蔗糖密度梯度离心法测定蛋白质的沉降系数

沉降系数(S值)是蛋白质的一个重要物理常数,一般在分析超迷离心机中进行分析。由于分析超速离心机需要配备特殊的分析转头和监测记录沉降粒子在离心过程中行为的装置,价格昂贵,一般实验室难以配备。Martin和Ames使用制备超速离心机,采用蔗糖密度梯度超离心法,测定了细菌组氨酸生物合成的有关酶的沉降系数,取得了较好的效果。我们参照该方法,并作了某些改进,现报告如下。     

穿刺法在禾本科作物叶生长测定中的应用

本文介绍了单针穿刺法与“针板”穿刺法在禾本科作物叶生长测定中的应用原则与范围,并就这些方法的准确性、精确性进行了探讨。测定鞘内叶的长度生长速率可用单针穿刺法。根据统计分析表明:单针穿刺对叶的长度生长速率并无显著的附加影响,其测定值是可靠的。此法的精确度是0.5毫米。测定各位叶的叶基生长区域的长度可用针板穿刺法。此法对叶的长度生长速率有抑制,但对叶基生长区域的长度无显著影响。因此,其测定值也是可靠的。此法的精确度是1—3毫米(随“针板”间隔的大小而异)。     

肌酸激酶胍变性与失活的关系

肌酸激酶(CK2.7.3.2)催化磷酸肌酸与ATP相互转化的反应。姚启智等曾对其在盐酸胍中的构象变化与失活动力学进行了比较研究,发现在低浓度变性剂中,失活的速度与程度都远大于构象变化。此酶为球蛋白,由两个可以解离的相同亚基组成,分子量82,600。本文在最适pH附近(pH9.0)测定了不同浓度盐酸胍中酶的沉降系数,对其解聚与构象变化进行了研究,以探讨快失活、慢构象变化与解聚的关系。 兔肌肌酸激酶的提取、活力测定、盐酸胍的纯化方法与文献[1]相同。沉降系数用日立282-型分析超速离心机于20℃左右测定,Schlieren光学系统,标     

密度梯度区带离心大量提纯乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的研究

文献上通常用于大量制备纯HBsAg的方法为两次氯化铯等比重分带和一次蔗糖速率区带沉降法。但在我们实验中,此法似乎不太理想,因为所得的HBsAg通常含有极微量的正常人血清蛋白。我们采用了一种复合的纯化方法,它包括胃蛋白酶消化、DEAE纤维素层析,氯化铯浮升区带离心及蔗糖速率区带离心。此法可以制出纯HBsAg,其浮密度在氯化铯梯度中为1．1 9—1．23克／厘米’,在蔗糖梯度中为1．15—1．16克／厘米’。在纯化的HEsAg 中未测出正常人血清蛋白,给豚鼠及马匹免疫3—4次可产生单特异抗一lIBs血清,不舍抗正常人抗体,因此纯度较高。电子显微镜观察,可见均匀的小球形颗粒,未见Dane颗粒及杆状颗粒。     

小鹅瘟病毒纯化及其理化特性的研究

详细描述了小鹅瘟病毒(Goslin—plague virus,GPV)扬州株的浓缩和纯化过程,并论述了其理化特性。试验证明,GPV在氯化铯中主要病毒区带的浮密度为11.31～1.35g/ml,电镜下可见空壳和实心两种病毒粒子,大小20～22nm,沉降系数90.5S。用Sepharose 4B柱层析纯化的病毒,等电点为4.3。GPV有3种结构多肽,即Vp1、Vp2和Vp3,分子量分别为85 000,61 000,57 500道尔顿,其中Vp3为主要结构多肽,纯化的病毒粒子能使鹅胚致死。     

酶偶联法尿素氮测定最适条件的探讨

血尿素氮(BuN)测定是临床上检查肾功能最常用的指标之一。其测定方法有比色法和酶法二类,用脲酶检测又可配以各种技术,如电化学法测定CO_2和NH_3的释放,比色法或酶偶联法,另外还可用固定化脲酶的酶电极和酶试纸。本文是采用脲酶、谷氨酸脱氢酶偶联反应测定BUN,此法具有特异性高、快速、准确、可使用单一试剂、便于自动分析等特点。     

