达到最大值。同时,OPG、TGF-β1、BMP-2三个基因在用续断治疗的不同时期呈现不同程度的表达上调,OPGL则在治疗早期表达下调。推测续断对骨折的治疗可能是通过调控OPG、OPGL、TGF-β1、BMP-2等基因在骨愈合不同阶段的表达量和血清中Ca、P、ALP的含量来促进骨骼生长。     

C-terminal pentapeptide of osteogenic growth peptide regulates hematopoiesis in early stage

Osteogenic growth peptide (OGP) was characterized in regenerating bone marrow, which can increase osteogenesis and hematopoiesis. The carboxy-terminal pentapeptide is a naturally occurring human and murine mitogen equipotent to OGP. In this study, we evaluated the potential role of OGP10-14 in regulation of hematopoiesis in human hematopoietic stem cells and animal model. Our results showed CD34+ stem cells from umbilical cord blood (UBC) were significantly increased in OGP10-14 treated samples, which is nearly equivalent to the results obtained from the combinations of IL3, IL11, G-CSF, and EPO group. OGP10-14 can also stimulate the differentiation of stem cells from bone marrow at the level of noncommitted progenitor stem cells, thus increasing the number of reconstituted red and white cells as well as platelets after injected i.m. everyday continuing for 5 days in hematopoietic function damage mice comparing with the OGP-untreated group. These data implicate that the role of OGP10-14 regulating hematopoiesis is in the early stage of the whole hematopoietic growth factors (HGFs) regulating network, just like the position of interleukin 13 in the hematopoiesis network.