抗菌活性放线菌的界面微滴移液互作分离筛选方法

[背景]放线菌是天然产物的宝库,目前应用于临床的天然抗生素有70％来源于放线菌的次级代谢产物.随着细菌对传统抗生素耐药问题的日趋严重,如何从自然生境中高效筛选新型活性放线菌资源并发现新型抗生素成为当前微生物学者面临的重要挑战.通过传统方法筛选活性放线菌不仅费时费力、试剂耗材消耗量大,并且筛选通量非常有限,难以对自然样品...     

西藏仲巴五彩沙漠放线菌资源勘探及生物活性筛选

【背景】细菌耐药性问题日益严峻,新抗生素的研发速度远远落后于临床需要,从特殊生境中挖掘微生物药物资源有望解决以上问题。【目的】勘探西藏仲巴五彩沙漠土壤放线菌多样性并进行生物活性筛选,为发现药用放线菌资源、开发新型抗生素奠定基础。【方法】采用8种分离培养基,通过平板稀释涂布法分离放线菌;根据分离菌株的16S r RNA基因序列同源性分析放线菌多样性;采用PCR技术对分离的放线菌菌株进行II型聚酮合酶(PKS-II)酮缩酶结构域KS、非核糖体多肽合成酶(NRPS)腺苷酸化结构域A、安莎类抗生素生物合成前体3-氨基-5-羟基-苯甲酸合酶(AHBA)保守区、黄素腺嘌呤二核苷酸卤化酶(Halo)保守区抗生素生物合成基因检测;对生物合成基因检测阳性的菌株进行液体发酵,发酵液经乙酸乙酯萃取、菌体经丙酮浸提,获得提取浓缩物样品进行抑菌活性和抗氧化活性筛选。【结果】从4份土样中分离纯化到231株放线菌,分布于7个属,其中链霉菌为优势菌属。68株放线菌的生物合成基因分析显示至少具有1种生物合成基因簇,其中6株同时具有4种生物合成基因簇;进一步的抑菌活性检测显示所有检测的菌株至少表现为对1株检定菌具有抑菌活性,其中8株具有广谱抗菌活性;抗氧化活性筛选结果为13株显示总抗氧化能力阳性,10株具有较好的羟自由基清除能力,3株显示较强的氧自由基清除能力。【结论】西藏仲巴五彩沙漠土壤中含有较丰富的放线菌药用资源,具有从中发现放线菌新菌种和开发新抗生素的潜力。     

塔里木盆地5个生态小区稀有放线菌分离及合成抗生素基因分布

为调查塔里木盆地5个代表性生态小区的稀有放线菌分布,并评估它们产生抗生素类活性物质的潜力。采集塔里木盆地5个生态小区混合土样5份,采用7种培养基分离样品中的稀有放线菌。通过检测分析I型PKS、Ⅱ型PKS、NRPS、APH、HMG-CoA五种抗生素合成相关基因的分布,评估该地区稀有放线菌产生抗生素的潜力。结果表明:(1)基于分子鉴定,经合并重复,共分离得到18种稀有放线菌,属于放线菌的10个属。(2)塔里木河河岸林生态小区土样稀有放线菌分离种类最多(10种),为8个属,塔克拉玛干沙漠塔里木河东部生态小区最少(4种),为4个属。(3)18株稀有放线菌中有9株含有I型PKS基因、4株菌含有Ⅱ型PKS基因、4株菌含有APH基因、3株菌含有NRPS基因,有一株链孢囊菌同时含有I型PKS、Ⅱ型PKS、NRPS、APH 4种基因。5个生态小区稀有放线菌种类较多,并含有较为丰富的与抗生素合成相关的基因。     

放线菌15个属中线型染色体和线型质粒的检测

在属于放线菌目 (Actinomycetales)链霉菌属 (Streptomyces)下的不同种中发现了约 5 0 0 0种抗生素和生理活性物质 ,其作用包括抗细菌、抗真菌、除草、杀虫、抗肿瘤和免疫抑制剂等[1 ] 。在属于放线菌目的红球菌属 (Rhodococcus)和诺卡氏菌属 (Nocardia)中有许多种可以降解多种工业有毒化合物 ,如苯酚、多卤联苯、脂环烃和硝基芳族等[2 ] 。一般细菌的染色体和质粒DNA为环型结构。近年来 ,人们利用脉冲电泳技术发现在链霉菌等少数细菌中存在线型结构的染色体和质粒[3] ,有的巨大线型质粒上还带有完整的抗生素生物合成基因簇[4 ]或降解多…     