一种新的测定蛋白激酶活性的方法：毛细管电泳测定蛋…

建立了以毛细管电泳为基础的测定蛋白激酶Ａ活性的新方法,可作为激酶测活的通用方法。此法基于底物及其磷酸化产物很容易在毛细管电泳中分开,且酶活力可用积分值计算。同时又发发展了连续井样技术,能在一次电泳中同时进行１０个以上的酶活性测定。新方法操作简单,灵敏度和精确性均优于常规的同位素法。     

一种新的测定蛋白激酶活性的方法──毛细管电泳测定蛋白激酶A的活性

建立了以毛细管电泳为基础的测定蛋白激酶A活性的新方法,可作为激酶测活的通用方法．此法基于底物及其磷酸化产物很容易在毛细管电泳中分开,且酶活力可用积分值计算,同时又发展了连续进样技术,能在一次电泳中同时进行10个以上的酶活性测定,新方法操作简单,灵敏度和精确性均优于常规的同位素法．     

光合放氧的电极电位测定法的研究

介绍了用电极电位法测定植物的光合放氧速率,由此可以测定其放氧活性,此法具有应用面广、设备简便、灵敏度高、反应快及可以连续记录的特点,是一种研究光合作用的新方法。     

超氧化物歧化酶和乳酸脱氢酶在凝胶板上同时显色的方法

本文报道一种能使乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶在同一块电泳凝胶板上经同一种染色液一次处理达到同时显色的方法。显色结果,LDH为有色区带,SOD为无色透明区带,两者一目了然。而且前者泳动慢,后者泳动快,两种区带互不重迭,不发生干扰,结果可靠。此法不需光照,显色效率高,有利于同一样品同时进行此两种同工酶的电泳分析,达到一举两得的效果。     

复方泛影葡胺速率区带密度梯度离心法纯化衣原体

目的利用速率区带密度梯度离心法建立纯化高纯度、高感染力衣原体的方法。方法采用HeLa229细胞扩增衣原体,制作含有大量衣原体的细胞裂解液,以国产复方泛影葡胺作为介质,利用速率区带密度梯度离心法纯化衣原体,负染纯化产物后使用透射电镜观察形态,并将纯化产物感染HeLa229细胞,测定纯化产物的感染力。结果在透射电镜下观察,证实纯化产物为直径300 nm左右的高纯度原体。纯化产物的感染力为8.62×10~8 IFU/mL,证实该纯化产物具有高感染力。结论通过复方泛影葡胺速率区带密度梯度离心法,可获得高纯度、高感染力的衣原体,为开展衣原体感染机制、免疫反应等研究提供了有效而可靠的保证。     

密度梯度离心技术在分子生物学研究中的应用

密度梯度离心技术是随着分子生物学的飞速发展而建立起来的一种重要的实验技术,广泛应用于核酸,蛋白、酶等生物大分子和生物膜、细胞大颗粒,亚细胞颗粒的分离、纯化及分析。可以说七十年代分子生物学研究中许多重大的成果都和这种技术的应用分不开。密度梯度离心大致可分二大类,一类是速率区带密度梯度离心,这类离心主要是利用生物大分子或亚细胞颗粒不同的沉降常数,在离心后分布在不同的预先铺制好的介质密度区,从而达到分离、纯化的目的。离心密度介质主要用蔗糖也可用甘露糖、甘油,多聚糖类、中性硅胶油等。这类离心技术广     

番茄叶绿体DNA的分离纯化及某些性质的研究

分离纯化了番茄的叶绿体DNA(ct DNA)。热变性分析测得Tm=82.1℃,由此计算得(G+C)％=31.2％。热变性微分曲线表明,在番茄ct NDA分子上存在着碱基组成比例分布上的异质性。分析超离心测得沉降系数S_(20w)=62.4。据此计算出分子量为80×10~6d。用电子显微镜观索了制备的ctDNA.     

