AMPK激活通过负性调控C/EBPβ抑制小鼠心脏成纤维细胞TGFβ1表达

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)激活具有抗纤维化的作用,但其具体机制仍不十分清楚。本研究拟在心脏成纤维细胞中,明确AMPK激活对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)引起的转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)表达的作用及其具体机制。分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞,酶联免疫吸附实验检测TGFβ1蛋白表达,免疫印迹实验检测AMPK活性和CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer-binding proteinβ,C/EBPβ)表达,双荧光素酶报告基因实验检测TGFβ1转录活性。结果显示,给予AMPK激活剂AICAR预处理可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1产生增加,这一抑制作用可被AMPK抑制剂Compound C逆转。生物信息学分析显示在小鼠Tgfb1启动子区存在C/EBPβ转录因子可能的结合位点。双荧光素酶报告基因实验表明,对于转染Tgfb1启动子区序列质粒的小鼠胚胎成纤维细胞,AngⅡ可以增加TGFβ1转录活性;但是对于转染缺失C/EBPβ结合位点的Tgfb1启动子区序列质粒的细胞,AngⅡ则不能增加其转录活性,提示C/EBPβ介导了AngⅡ引起的TGFβ1转录表达。进一步免疫印迹实验显示,AICAR可以抑制AngⅡ引起的C/EBPβ增加。上述结果表明,AMPK激活可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1表达增加,其作用机制是通过抑制转录因子C/EBPβ表达,进而抑制TGFβ1表达。该研究结果提示了AMPK抗纤维化作用的一个新机制。     

山丹黄参多糖对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的影响

为了研究山丹黄参多糖对四氯化碳(CCl4)致小鼠(Mus musculus)急性肝损伤及相关酶活性的影响,对50只小鼠分别灌胃0.2 ml山丹黄参多糖(12.5、25.0、37.5 g/L)或生理盐水7 d,最后一次灌胃1 h后腹腔注射1%的CCl4橄榄油溶液0.2 ml,16 h后处死小鼠,比色法检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的变化,显微镜观察肝组织结构的变化,免疫组织化学法检测肝组织中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的变化。与正常对照组相比,实验对照组小鼠体重减轻,血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力显著升高(P0.01),肝明显肿胀,肝组织结构不清,肝细胞出现炎性坏死,转化生长因子-β_1(TGF-β_1)阳性表达明显增强(P0.01)。与实验对照组相比,山丹黄参多糖各组小鼠体重增加,血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力明显降低(P0.01),肝无明显肿胀,肝索清晰,炎性坏死很少,细胞结构清晰,转化生长因子-β_1阳性表达明显减少(P0.01)。表明一定剂量的山丹黄参多糖能增强机体活力,促进机体新陈代谢,降低正常细胞的凋亡,对四氯化碳造成的肝组织损伤有一定的保护作用。     

siRNA对肝纤维化的抑制作用

目的:研究肝星状细胞(HSC)中smad2特异性小干扰RNA(siRNA)对Ⅰ型胶原表达的抑制作用,探讨抗肝纤维化的基因治疗新方法。方法:设计合成靶向Smad2基因的siRNA,将筛选成功的siRNA瞬时转染入体外培养的肝星状细胞(HSC),并给予转化生长因子β(TGF-β)刺激,应用RT-PCR和Western blot技术检测对照组与实验组Ⅰ型胶原mRNA水平和蛋白水平表达差异,研究siRNA对Ⅰ型胶原表达的抑制作用。结果:siRNA能明显降低肝星状细胞中Smad2的RNA和蛋白的表达水平,证实筛选的siRNA有效,能特异性抑制Smad2的基因表达;TGF-β刺激肝星状细胞后,与对照组比较,siRNA转染组细胞外基质(ECM)成分Ⅰ型胶原的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:siRNA能够抑制TGFβ对肝星状细胞的激活,阻断TGFβ-Smads传导通路,使Ⅰ型胶原分泌下调,有效抑制TGFβ诱导的肝纤维化。     