聚酮类抗生素生物合成基因簇间的关系

<正>放线菌基因组测序显示基因组中平均有超过20个以上的次生代谢生物合成基因簇,但通常放线菌在试验条件下能检测到的产物仅有2-3个,因此这些次生代谢生物合成基因簇引起了研究者的极大关注,期望通过基因组的挖掘来发现新的代谢产物。除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)产生的16元大环内酯化合物阿维菌素及衍生物被广泛用于防治动植物的线虫类和节肢动物类害虫[1-2]。除虫链霉菌的基因组中,除了阿维菌素生物合成基因簇外,还有其它11种聚酮合成酶类(Polyketide synthesase,PKS)抗生素生物合成基因簇[3]。由于聚酮化合物生物合     

抗生素和干扰素

961780 在厌氧条件下利用屎链球菌产生抗细菌物质[英]/Park, S.C.…//Biosci. Biotechnol. Biochem. -1995,59(10).-1966～1967[译自DBA,1995,14(25),95-14997] 在利用超敏感性试验微生物大肠杆菌BE1186筛选抗生素活性过程中,从朝鲜本国土壤中分离一种含有多个抗生素抗性标记的兼性厌氧菌,经鉴定     

抗生素

910854 新的抗生素-AK-165-3结构中胍基的测定[德]/Ivanova,V.…// Acta Microbiol.Bulg.-1990,25.-16～23[译自DBA,1990,9(15),90-08713]从土壤中分离出吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)111-81,该菌培养时可大量生产抗生素.培养基提取物含7种成分,均具抗菌和杀真菌活性,其主要成分为抗生素-AK-165-3,经MS     

灯台树内生放线菌

放线菌一直是用于生产抗生素最多的微生物类群,临床和农牧业上应用的抗生素有60%以上就是由放线菌生产的[1],但随着从来源于普通土壤环境的放线菌中筛选到新化合物几率的不断下降,人们已经逐步将注意力转向了一些生活在特殊生境的微生物[2]。由于植物内生菌在植物体内经过与植物宿主的长期协同进化,使植物内生菌能够产生结构新颖、功能     

阿克苏高盐咸水滩放线菌分离新策略及系统发育多样性

[目的]探讨高盐咸水滩放线菌的分离新策略,为高盐地区放线菌资源的分离提供理论依据.[方法]以甘油-精氨酸培养基、海藻糖-肌酸培养基、甘油-天冬氨酸培养基、甘露醇-酸水解酪蛋白培养基、干酪素-甘露醇、甘露醇-丙氨酸培养基、壳聚糖-天冬酰胺培养基和高氏一号琼脂培养基8种培养基为基础培养基,采用营养成分十倍稀释法、据土样理化性质模拟原始生态环境、免培养分子技术检测菌株的分离培养基及培养条件指导放线菌可培养以及借鉴半咸水海洋环境放线菌分离培养基等4种策略来优化设计培养基,进行阿克苏高盐咸水滩土样放线菌的分离,并采用细菌通用引物进行16S rRNA基因扩增和序列测定,并构建系统发育树.[结果]共分离到403株,分属于放线菌的8个亚目10个科,Streptomyces、Streptomonospora、Saccharomonospora、Plantactinospora、Nocardia、Amycolatopsis、Glycomyces、Micromonospora、Nocardiopsis、Isoptericola、Nonomuraea、Thermobifida、Actinopolyspora和Actinomadura等14个属.69.96%菌株属于链霉菌亚目(Streptomycineae),9.68%菌株属于链孢囊菌亚目(Streptosporangineae),9株为潜在新种.[结论]4种分离新策略显著地提高了高盐地区放线菌的可培养性,还发现了许多新物种,为放线菌的分离提供了新思路与途径.     

