红豆杉组织培养中SINENXANS高产细胞系Ts19的几种同工酶动态比？…

对从中国红豆杉的茎来源的愈伤组织经筛选而得的ｓｉｎｅｎｘａｎｓ高产细胞系Ｔｓ１９的过氧化物酶（ＰＯＤ）、酯酶（ＥＳＴ）、细胞色素氧化酶（ＣＯＤ）、淀粉酶（ＡＭＬ）、多酚氧化酶（ＰＰＯ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的同工酶,可溶性蛋白的含量及电泳谱带、超氧化物歧化酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）的活性作了比较研究。并与培养过程中ｓｉｎｅｎｘａｎｓ含量的动态变化相比较,探索了这几种同工酶的酶谱和     

植物生长调节剂对南方红豆杉愈伤组织培养和紫杉醇合成的影响

通过不同种类和水平植物生长调节剂对南方红豆杉(Taxus chinensisvar.mairei)愈伤组织诱导、生长和紫杉醇合成能力影响的研究发现:诱导培养初期,以无植物生长调节剂的MS为基本培养基,在附加不同植物生长调节剂组合作用下愈伤组织产生的时间和生长、在相同植物生长调节剂组合作用下不同外植体愈伤组织的产生时间和生长均表现出较显著差异,2,4-D/NAA高于0.4时,不利于南方红豆杉愈伤组织的诱导。转换到附加不同植物生长调节剂组合的B5培养基上后,随培养继代次数的增加,生长差异逐渐缩小,直至不显著,表明参考不同文献报道最优配方所设计的各植物生长调节剂组合对南方红豆杉愈伤组织的生长均较适宜,有利南方红豆杉愈伤组织生长的植物生长调节剂优化组合没有唯一性。但不同调节剂组合作用下的同源愈伤组织中、相同调节剂作用下不同源愈伤组织中紫杉醇含量均存在着极显著差异,适当水平(2 mg/L)的2,4-D单用,或与适当水平的KT、6-BA、KT GA配合使用,对南方红豆杉愈伤组织紫杉醇的合成较有利,NAA则不太有利,幼茎和叶愈伤组织产紫杉醇的水平较其它愈伤组织为高。     

东北红豆杉组织培养的研究 Ⅰ．叶片愈伤组织的诱导

东北红豆杉（ＴａｘｕｓｃｕｓｐｉｄａｔａＳＩＥＢＥＴＺＵＣＣ）是天然抗癌药物资源,其树皮中含有一种抗癌药物（ＴＡＸＡＬ紫杉酚）引起各国的注意。由于红豆杉生长缓馒,往往遭到砍伐,远远不能满足抗癌药物研究和医疗药用的需要;加之资源又贫乏,因此确定此项研究。开展此项研究结果表明：黑龙江省、辽宁省及哈尔滨地区采样诱导率哈尔滨居首位,采样时间以五月份愈伤组织诱导率高达５６．５％;叶片不同部位以叶前部和后部为好;叶脉方向对诱导率无明显差导。诱导愈伤组织中注意及时转移、继代、防止在培养中的褐变。克服褐变需对愈伤组织选择出组织紧密、褐变速度慢、同时在培养基中加入一些抗氧化剂,其效果明显。目前愈伤组织三颗粒状,已见绿芽点,现转入分化试验。     

组织培养和HPLC法研究红豆杉生物合成紫杉醇的组织化学定位

为了探索用组织培养法和高效液相色谱(HPLC)法研究红豆杉植物生物合成紫杉醇的组织化学定位,对南方红豆杉[Taxuschinensis(Pilger)Rehd.var.mairei(LemeeetL啨vl.)ChengetL.K.Fu]和曼地亚红豆杉(Taxusmediacv.Hicksii)各种组织进行了愈伤组织诱导培养,用HPLC法(检测条件:色谱柱为DiamonsilTMC18,5μm,4.60×250mm柱,检测波长为227nm,流动相为甲醇∶水∶乙腈=1∶2∶2,流速为1.2mlmin,柱温为35℃,灵敏度为0.16AuFs,进样量10μL)对组织培养物中紫杉醇含量进行检测,结果显示:红豆杉幼茎、幼茎皮、茎形成层、幼叶和顶端分生组织的组织培养物中紫杉醇含多以由分生组织细胞诱导培养所形成的愈伤组织为高。南方红豆杉以幼茎皮和茎形成层愈伤组织培养物中为高,分别为0.0409%(干重)和0.0407%(干重),曼地亚红豆杉则以茎形成层和顶端分生组织的愈伤组织培养物中为高,分别为0.025%(干重)和0.016%(干重),均是它们天然材料中含量的2.3～8倍。     