TGFB信号通路调节胰岛β细胞增殖的功能研究

该研究主要探讨了转化生长因子β(transforming growth factor β,TGFB)信号通路对胰岛β细胞增殖的影响。以Min6为细胞模型,使用TGFB信号通路激活剂TGFβ1、抑制剂SB-431542分别激活和阻断TGFB信号通路,采用CCK-8细胞活性检测法检测Min6细胞活性,并用流式细胞分选术(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测Min6细胞中Ki-67阳性(Ki-67~+)细胞比例。最后用TGFβ1、SB-431542体外处理C57BL/6J小鼠胰岛48 h,免疫荧光检测小鼠胰岛中胰岛素、Ki-67双阳性(Insulin~+Ki-67~+)细胞数量。结果显示,使用TGFβ1处理Min6细胞、小鼠胰岛,Min6细胞活性下降,Ki-67~+ Min6细胞数量减少,小鼠胰岛中Insulin~+Ki-67~+细胞数量减少;使用SB-431542处理Min6细胞、小鼠胰岛,Min6细胞活性上升,Ki-67~+ Min6细胞数量增加,小鼠胰岛中Insulin~+Ki-67~+细胞数量增多。综上所述,抑制TGFB信号通路可促进胰岛β细胞的增殖能力,该研究为胰岛β细胞再生疗法的发展提供了理论支持。     

转化生长因子β对雌激素非依赖性乳癌细胞有抑制作用

转化生长因子β(TGFβ)对正常或转化细胞都有广泛的调节作用,而且通过自分泌或旁分泌机制发挥作用。曾有报道,TGFβ能抑制人上皮细胞癌的生长。最近,美国Arteage等测定了TGFβ与两种不同类型的人乳腺癌细胞增殖的关系。一种乳癌细胞不含雌激素受体,其生长不依赖于雌激素,称为ER~-细胞,它能迅速增殖,分化能力差;另一种是雌激素依赖细胞,含有雌激素受体,称为ER~ 细胞,生长较慢。实验表明,两类细胞对TGFβ反应性不同。ER~-细胞分泌大量TGFβ于介质中,能表达高亲和力TGFβ受体。~3H-胸苷掺入测定,微量外源性TGFβ即能抑制     

麦角甾苷通过PI3K/Akt/GSK3β通路抑制H_2O_2诱导的小鼠胚胎肝细胞凋亡

该文建立了H_2O_2诱导小鼠胚胎肝细胞损伤模型,并探讨了麦角甾苷通过PI3K/Akt/GSK3β通路抑制H_2O_2诱导的胚胎肝细胞凋亡作用机制。CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-x L、Bax、Cyt-c、Akt、p-Akt、GSK3β和p-GSK3β蛋白质水平。结果显示,麦角甾苷可通过降低Bax/Bcl-x L比值、抑制线粒体Cyt-c释放、增加Akt和GSK3β蛋白质磷酸化水平来提高细胞存活率、减少凋亡细胞数量。该研究结果表明,麦角甾苷可通过PI3K/Akt/GSK3β通路调节H_2O_2诱导的小鼠胚胎肝细胞凋亡。     

转化生长因子β的细胞生物学

无限繁殖是肿瘤细胞区别于正常细胞的主要特征之一。近年来,人们对细胞的生长分化及其调控机制的认识已有了深刻的变化。正常细胞均存在促进(如TGFα)和抑制(如TGFβ)其生长的多肽生长因子,该两种因子的平衡决定着细胞生长的生理或病理性变化。本文将简述转化生长因子β(TGFβ)近年来研究的一些进展。一、TGFβ是一组具有调节功能的多肽目前,已发现的TGFβ有五种亚型:TGFβ_1-TGFβ_5,其氨基酸有95-80%的同源性。TGFβ_1-TGFβ_3,其编码基因分别位于第19、1和14染色体上。TGFβ_1     

SMAD3介导TGF-β1抑制MMP9在COS7细胞中的表达

用明胶酶谱的方法检查了野生型和Smad3ex8 ex8纯合突变小鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP9)的活性 .发现突变小鼠血清中MMP9的含量较正常小鼠的明显增高 ,提示SMAD3有抑制MMP9表达的功能 .通过细胞转染实验证实 ,TGF β1和野生型的SMAD3可以抑制COS7细胞分泌MMP9,而C端缺失的突变型Smad3基因过表达可以解除这种抑制作用 ,说明SMAD3介导TGF β1信号抑制MMP9在COS7细胞中的表达 .     