河北九莲城淖尔可培养放线菌多样性及抗菌活性筛选

【目的】勘探干涸的九莲城淖尔土壤放线菌多样性并进行活性筛选,以期发现药用微生物资源,为新抗生素的发现奠定基础。【方法】采用15种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;根据分离菌株的16S rRNA基因序列同源性分析放线菌多样性;发酵液经乙酸乙酯萃取,菌丝体经丙酮浸提,获得提取浓缩物样品;样品通过纸片扩散法进行抗菌活性初筛;抗菌阳性菌株采用PCR技术进行Ⅰ型聚酮合酶(PKS I)KS域、Ⅱ型聚酮合酶(PKS II)KS域和非核糖体多肽合成酶(NRPS)A结构域抗生素生物合成基因的检测。【结果】从11份盐湖土壤样品中分离纯化到251株放线菌,其分布于放线菌纲的10个目15个科31个属,其中优势菌属为链霉菌属和拟诺卡氏菌属;251株放线菌中包括57株耐(嗜)盐放线菌,其优势菌属为拟诺卡氏菌属(22株)和涅斯捷连科氏菌属(15株)。基于16S r RNA基因序列的系统发育分析显示,菌株J11Y309为糖霉菌科潜在新属,菌株J12GA03为分枝杆菌科潜在新种。96株放线菌活性检测结果显示,56株至少对1株检定菌具有抗菌活性,阳性率为58.3%;56株有活性的放线菌中,47株至少含有1种抗生素生物合成基因,其中17株同时具有3种抗生素生物合成基因。【结论】干涸的九莲城淖尔土壤中含有较为丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力。     

海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性及其抗菌活性

【目的】勘探海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性,为发现放线菌新物种和新抗生素奠定基础。【方法】样品经表面消毒后粉碎,用10种不同培养基分离放线菌;通过PCR扩增、测定并比对16S r RNA基因序列,开展放线菌多样性分析;通过发酵、萃取等处理方法得到四类样品,包括发酵原液、乙酸乙酯提取液及水层和菌体的丙酮浸泡提取液;采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选;基于PCR的基因筛选技术探测活性菌株可能存在的NRPS、PKS I、PKS II抗生素生物合成基因。【结果】经形态特征排重,从14种真红树植物样品中共得到放线菌146株,16S r RNA基因序列比对表明它们分布于13个科18个属,其中链霉菌属为优势菌属,菌株S3Cf-2和S3Af-1的16S r RNA基因序列分别与有效发表菌株Couchioplanes caeruleus DSM44103T(X93202)和Microlunatus terrae BS6T(JF806519)的相似率最高,分别为97.45%和97.43%,可能为新物种。对其中46株放线菌发酵样品的抗菌活性检测表明,40株具有抗菌活性,总阳性率为86.96%;活性菌株中,38株菌存在至少一种所探测的生物合成基因簇,阳性率为95%,其中14株同时具有所探测的3种抗生素生物合成基因簇。【结论】海南东寨港真红树植物中存在多样性丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力。     

光还原的硫氧还蛋白对6—磷酸葡萄糖脱氢酶的钝化作用

测定了豌豆(Pisum sativum)幼苗的重组叶绿体中光还原的硫氧还蛋白(Td)对6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)的钝化作用.结果表明,Td在叶绿体G6PDH的光抑制和暗激活中均起重要的调节作用.在其绿色叶片和黄化组织中,G6PDH都存在着两种同工酶,但二硫苏糖醇(DTT)和Td对黄化幼苗中G6PDH活性的影响与叶绿体的明显不同,DTT对黄化幼苗G6PDH的钝化作用和氧化Td的活化作用均低于对叶绿体中的这两种作用.     