小鼠腹水瘤病毒(SRSV)及其核糖核酸的纯化和某些性质的研究

从感染NIH3T3小鼠成纤维细胞上清液中分离小鼠腹水瘤病毒,用蔗糖密度梯度离心法纯化。从新鲜病毒中取小鼠腹水瘤病毒RNA,并用酚-氯仿抽提和蔗糖梯度分离。各组分的沉降系数(S)和分子量通过超速离心凝胶电泳分析测定。SRSV RNA主要由两组分组成,一是沉降系数约60～70S(热处理后约35S),还有少量18S和28S,另一是4～5S。35S组分在体外能指导无细胞蛋白的合成。     

乙肝疫苗的制备安全性

<正>我们在研制乙肝疫苗中,先用硫酸铵沉淀浓缩表面抗原(HBsAg),然后用KⅡⅠ离心机经密度超速区带离心等一系列步骤,提纯的部分HBsAg用PH为2的胃蛋白酶消化后置于8M尿素中灭活。在明胶     

酿酒酵母菌核糖体RNA沉降系数的初步研究

为研究酿酒酵母菌核糖体RNA(rRNA)的沉降系数,用酶解法和液氮研磨法裂解酿酒酵母菌的细胞壁,Trizol Reagent提取其总RNA,同时提取小白鼠和斑马鱼的总RNA进行比较.经紫外分光光度计检测和甲醛琼脂糖变性胶电泳后,RNA纯度好,条带清晰,无弥散或降解现象.试验发现,与酶解法相比,用液氮研磨法破碎酿酒酵母菌细胞壁提取总RNA所用的成本低,时间少,产率和纯度高,适用于少量样品RNA的提取.同时,酿酒酵母菌与斑马鱼和小白鼠总RNA电泳图谱表明,三者的"18S rRNA"在条带大小方面差异较小,而"28S rRNA"差异较大.利用分析型离心机测得的酿酒酵母菌两个较大rRNA的沉降系数分别为24.7S和18.1S.研究结果表明了真核生物rRNA种类的多样性.     

苹果害螨室内饲养方法探讨

山楂叶螨和苹果全爪螨均可用育苗器培养的苹果实生苗在室内大量饲养繁殖,营养液可采用改进的Hoagland溶液。试验证明,上述两种叶螨在苹果实生苗、苹果枝条和盆栽苹果树上的产卵量、卵化率、若螨转化为成螨率基本相同;对以上3种寄主上繁殖的苹果叶螨进行毒力测定,其结果基本一致。作者认为,此法可用于杀螨剂的筛选和苹果害螨抗药性测定。     

离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响

 分析离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响 ,并从中筛选正加速度 (forwardaccel eration ,+Gz)高耐力相关基因 .雄性SD大鼠在动物离心机上训练 ,刺激G值从 + 7Gz～ + 12Gz ,每天增加 + 0 5Gz ,第 12d重复 + 12Gz刺激 ,第 13d在离心机上通过测定动物的 +Gz耐力筛选出高耐力动物 ,立即断头处死 ,取全脑和心脏组织 ,分离其mRNA .将此mRNA与未处理动物相应组织来源的mRNA进行抑制性消减杂交 (SSH) ,获得的相关EST(expressionsequencetag ,EST)进行序列测定 ,并经BLAST进行计算机分析 .结果获得 88条与离心机训练相关的EST ,其中 4 4条为已知基因的部分序列 ,4 4条为未知基因的部分序列 .提示离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达有影响 ;这些相关基因可能与 +Gz高耐力的产生有关     

菜白蝶的一种新病毒II．病毒的生物物理、血清学性质

用氯仿-丁醇处理和差速超速离心,再经两次蔗糖密度梯度离心,纯化了这株菜白蝶病毒。病毒沉降系数约132S。在氯化铯中的浮力密度为1．39g／cm3。在相同条件下测定,健康菜白蝶幼虫蛋白沉降系数分别为16S、38S、76S,而被病毒感染的死幼虫则为17S、62S、127S。     

牛肾上腺皮质LDL受体的纯化和抗体的制备

牛肾上腺皮质LDL受体经Triton X-100增溶,DEAE_(32)离子交换柱和LpB Sepharose亲和柱层析,在SDS-PAGE中有三条区带,分别在原点;Mr 160kD;Mr125kD处。进一步用8％SDS-PAGE纯化三个区带的蛋白质分别免疫新西兰大白兔所得的抗体,应用免疫印迹和ECL非同位素标记法可对牛肾上腺皮质和人皮肤纤维细胞膜上的LDL受体进行测定。