细胞因子与酒精性肝病

酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的发生发展过程与体内多种细胞因子有关,尤其是肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在调节肝细胞的凋亡过程中具有重要作用。TNF-α可引起肝细胞凋亡与炎症反应等,抗TNF-α治疗能明显减轻酒精引起的肝损害;TGF-β具有增加细胞外基质的合成和抑制细胞外基质降解的作用,TGF-β1升高与肝纤维化密切相关。细胞因子可能是防治酒精性肝病的有效分子靶点。     

miRNA-181a在胃癌细胞增殖和迁移中的作用

miRNA与恶性肿瘤患者的诊断和预后密切相关,为了考察miRNA-181a在胃癌细胞增殖和迁移中的作用,本研究检测了miRNA-181a在胃癌组织中的表达,并通过对人胃癌细胞系MGC-803转染miR-181a模拟物或抑制剂来考察miR-181a对细胞迁移和增殖的影响。RT-PCR显示,miRNA-181a在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(p<0.05)。伤口愈合实验和Transwell实验显示,转染miR-181a抑制剂或TGF-β受体2(TGFβR2)过表达的pcDNA3.1质粒均可抑制MGC-803细胞的迁移。EdU实验和CCK-8实验显示,转染miR-181a抑制剂或TGFβR2过表达的pcDNA3.1质粒均可抑制MGC-803细胞的增殖。此外,miR-181a抑制剂处理可使TGFβR2蛋白表达明显升高。然而,miR-181a模拟物或抑制剂处理后TGFβR2mRNA水平没有显著变化。总之,本研究表明高表达的miR-181a通过在转录后抑制TGFβR2蛋白表达来促进胃癌细胞的迁移和增殖。miR-181a有望成为胃癌的潜在治疗靶点。     

胚胎干细胞向肝实质细胞体外定向诱导分化过程中的肝卵圆细胞

如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因 ( 肝毒性物质、致癌物质的作用 ) 抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体／干细胞———肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复 . 基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型 . 但显然上述模型不适用于人类,所以有必要开发一种适用于人类的、高效的肝卵圆细胞的新诱导模型 . 选用小鼠胚胎干细胞,转成拟胚体分化 3 天后分组,诱导组添加肝细胞生长因子 (HGF) 、表皮生长因子 (EGF) 作定向诱导分化 . 其间用免疫细胞化学 (ICC) 检测肝卵圆细胞标志物 A6 等的表达,用流式细胞仪筛选肝卵圆细胞并行 RT-PCR 、透射电镜检测 . 所筛选的肝卵圆细胞进一步体外培养并进行 ICC 和 RT-PCR ,检测其分化生成成熟的肝细胞和胆管细胞的能力 . 研究证实胚胎干细胞体外定向诱导生成肝实质细胞的过程中,存在着有双向分化能力的肝卵圆细胞这个中间分化阶段 . 诱导组肝卵圆细胞分化率均显著地高于对照组,最高时可达 6.11% 左右 . HGF 和 EGF 能显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成 . 流式细胞仪筛选 Sca-1+/CD34+ 细胞占总细胞数的 4.59% ,其中 A6 阳性肝卵圆细胞占 90.81% 左右 . 使用流式细胞仪可获得高富集的 A6+/Sca-1+/CD34+ 肝卵圆细胞 . 提供了一种可适用于人类的肝卵圆细胞的新诱导模型 .     