抗生素Y4132产生菌的鉴定

自云南省永平县的土壤中分离出一株放线菌Y4132。其细胞壁组份中含有内消旋二氨基庚二酸,全细胞水解物含有马杜拉糖。孢子链单轴着生,卷曲威面包圈形或致密的线团形的假孢囊,也有的为螺旋形。其形态、培养特征和生理生化特性与洋红马杜拉放线菌基本相同,但又有差别,认为是一新变种,定名为洋红马杜拉放线菌云南变种(Acunomadura carmtnata var. yunnanensis nov. var.)。该菌株产生一种红色的蒽环类抗生素(Y4132)。     

内生拮抗放线菌

正植物内生菌是一种潜在的重要微生物资源,它能促进宿主植物生长、增强植物抗逆性及增强其抗病虫害能力等,具有开发成植物生长促进剂和生物农药的巨大潜力[1-2]。相对于植物内生真菌和其他内生细菌的广泛深入研究,有关植物内生放线菌生物学作用及其活性物质的研究相对滞后,仍然有许多领域值得进一步深入研究。随着各生物学领域的不断发展,近年来国内相关研究较活跃[3-6],植物内生放线菌更多独特的生物学特性将会被发现,也将作为新兴的     

放线菌JXJ-45固体发酵产物化学成分研究

通过对放线菌JXJ-45菌株固体发酵物的初步分离纯化,得到3个化合物,由波谱解析鉴定为:2,6-二甲基-2,6-二羟基-庚-4-酮(1),N-[2-(4-羟苯基)-乙基]乙酰胺(2),熊果苷(3).化合物2首次在放线菌中发现,化合物3首次在微生物中发现,是国际公认的高效祛斑美白剂.     

假诺卡氏菌科的分类学研究进展*

假话卡氏菌科是一类进化上相近、形态各异、胞壁肽聚精含有Meso－－DAP（内消族二氨基庚二酸）、全细胞水解液中含有半乳糖和阿拉伯糖、不含枝菌酸的放线菌[1-3]。该科的许多成员都能产生重要的生物活性物质,见表1[4],包括抗生素、酶类、维生素等。其中如红霉素、利福霉素等已商业化,产生了巨大的社会和经济效益。在当今的生物活性物质筛选中,这类放线菌被看作是最有希望获得新的抗生素、酶制剂等生物活性物质的资源菌;此外,该科在环境污染的治理上也有广阔的前景,如假诺卡氏菌属的一些种可以将工业上大量产生的甲基硫化物分解为无…     

医药上的应用

抗生素和干扰素950954利用原生质体融合筛选红霉素产生菌[俄]/Kiric—heako.N.V.…∥Anltiblot.Khimioter。.一1993.38(6).一3～8[译自DBA,1994,13(:t6),94—091073 ’ 研究了接合和原生质体融合,以获得大量产红蟊素的重组菌8accharopolyspor口erythraea。用亚硝基脏处理制备菌株3和5突变株,该菌株稳定,其抗生素生产水平近于亲株。在接合和原生质体融合后比较了重组频率。表明后一种方法可获得较高的频率。用PEG一4000诱导原生质体融合,井_暴露在UV辐射(80%致死剂量)下刺激重组产生.可以轻微增加再生比率,提高抗生素生产水平。未处理…     

放线菌来源活性天然产物发现研究进展

放线菌(Actinomycetes)是抗生素等活性天然产物的重要来源，在临床治疗病原菌感染等重大疾病方面发挥着重要作用。由于抗生素滥用等原因导致临床上出现的以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)等为代表的耐药病菌的种类和数量急剧增加，对人类生存造成了重大威胁。结合现代生物技术进展，加大放线菌来源新抗生素的开发力度刻不容缓。本文对新时期放线菌来源抗生素的发现现状、基于生理操作和基因操作的放线菌来源天然产物挖掘的技术方法等进行综述，以期对放线菌来源活性天然产物的发现提供借鉴。     

质粒研究与载体构建

930006由嗜酸乳酸杆菌TK8912的质粒产生的细■素麓其免疫性[英3/Kanatani,K.…/Biosci.Bio—teChnol Biochem.一1992,56(4).-648"-'651[译自DBA,1992,11(13),92-07238] 本文提供的一些数据表明质粒pLAl03与嗜酸乳酸杆菌(L口clD6口ci ZZ”8 acidopliilus)TK8912产生细菌素有关,与该菌免疫性也有关。该菌产生一种抗菌物质,acidocin.8912,可抑制一些乳杆菌或乳球菌。在MRS肉汤中,acidocin一8912的形成量在30℃最高。该物质对热处理(120℃,20分钟)稳定,但易被蛋白酶钝化。消除pLAl03后,菌体就不产生acidocin一8912(Acd‘)和寄主免疫性…