辐照外源DNA导入番茄研究——D_1、D_2代分析

辐照外源DNA导入番茄后 ,供体叶形不但在D1 代上得到表达 ,而且能遗传到D2 代。并且在D1 代 ,其果形、果实大小以及VC 含量等都有明显变化。为验证该技术的效果和重复性 ,又进行了第二期辐照外源DNA导入番茄试验 ,发现在D1 代幼苗中 ,供体的显性基因正常叶形 ,仍有一定的几率在受体中得到表达 ,结果与第一期试验相同。野生种番茄DNA经辐照作供体导入后 ,也获得了野生种叶形在受体中得到表达的D1 代植株。说明辐照外源DNA导入番茄技术效果好 ,重复性好 ,便于进行远缘杂交。     

辐照外源DNA导入番茄两种同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳对辐照外源DNA导入番茄的受体后代进行过氧化物酶和细胞色素氧化酶同工酶研究,并对供体叶形在受体后代中的表达和后代株高进行分析。研究表明,多数受体后代与受体对照的两种同工酶图谱差异较大而与供体对照的两种同工酶图谱较为相似,这与它们在外观性状（叶形和株高）上的差异是吻合的。受体后代与体供在同工酶图谱上的相似性以及供体外观性状在受体后代的表达表明了外源DNA已经导入受体,并得到整合表达,说明辐照外源DNA导入技术是改良番茄品种,丰富育种材料的一条有效途径,在番茄选育新品种方面有良好的应用前景。     

外源DNA导入烟草后D1代植株的蛋白质电泳分析

检测使用花粉管通道技术向受体烟草NC89导入供体烟草CV87的总DNA后,得到的D1代植株及其亲本蛋白质的PNGE和SDS—PAGE的结果显示,供体、受体及D1代个体在SDS和SDS—PAGE的谱带上存在多态性。供体有特征谱带,DZ9811和QD9812等个体表现了供体的特征谱带。     

辐照外源DNA导入番茄的研究

利用＾６０Ｃｏ的γ射线辐照外源ＤＮＡ导入选育番茄。研究表明,辐照外源ＤＮＡ导入后,提高Ｄ０代的座果率;使Ｄ０代结籽数减少,但比没有辐照的ＤＮＡ导入要多,这些与剂量有一定的关系,差别明显。果脐有变化,这与短截花柱有关。在Ｄ１代的幼苗观察中,发现供体的叶形和幼苗茎杆颜色（紫色）的显性基因,已在受本中得到表达。     

激光与DNA非线性作用在番茄选育中应用

理论研究发现 :激光与 DNA相互作用系统 ,存在非线性演化行为 ,如混沌、非线性共振、随机共振及随机混沌等[1-4] ,从而可能引起 DNA分子出现变异和断裂[5] 。我们根据这一理论研究结果 ,进行了激光辐照DNA导入番茄选优的应用研究。理论研究表明 :波长选用 632 .8nm至 660 nm的激光辐照效果较好 ,因此分别选用 He- Ne激光和半导体激光来处理。选用荷兰优良番茄品种 EA,提取其 DNA,经激光辐照后作为供体 ,受体为哈斯五号。受体与供体品种的品性基因与隐性基因所控制的性状正好互补 ,便于观察和选择。D0 代的座果率无多大变化 ,而结籽率…     

外源DNA导入糯玉米自交系D0代变异植株过氧化物酶同工酶分析

采用改良浸种法分别将甘蔗总DNA与孟加拉超甜玉米自交系总DNA导入糯玉米自交系12-9-10,在D0代分别获得变异植株,采用聚丙烯酰胺垂直电泳法对该植株及供受体进行了过氧化物酶同工酶分析,其结果表明植株D0(糯×甘300)的过氧化物酶同工酶在迁移率Rf5=0.33和Rf6=0.40分别出现一条供体特有而受体没有的酶带,其酶带强弱与供体相同;在迁移率Rf8=0.61出现一条供受体都没有的弱带。植株D0(糯×孟甜300)-2在迁移率Rf6=0.59增加了一条供受体都没有的弱带。说明了外源DNA(或DNA片段)已转移到糯玉米自交系12-9-10中,并得到了表达。     

美洲拟鲽抗冻蛋白基因转化番茄的形态学与苹果酸脱氢酶同工酶检测

将带有afp基因的Ti质粒pMon(232),作为供体DNA,用花柱道和子房注射DNA的方法转化番茄品种“中蔬四号”对D1D2代进行田间抗寒性观察,发现在春季平均气温低于正常年分4．4℃条件下,有些组分田间长势明显好于对照。初步确认已获得抗寒性。对D2代转基因植株进行MDH同工酶分析,均与对照有明显差异,间接验证了外源DNA的导入,说明同工酶分析,可作为转基因植株早期筛选的生化指标。     

外源DNA导入糯玉米自交系D_0代变异植株过氧化物酶同工酶分析

采用改良浸种法分别将甘蔗总DNA与孟加拉超甜玉米自交系总DNA导入糯玉米自交系12-9-10,在D0代分别获得变异植株,采用聚丙烯酰胺垂直电泳法对该植株及供受体进行了过氧化物酶同工酶分析,其结果表明植株D0(糯×甘300)的过氧化物酶同工酶在迁移率Rf5=0.33和Rf6=0.40分别出现一条供体特有而受体没有的酶带,其酶带强弱与供体相同;在迁移率Rf8=0.61出现一条供受体都没有的弱带。植株D0(糯×孟甜300)-2在迁移率Rf6=0.59增加了一条供受体都没有的弱带。说明了外源DNA(或DNA片段)已转移到糯玉米自交系12-9-10中,并得到了表达。     

外源DNA导入燕麦后代的蛋白电泳及RAPD分析

将皮燕麦外源DNA通过花粉管途径导入裸燕麦受体品种,对获得的2个遗传性已经稳定的优良变异后代（品系）982D-2和982D-26进行了可溶性蛋白电泳和RAPD分析,结果表明：从可溶性蛋白电泳图谱中观察到982D-2后代具有3条供体亲本的特异蛋白带,其分子量分别为25.2KD,24KD和13KD;982D-26后代具有1条供体亲本的特异蛋白带。其分子量为24KD;选用37个引物对以上2个变异后代及其它们的供,受体亲本基因组DNA进行RAPD扩增,从其中D36和D522个引物的扩增图谱中观察到2个变异后代具有4个与供体亲本相同,而受体亲本所没有的特异性DNA片段。综合比较982D-2和982D-26变异后代的蛋白电泳及RAPD扩增图谱表明,它们在基因组水平上具有较大的遗传异质性,育种上可作为不同的新型种质资源加以利用。本研究的分析结果证明,供体皮燕麦外源DNA已通过花粉管途径导入到受体裸燕麦中。     

外源DNA导入大豆后代种皮颜色变异的过氧化物酶分析

本实验用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,对外源DNA导入大豆引起种皮颜色变异的后代进行了过氧化物酶同工酶的酶谱分析.结果表明:不同种皮颜色的后代含有供体的谱带.这说明了外源DNA片断已整合到受体基因组中并得到表达.