大剂量电离辐射对小鼠肺组织的影响

目的探讨大剂量电离辐射对小鼠肺的影响。方法 60Coγ照射小鼠,HE染色观察小鼠肺组织损伤,免疫组化检测小鼠肺转化生长因子β1(TGFβ1)和细胞间粘附因子1(ICAM1)的表达。结果大剂量照射后3d,小鼠肺发生明显异常病变,TGFβ1和ICAM1表达量明显增加。结论肺内皮细胞损伤和血管内物质外漏可能是急性放射性肺损伤的早期重要事件,早期检测ICAM1有助于预测急性放射性肺损伤的发生程度。     

siRNA沉默TGFβR1对人口腔上皮癌Ca9-22细胞增殖和凋亡影响

为了研究转化生长因子β受体1 (transforming growth factor-βreceptor 1,TGFβR1)在人口腔上皮癌Ca9-22细胞中的表达,并探讨TGFβR1 siRNA对Ca9-22细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测TGFβR1 mRNA在人口腔上皮癌Ca9-22细胞中的表达水平。通过lipofectamine 2000将TGFβR1 siRNA转染到Ca9-22细胞,荧光定量PCR检测TGFβR1 siRNA干扰效率,CCK8和流式细胞术分别检测TGFβR1 siRNA对Ca9-22细胞增殖和凋亡的影响;Western blotting检测TGFβR1 siRNA对Ca9-22细胞Hes1、Bcl2和Notch1蛋白表达的影响。荧光定量PCR检测结果显示,与正常人口腔上皮HOK细胞比较,人口腔上皮Ca9-22细胞中TGFβR1 mRNA水平显著升高;CCK8结果显示,与Control组比较,TGFβR1siRNA组细胞增殖率显著降低(p0.01);流式检测结果显示,与Control组比较,TGFβR1 siRNA组Ca9-22细胞凋亡率为显著升高(p0.01);Western blotting结果显示,与Control组比较,TGFβR1 siRNA组Hes1、Bcl2和Notch1蛋白表达显著降低(p0.01)。研究结果初步表示,siRNA干扰TGFβR1能够抑制Notch1/Hes1通路,抑制Ca9-22细胞增殖,促进Ca9-22细胞凋亡。     

转化生长因子-β细胞周期抑制机制

转化生长因子－β（TGF－β）属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖,分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF－β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF－β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF－β可以通过不同的途径使细胞停留在G1期,从而抑制细胞的生长。TGF－β信号转导通路的异常与肿瘤的发生密切相关。本文对近年TGF－β细胞周期抑制机制的研究作一综述。     

肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1/Smads信号转导通路的影响

目的观察肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1/Smads信号转导通路的影响。方法以肝癌患者和健康志愿者服药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和WesternBlotting方法观察含药血清对肝癌细胞SmadsmRNA及其蛋白表达的影响。结果肝癌患者肝癥口服液含药血清可增强Smad4mRNA及其蛋白表达,而抑制Smad7的过强表达,具有显著性差异;健康志愿者肝癥口服液含药血清可明显抑制肝癌细胞Smad7mRNA表达。结论解除TGFβ1/Smads信号转导通路过度受抑状态,可能是肝癥口服液抗癌的机制之一。     

肺泡型细胞内表皮生长因子和转化生长因子α、β_1及其受体基因表达的研究

分离培养成年大鼠的肺泡 型细胞 ,通过斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色 ,研究肺泡 型细胞内表皮生长因子 (EGF)、转化生长因子 α和 β1 (TGFα、TGFβ1 )及其受体基因的表达。结果显示肺泡 型细胞可表达 EGF、TGFα和TGFβ1 ,也可表达相应的 EGF受体 (EGFR)、TGFβ受体 型和 型 (TβR 、TβR )。表明肺泡 型细胞是合成和分泌 EGF、TGFα和 TGFβ1 的细胞之一 ;细胞凭借其 EGFR、TβR的存在 ,其增殖与分化可能受 EGF、TGFα和 TGFβ1 的旁分泌和自分泌两种途径调控。     