几种红豆杉属植物不定根的形成及其紫杉醇的产生

红豆杉（Taxus chinensis）和东北红豆杉（T. cuspidata）幼苗下胚轴和胚根可以形成不定根。DCR培养基培养的不定根发生频率高于B     

红豆杉的愈伤组织诱导及培养研究（初报）

以红豆杉雄球花、茎切段等为外植体诱导产生了愈伤组织。适宜愈伤组织诱导及其生长的培养基为１／２ＭＳ培养基附加２,４—Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ。在不同浓度激素配比的培养基上均未观察到愈伤组织发生再分化。     

红豆杉愈伤组织超代温保存有关因素的研究

对红豆杉愈伤组织超低温保存中几个主要因素进行了比较,试验证明：预培养时间、预培养其中蔗糖浓度、保护剂的组合以及冰冻降温方法与超低温保存后的相以细胞活力密切相关。试验结果表明,在含8％蔗糖的62号液体培养基中振荡预培养6d,红豆杉愈伤组织在超低温保存后细胞活力保持最高。有效的冷冻保护剂为10％山梨醇＋10％DMSO,冷冻方法以分步冷冻和慢冻较为适宜,而经快冻的愈伤组织复苏后活力低下。     

墨西哥红豆杉愈伤组织的诱导和器官发生

1　植物名称　墨西哥红豆杉 (Ｔａｘｕｓｇｌｏ ｂｏｓａ)。2　材料类别　墨西哥州Ｐａｃｈｕｃａ县Ｈｉｄａｌｇｏ山森林中自然生长的墨西哥红豆杉成年树当年生成熟枝 ( 9月份取样 )。3　培养条件　愈伤组织诱导培养基是ＳＨ ,Ｂ5 和ＮＮ6 9基本培养基添加ＮＡＡ 2 .0ｍｇ·Ｌ     

红豆杉愈伤组织超低温保存有关因素的研究

对红豆杉愈伤组织超低温保存中几个主要因素进行了比较,试验证明预培养时间、预培养基中蔗糖浓度、保护剂的组合以及冰冻降温方法与超低温保存后的相对细胞活力密切相关.试验结果表明,在含8%蔗糖的62号液体培养基中振荡预培养6d,红豆杉愈伤组织在超低温保存后细胞活力可保持最高.有效的冷冻保护剂为10%山梨醇+10%DMSO,冷冻方法以分步冷冻和慢冻较为适宜,而经快冻的愈伤组织复苏后活力低下.     

红豆杉高产悬浮细胞系建立及其紫杉醇诱导的研究进展

紫杉醇是一种四环二萜酰胺类化合物,是从红豆杉科红豆杉属植物中提取分离出来的次生代谢物,是世界公认广谱、活性强的天然抗癌新药。但直接从植物中提取紫杉醇的传统生产方式,不仅产量低,且会对野生红豆杉资源造成严重破坏,同时紫杉醇的化学全合成也由于其结构复杂而不具备商业价值。与之相反,细胞培养技术具有受外界影响少、生产成本低、次生代谢产物多、细胞生长周期短的优势,是目前最具前景的紫杉醇生产方式。近年来随着科研水平的不断提升,紫杉醇无论在生理代谢调控、关键基因挖掘,还是新药物制剂与剂型及其类似物的开发和运用等方面,都取得了进展,但要建立紫杉醇商业化高产体系,还必须和前人的研究经验相结合。该文对红豆杉高产悬浮细胞系建立及其紫杉醇诱导的研究进展进行了综述,主要包括前人对红豆杉属植物组织与细胞培养相关的外植体、培养基、激素、培养条件、褐化等问题的研究,以及从代谢调节、培养方式、基因工程等多方面提高紫杉醇含量的最新进展,最后总结了当前研究的不足,并对今后通过多种组合方式来提高紫杉醇含量的生产途径进行了展望。以期促进红豆杉组织培养技术的进步,为药用资源保护和利用提供一定的理论基础与生产指导。     

红豆杉细胞培养的研究

从红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｐｉｌｇ）Ｒｅｈｄ）的嫩茎及针叶诱导的出愈伤组织,对愈伤组织培养及细胞悬浮培养进行了研究,利用ＨＰＬＣ方法测定它们合成紫杉醇的能力,发现了能够提高培养细胞生长速率及紫杉醇含量的一些因子,红豆杉愈伤组织及悬浮培养细胞的生长速率已分别达到０．２５ｇ／Ｌ．ｄ和０．２８ｇ／Ｌ．ｄ。而他们的紫杉醇含量分别是０．００２６％和０．０１２％。     

前体物对红豆杉培养细胞中紫杉醇生物合成的影响

本文报道了添加７种紫杉醇前体物／调节物后,红豆杉（Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｐｉｌｇｅｒ）Ｒｅｈｄ）ＴＣ１５８细胞系的反应,在红豆杉细胞悬浮培养２５天时,分别加入不同浓度乙酸钠,苯甲酸钠,Ｌ－苯丙氨酸,甘氨酸,丝氨酸、α－蒎烯,松节油。试验结果表明,各前体物对红豆杉细胞生长无明显影响,均不同程度地促进了紫杉醇的合成。     

