中国河南株丁型肝炎病毒全基因组的cDNA克隆和序列分析

从我国河南－抗丁型肝炎病毒抗原（ａｎｔｉ－ＨＤＡｇ）及丁型肝炎病毒（ＨＤｖ）ＲＮＡ双阳性的ＨＢｓＡｇ携带者血清中提取ＲＮＡ,采用人工合成的引物进行逆转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）,获得了贯穿ＨＤＶ全基因组的６个相互重叠的ｃＤＮＡ片段。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析,得到了长度为１６７４ｂｐ的我国人河南株ＨＤＶｃＤＮＡ全序列。计算机分析表明,该株与我国台湾株（ＨＤＶＩＡ型）、美国－１株（ＨＤＶＩＢ型）、日本－１株（ＨＤＶⅡ型）和秘鲁－１株（ＨＤＶⅢ型）的核苷酸同源性分别为的９４．３％、８６．８％、７５．４％和６６．３％,氨基酸序列的同源性分别为８９．７％、８５．１％、７１．９％和６４．６％,并在核苷酸和推导的ＨＤＡｇ氨基酸序列中分别发现了５个和２个集中保守的区域。这些区域均与ＨＤＶ的某些重要功能密切相关。     

从重症肝炎病人血清分离的丁型肝炎病毒核酶区的克隆与序列分析

从我国一例四川丁型肝炎病毒HDVRNA,丁型肝炎抗原均阳性的重症肝炎患者的血清中,用异硫氰酸胍法提取RNA经过逆转录PCR扩增后获得一长289bp的HDVcDNA片段,将PCR产物回收后直接克隆到PCRTMⅡ质粒,挑出阳性克隆并亚克隆入M13mp19的EcoRⅠ区位点,提取单链进行序列分析,结果显示与已知的中国河南、美国、日本、秘鲁和中国台湾5株HDVcDNA相同片段比较,同源性分别为对97.2％、93％、94％、79％、96％。     

中国不同丁型肝炎病毒株抗原编码区基因的cDNA特点分析

为研究我国不同地区不同人群中丁型肝炎（丁肝）病毒（ＨＤＶ）毒株感染的分子特征,从我国河南,内蒙,北京,四川,广西,西藏,新疆,辽宁,上海等地的ＨＤＶ健康携带者,慢性丁肝病人与重症肝病人中,筛选获得１０余份ＨＤＶ－ＲＮＡ阳性血清,经逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ抗原编码区的ｃＤＮＡ片段,并克隆到ｐＧＥＭ－３ｚｆ（－）或ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经序列分析研究其基因结构特点,结果表明     

中国不同地区和人群HDV cDNA的筛选、克隆及抗原编码区基因异质性的分析

为研究我国不同地区不同人群中ＨＤＶ毒株的感染分子特征,从我国河南、内蒙、北京、四川、广西、西藏、新疆、辽宁、上海等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中筛选获得１０余份ＨＤＶ－ＲＮＡ阳性血清。经逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ抗原编码区的ｃＤＮＡ片段并克隆到ＰＧＥＭ－３Ｚｆ（－）或ＰＧＥＭ－Ｔ载体上,经序列分析研究其基因结构特点,结果表明：中国的ＨＤＶ毒株基因型均为Ⅰ型,但至少存在ⅠＡ、ⅠＢ两个亚型,ＨＤＶ毒株在不同地区间存在异质性,其中河南－１、－２、－３株及新疆株与台湾株同源性较高（核苷酸与氨基酸同源性分别大于９２．１％与８６．９％）．当为ⅠＡ型;内蒙－１、四川、广西、西藏－１、辽宁、北京株与美国－１株同源性较高（核苷酸与氨酸同源性分别大于９４．３％与８８．８％）,当为ⅠＢ亚型;上海株与意大利株的核昔酸同源性最高,为９８．１％。研究证明我国新疆、内蒙、西藏等地区抗ＨＤ阳性率比其他省市高并不是由于存在其他基因型所致。     

丁型肝炎病毒基因组和抗原研究进展

丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）属于缺陷性ＲＮＡ病毒。ＨＤＶ ＲＮＡ是由单链基因组ＲＮＡ和互补的反基因组ＲＮＡ组成的闭合环状分子,具有酶活性,能自身催化断裂,进行滚环式复制。反基因组上的可读框编码大小两种抗原。ＨＤＶ的装配需要乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的帮助,其包膜是ＨＢＶ表面抗原。ＨＤＶ感染者可同时有ＨＢＶ感染,这种双重感染可加重肝脏损害和病情。     