TGF—β与移植免疫

转化生长因子－β(transforming growth facter-β,TGF－β）是一种对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要调节作用的多肽。在器官移植中TGF－β主要是一种负的免疫调节剂。本综述简要介绍了TGF－β与器官移植免疫排斥反应的关系。     

骨形态发生蛋白9诱导成骨相关TGFβⅡ型受体的鉴定分析

前期研究发现骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)具有较强的诱导骨形成的能力,但目前对其诱导骨形成相关的分子机制了解甚少．采用重组腺病毒的方法成功构建显性负性突变的转化生长因子(TGF)βⅡ型受体的腺病毒,将其与BMP9共同导入靶细胞,通过体外细胞实验和体内动物实验,初步鉴定分析与BMP9诱导成骨密切相关的TGFβⅡ型受体．体外细胞实验发现：三种显性负性突变的TGFβⅡ型受体,即dnBMPRⅡ、dnActRⅡ和dnActRⅡB在体外能抑制由BMP9诱导的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达和钙盐沉积,并可抑制BMP9诱导的Smad信号途径的激活．动物实验也显示,dnBMPRⅡ、dnActRⅡ和dnActRⅡB可抑制BMP9诱导的异位成骨,提示相应的野生型TGFβⅡ型受体即BMPRⅡ、ActRⅡ和ActRⅡB很可能与BMP9诱导成骨有关．而靶细胞中均只表达BMPRⅡ和ActRⅡ,并不表达ActRⅡB.随后,采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)对BMPRⅡ和ActRⅡ进行基因沉默,结果发现BMPRⅡ和ActRⅡ的表达受到抑制后,由BMP9诱导的荧光素酶活性和ALP活性也相应受到抑制．因此,BMPRⅡ和ActRⅡ是与BMP9诱导成骨分化相关的TGFβⅡ型受体．     

胰岛特异细胞因子PANDER在糖尿病病理生理过程中的作用

胰腺衍生因子(PANcreatic DERived factor,PANDER)是新近克隆的细胞因子,在胰腺的胰岛β细胞中特异性高表达.重组PANDER蛋白预处理或腺病毒过表达PANDER基因均可在体外显著地诱导人、大鼠及小鼠胰岛β细胞及多种β细胞系凋亡, 并抑制其胰岛素分泌.同时,炎症细胞因子IFN-γ能显著地上调β细胞PANDER基因的表达,提示PANDER有可能在炎症细胞因子介导的1型糖尿病病理生理过程中起作用.PANDER蛋白与胰岛素通过Ca2 依赖的方式从β细胞中共分泌进入循环系统,特异性地结合到肝细胞膜上并抑制肝细胞胰岛素信号转导,这提示PANDER可能也介入了机体胰岛素抵抗的形成.本文结合笔者多年从事PANDER的生理学功能研究,对PANDER的发现、最新研究进展及其潜在的生理学功能进行总结与分析.     

胰多肽对大鼠垂体前叶β-内啡肽和催乳素释放的影响

本工作分在体和离体两部分实验。(1)给清醒自由活动的大鼠第三脑室内微量注射0.5和2.0μg的胰多肽(PP),观察到PP显著抑制前叶垂体β-内啡肽(β-EP)和催乳素(PRL)的静息分泌,抑制效应随PP的剂量增加而增大。此外,0.5μgPP能部分抑制限制性应激引起的PRL的释放;2.0μgPP只部分抑制此应激引起的β-EP的释放,并显著抑制应激时PRL的释放。(2)离体实验于体外培养的前叶垂体细胞中,分别加入0.05,0.625.1.00μgPP,一起孵育1h,看到0.625和1.00μg的PP显著抑制PTL的释放,抑制效应依PP的剂量增加而增大;上述三种剂量的PP对前叶垂体细胞β-EP的分泌均无影响。这些结果提示,PP可能通过某种下丘脑机制抑制前叶垂体β-EP和PRL的释放,也可直接作用于前叶垂体细胞抑制PRL的释放。