茉莉酸甲酯对中国红豆杉胚性细胞紫杉醇生物合成的影响

紫杉醇(taxol)是一种复杂的二萜类生物碱,最初是从红豆杉类(Taxus)植物的树皮中分离出来的。紫杉醇作为具有广谱抗肿瘤活性的药物而得到广泛的临床应用,成为当今世界上有效的抗癌药物之一,但其天然资源十分稀少,解决其药源问题就显得非常重要。目前,普遍认为采用红豆杉细胞悬浮培养生产紫杉醇是很有希望的途径之一。而提高红豆杉细胞生长速率以及细胞中紫杉醇的含量是实现细胞悬浮培养生产紫杉醇的两个关键因素,笔者研究了茉莉酸甲酯(methyl-jasmonate,简称MJ)在红豆杉细胞培养中的代谢调节作用。茉莉酸甲酯是茉莉属(Jasminum)中的素馨花…     

红豆杉器官,组织,细胞培养和基因工程的研究进展

本文综述了红豆杉器官、组织、细胞培养和基因工程的研究文献,并对这些领域存在的问题及其发展前景进行了讨论。     

水杨酸对细胞培养生产紫杉烷的影响

研究了水杨酸对中国红豆杉细胞培养生产紫杉烷的影响。结果表明 ,适宜浓度的水杨酸对不同的紫杉烷的合成均有明显的促进作用     

抑制剂促进紫杉醇生物合成的初步研究

研究了５－甲基－ＤＬ－色氨酸（５－ＭＴ）,丙二酸钠等１１种代谢抑制剂对红豆杉悬浮培养细胞生长和紫杉醇生物合成速率的影响,筛选取５－ＭＴ等３种对紫杉醇生物合成有促进作用的抑制剂,抑制剂在稳定期添加剂红豆杉细胞生长无强烈的抑制作用。更有利于紫杉醇的生物合成,各抑制剂与前体和真菌诱导协同作用提高增产效果,增产大小依次为５－ＭＴ,马来酸和丙二酸钠,其中５０ｍｇ·Ｌ＾－１５－ＭＴ使紫杉醇含量提高近１０倍,１     

植酸对红豆杉细胞悬浮培养影响作用的研究

针对红豆杉细胞培养中经常遇到的褐变问题,以植酸做抗氧化剂,添加到悬浮细胞培养基中,能提高细胞鲜重,明显抑制细胞多酚氧化酶和过氧化物酶活性,从而有效地控制细胞褐变,促进红豆杉悬浮细胞生长。以005%浓度的添加效果最好。     

桔青霉诱导子对红豆杉培养细胞中紫杉醇生物合成的影响

在红豆杉培养红胞中,桔青霉诱导子促进紫杉醇的合成。将培养６－７ｄ的桔青霉菌丝体的粗提物,以５０μｇ碳水化合物／ｍｌ培养液的浓度加入到处于指数生长期末期的红豆杉培养细胞中,诱导子促进紫杉醇合成的作用最大。高压灭菌处理２０－９０ｍｉｎ,不影响诱导子的活性。     

从中国红豆杉细胞培养物中分离鉴定紫杉醇

中国红豆杉(Taxus chinensis(Pilger．)Rehd)细胞在培养过程中合成了紫杉醇,我们利用固液分离、大孔吸附树脂吸附富集、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、低压硅胶柱层析、重结晶等方法,从中国红豆杉的细胞培养物中分离纯化了紫杉醇,用多种核磁共振波谱方法(^1H NMR,^13C NMR,DEPT,^1H-^1H-COSY,NOESY,HMQC,HMBC)结合质谱(FABMS),红外光谱、紫外光谱等方法鉴定了它的化学结构,证明与源于天然红豆杉植物材料提取的紫杉醇为同一物质。     

磷酸戊糖途径的调节对红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响

在正常的红豆杉细胞悬浮培养过程,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性的变化趋势与生物量的基本相似。而在chitosan处理的细胞中G6PDH活性升高而生物量下降。100 mg·L^-1 chitosan和500mg·L^-1 chitosan均对细胞G6PDH具有诱导作用,且后者的诱导强度较前者的高。乙二醇双2-氨基乙基醚四乙酸(EGTA)的加入降低chitosan对细胞G6PDH的诱导程度,显示chitosan对G6PDH的诱导需要Ca²⁺的参与。谷胱甘肽(GHS)的处理可反馈抑制chitosan对细胞G6PDH的诱导。通过分析调节后G6PDH的各种活性与细胞中紫杉醇产量的关系,认为采用合适的处理方法调节磷酸戊糖途径,有利于红豆杉细胞合成紫杉醇。