庚型肝炎病毒（HGV）NS5区部分基因的克隆和cDNA序列测定

用RT－PCR技术从一例献血员血清标本中扩增出HGV非结构区的部分基因片段,克隆后测定。cDNA序列。该序列与国外三株HGV的核苷酸同源性在90％以上;与GBV—A和GBV—B的同源性分别为44．7％和33．17％;与已发表的23个HCV全序列的相应序列比较,同源性均小于40％。结果表明,克隆的病毒株为HGV中国株。同时,用RT—PCR检测了河北固安和南京地区的115份HCV感染者标本．HGVRNA阳性率为3．47％。表明我国某些特殊人群中HGV感染率较高,是一个不容忽视的问题。     

人蛋白C cDNA基因的克隆及序列分析

为实现人蛋白C cDNA在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性,针对人蛋白C cDNA序列设计引物,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从人胎肝总RNA中钓取人蛋白C cDNA,将其克隆入pIRES neo载体中,通过酶切和PCR鉴定出重组体并进行测序分析。结果表明,获得大小为1386bp的人蛋白C cDNA基因,成功构建人蛋白C cDNA载体pIRES/hPC,为进一步进行人蛋白C cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。     

利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究

设计一对ＰＣＲ引物,其中上游引物的５’端除目的基因外,还加Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列,以质粒（ｐＳＶＬＤ３）为模板,通过ＰＣＲ扩增出带有Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列的１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该ｃＤＮＡ有２个碱基变异,以此ＰＣＲ产物为模板,通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其     

我国非肠道传播非甲非乙型肝炎(丙型)病毒NS3蛋白的部份cDNA克隆及序列分析

用15ml非肠道传播非甲非乙型肝炎病人的混合血清提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应(PCR)扩增,获得583个核苷酸的非肠道传播非甲非乙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白的cDNA片段.该片段与美国报道的同片段HCV cDNA原型比较,核酸序列同源性为80.9％,氨基酸序列同源性为93.2％。与日本报道的同片段J1 HCV cDNA相比较,核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为92.6％和95.2％。用α-~(32)P同位素标记该片段,与HCV病人血清出现杂交反应。     

水稻矮缩病毒基因组第六号片段编码区的cDNA克隆及序列分析

从水稻矮缩病毒中国福建分离物的基因组中分离出第六号片段的双链ＲＮＡ,根据已发表的日本分离物第六号片段ｃＤＮＡ全序列合成了两个寡聚核苷酸引物,经过逆转录合成ｃＤＮＡ,应用ＰＣＲ方法扩增了编码区的基因序列,并将扩增产物克隆到ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）载体上。对重组子进行限制性酶切分析和ＤＮＡ序列分析证明,得到的是ＲＤＶ第六号片段完整的编码序列,进而构建了亚克隆并进行了全序列测定。结果表明,我们所扩增和克隆的     

奶山羊β—乳球蛋白cDNA的克隆

从奶山羊乳腺中快速抽提总ＲＮＡ,根据已发表的绵羊β乳球蛋白基因的序列,设计并合成与ｏＢＬＧ基因第一个外显子和最后一个外显子的部分序列相对应并能与特定载体末端互补的一对引物,经反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段民互性化质粒ｐＤＩＲＥＣＴ退火,获得重组质粒ｐＤＢＬＧ。ＰＣＲ鉴定、限制性分析和分子我均表明已克隆以奶山羊ＢＬＧ的ｃＤＮＡ。     

肝癌病人血清中丙型肝炎病毒E2／NS1基因区cDNA的克隆及序列分析

从一个抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）阳性的肝细胞癌（ＨＣＣ）病人血清中提取ＲＮＡ,随机引物逆转录为ｃＤＮＡ后,用ＨＣＶ特异引物进行聚合酶链反应。将扩增产的７８０ｂｐ插入ｐＵＣ１８和ｐＵＣ１９质粒载体,双脱氧链末端终止法测定其序列。与慢性丙型肝炎病人或携带者血清中的ＨＣＶ序列比较,核苷酸同源性介乎６９．２３％－８９．１０％,氨基酸同源性介乎７４．５９％－９０．５７％,分析表明,此序列属于１组Ⅱ型。本文结果